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壮药假烟叶急性毒性试验研究



全 文 :△基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目:桂科重 1355001
- 4 - 2
作者简介:黄 鑫(1982 -),男(汉族),广西横县,广西壮族自治区
民族医药研究院助理研究员,硕士学位,主要从事中药,民族药药理
研究工作。
* 通讯作者:黄瑞松(1958 -)男,主任中药师,从事中草药化学成
分和质量标准研究。Tel:0771 - 3130064,hrs. 3130064@ 163. com
壮药假烟叶急性毒性试验研究△
黄 鑫 杨增艳 陈少锋 赵湘培 黄瑞松*
(广西壮族自治区民族医药研究院,广西 南宁 530001)
摘 要:目的:研究壮药假烟叶的急性毒性作用。方法:采用最大给药量法,按照《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原
则》附录 II中要求的指征进行观察,并每 7d记录体重。结果:小鼠灌胃给药可测得 LD50 值为 273. 7g /kg,95%置信区间为
252. 71 ~ 296. 43g /kg,相当于人临床拟用日剂量的 120 倍。结论:壮药假烟叶的临床用药在一定剂量范围内,是比较安全
的。
关键词:假烟叶;小鼠;最大给药量
中图分类号:R291. 8 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2016)05 - 0039 - 02
假烟叶为茄科植物假烟叶树 Solanum erianthum D.
Don,全珠入药。生于荒山荒地灌丛中,广西各地均有分
布,我国四川、贵州、云南、广东、福建、台湾等省也有分布。
性味苦、辣,温;有毒;功用:调龙路、火路,祛风毒,消肿痛,
收敛止血。用于痛风、痹病,跌打损伤,小儿腹泻,子宫脱
垂,外伤出血,痈肿,湿疹[1]。本实验通过对小鼠灌胃给
药,观察假烟叶的急性毒性。实验结果报告如下。
1 实验样品与材料
1. 1 药材:壮药假烟叶,采自广西隆安县龙虎山,经广西
民族医药研究院黄瑞松主任药师鉴定为茄科植物假烟叶树
Solanum erianthum D. Don. 的茎叶。假烟叶水提液:取假烟
叶药材 2Kg,切断,加 10 倍量的水煎煮两次,每次 1h,过滤,
合并滤液,滤液浓缩到浓缩液(10g /mL)备用。
1. 2 实验动物:昆明小鼠,SPF 级,雌雄各半,18 ~ 22g,由
广西医科大学实验动物中心供应,许可证号:2015A075,雌
性未产无孕,自由摄食和饮水,室温保持 18 ~ 22℃ ,相对
湿度 40% ~70% ,实验前适应 3d。
2 方法结果
2. 1 分组方法:小鼠购入后适应期经观察未见异常反应,
饮食正常。按性别采用按体重分层随机分配的方法将小鼠
分为对照组和受试组,每组 10 只,雌雄各半,随机编号,用
苦味酸在小鼠不同部位做标记进行区分。
2. 2 实验方法:急性毒性实验[2]以改良寇氏法设计,经预
试,分别找出引起动物 0%(Dn)和 100%(Dm)死亡的假烟
叶水提物的剂量。根据预试结果在测得 Dn 和 Dm 剂量范
围内设 4 个剂量组,分别为 400g /mL,320g / mL,256 g / mL,
204. 8g / mL,每组 10 只小鼠,组间剂量比值 1:0. 8,禁食
12h后不禁水,分别灌服不同剂量的受试药物(每只小鼠用
药体积为 0. 4 mL /10g体重)。
2. 3 观察方法:按照《中药、天然药物急性毒性研究技术
指导原则》附录 II对相应指标进行观察,对呼吸系统、运动
功能、惊厥抽搐反应、眼睑指征、心血管指征、唾液分泌、竖
毛、痛觉、肌张力、胃肠指征、皮肤等各个系统和靶器官进行
分析,确定毒性可能涉及的组织、器官和系统。给药后即刻
开始,观察给药当天小鼠有无以上中毒症状。若未出现死
亡,则继续饲养 14d,每 7d 称取体重 1 次。试验结束时脱
颈椎处死小鼠,对心、肝、脾、肺、肾等主要器官进行大体解
剖,当发现器官出现体积、颜色、质地等改变时,则对改变的
器官进行组织病理学检查。
3 结果
与对照组比较,小鼠给药后自发活动减少、倦卧不动、
嗜睡,动物皮毛光泽,无震颤、惊厥、运动失调、流涎、流泪、
流鼻涕、呼吸困难等现象发生。给药 1 小时后开始有小鼠
死亡。给药 7d后观察,假烟叶 3 个剂量组的小鼠都出现死
亡情况,随着用药剂量的增加,小鼠的死亡数及死亡率呈逐
渐上升趋势,详细结果如表 1。存活小鼠的体重增长比较
慢,未见有其他明显异常情况。
经 Bliss法计算,假烟叶小鼠灌胃给药可测得 LD50 值
为 273. 7g /kg,其 95%置信区间为 252. 71 ~ 296. 43g /kg。
表 1 壮药假烟叶水提物急性毒性实验动物死亡结果
组别 n 剂量(g /Kg) 死亡数(只) 死亡率
1 10 400 10 1. 0
2 10 320 9 0. 9
3 10 256 3 0. 3
4 10 204. 8 0 0
4 结语
综合研究结果,从急性毒性看,壮药假烟叶水提液小鼠
灌胃给药可测得 LD50 值为 273. 7g /kg,其 95%置信区间为
252. 71 ~ 296. 43g /kg,相当于人临床拟用日剂量的 120 倍
(文献有效剂量为 15g 生药 /60kg 体重[3])。因此,壮药假
烟叶临床用药在一定剂量范围内,比较安全。
参考文献
[1]丹阳,唐赛春,等. 广西茄科药用植物资源调查[J]. 广
州中医药大学学报,2012,1(29):75 - 81.
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出版社,1995,248 - 251.
[3]钟鸣,韦松基.常用壮药临床手册[M].南宁:广西科学
技术出版社,2010,62.
2016 年 3 月 21 日收稿
△基金项目:国家自然科学基金(81173361、81270051、81473451)
作者简介:依香叫,女,在读硕士研究生。
* 通讯作者:裴凌鹏,男,1976 年生,医学博士,主要研究方向:民
族药与临床学。E - mail:lppei@ hotmail. com 电话:13520801809。
民族药刺老苞提取物对骨质疏松症小鼠微量元素含量的影响△
依香叫 王萌萌 裴凌鹏*
(中央民族大学 中国少数民族传统医学研究院,北京 100081)
目的:探讨民族药刺老苞对骨质疏松症模型小鼠胫骨微量元素的影响。方法:将 60 只昆明小鼠随机分成正常对照组、去势
模型组和刺老苞提取物高、中、低(10 mg. kg -1、20 mg. kg -1、30 mg. kg -1)剂量组,每组 12 只。分别灌胃相应药物,每日 1
次,连续 12 周后运用电感耦合等离子体质谱法(ICP - MS)测定灌喂刺老苞提取物小鼠胫骨中 Ca、Mg、P、Mn、Cu、Se 和 Zn7
种微量、常量元素的含量。结果:经灌喂刺老苞提取物的骨质疏松症小鼠模型胫骨中上述 7 种元素含量均有不同程度的提
高,呈现一定的剂量关系。结论:这为利用民族药刺老苞治疗骨折不愈、骨质疏松疾病从微量元素的角度提供有用数据。
关键词:刺老苞提取物;微量元素;骨质疏松症
中图分类号:R29 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2016)05 - 0040 - 03
骨质疏松症是一种代谢性疾病,基本特征是骨组织中
骨量的减少和骨微细结构退化,由此造成骨的脆性增加和
极易发生骨折,从天然植物中发现有效药用成分对抗骨质
疏松症的发生,无论是基础研究还是临床应用都显得尤为
重要[1]。民族药用刺老苞为五加科木属植物楤木(Aralia
echinocau Iis Hand. Mazz)及其变种白背叶木(Var. nuda Na-
kai),其根皮或茎皮可入药,始载于《本草拾遗》[2]。原植
物楤木主要分布于华北、华中、华东、华南和西南各省区,生
于山地林缘、林中或路旁灌木丛中,药材块片状或槽状,气
微香,嚼之带粘液性,味辛,性平。归胃、肝、肾经,功能滋阴
健肾,祛风湿,壮筋骨,散瘀血,消肿毒,可用于风湿痹痛、跌
打损伤、骨折等治疗[3]。由于人类健康和防治疾病的实际
需要与生物无机化学的推动,以及毒理学与环境污染的日
益深入,近年来民族医药对药材中无机成分尤其是微量元
素的研究与探讨日渐深入[4 - 5]。电感耦合等离子体质谱法
(ICP - MS)是在传统元素分析方法的基础上发展起来的一
种更加完善的元素分析法。近年来,ICP - MS 测定生物体
组织中微量元素分析方法的不断发展,极大地推动了微量
元素与疾病和健康之间的关系的研究[6 - 8]。
本文采用 ICP - MS 测定民族药刺老苞治疗去势小鼠
胫骨中锰、磷、铜、锌、钙、镁、硒等 7 种微量元素的含量,为
传统民族医药的开发提供一定的参考。
1 实验部分
1. 1 主要仪器及设备:Agilent 7500ce 电感耦合等离子体
质谱仪。雾化器:Babington高盐雾化器;雾化室:石英双通
道,Piltier半导体控温于 2 ± 0. 1℃;矩管:石英一体化,2. 5
mm中心通道;样品锥:Ni 材质锥;分析模式:全定量;氧化
物 < 0. 6%,双电荷 < 3%。
1. 2 试剂:标准贮备液:10 μg·mL -1混合标准溶液(含有
待测的 4 种元素),Se,P 标准贮备液。标准溶液系列由标
准贮备液逐级稀释配得,介质为 5% Merk级硝酸;
内标溶液:10 μg·mL -1铑、铼标准溶液,稀释为 1μg·
mL -1,介质为 5% Merk级硝酸;
硝酸(HNO3):优级纯(Merck);
调谐溶液:10 ng·mL -1锂、钴、钇、铈、铊混合标准溶液
(2%硝酸介质)(Agilent,Part#5184 - 3566) ;
超纯水(18. 2 MΩ),由 Milli - Q超纯水系统制得,用于
配置所有标准溶液与样品溶液。
1. 3 灌喂材料与动物模型 :样品:刺老苞(2015 年 5 月采
于湖北恩施地区,人工种植品种)药材经北京中医药大学
中药学院中药生药系杨瑶珺教授鉴定,并保存在中央民族
大学中国少数民族传统医学研究院民族药标本馆。
将 60 只 35 ± 3 g 昆明雌性小鼠(购自北京维利斯通实
验动物养殖中心)随机分成 5 组,每组 12 只。分别为正常
对照组,给予 5 mL·kg -1生理盐水灌胃;去卵巢骨质疏松
模型组,给予 5 mL·kg -1生理盐水灌胃;刺老苞提取物高、
中、低剂量组,去势后再进行 30 mg·kg -1、20 mg·kg -1、10
mg·kg -1刺老苞提取物灌胃,给药量为 5 mL·kg -1。1 次 /
d,连续 12wk。12wk后小鼠经戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻
醉后,从心脏抽血处死,取双侧胫骨除净附着肌肉和软组
织,称重研碎,然后进行灰化 2 h形成白色骨粉样品。
1. 4 样品处理:精确称取 0. 0500g 样品,用 5% Merk 级硝酸
定重至 50mLPET塑料瓶中混匀。随同样品进行空白试验。
1. 5 待测元素同位素的选择及 ICP - MS 仪器参数:在优
化实验条件下,对样品消解液进行分析测试,按表 1 选择待
测元素的同位素钙、磷、镁、铜、锌、硒、锰元素以 103Rh 作
为内标进行本实验的测定。
04 中国民族医药杂志 2016 年 5 月第 5 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2016.05.026