全 文 ：中华补血草的组织培养和快速繁殖体系的优化
陈世华 , 张霞 , 赵彦修 , 张 慧 　(山东师范大学生命科学学院 ,山东济南 250014)
摘要　以中华补血草为试材 , 通过优化激素配比证明:适宜补血草诱导植株再生的一次成芽培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1
mg/L;对诱导再生植株生根激素的筛选结果表明 ,最适生根激素为 IBA ,其适宜浓度为 0.1mg/L;生根培养基为MS+IBA 0.1mg/ L。
关键词　中华补血草;叶片;茎;组织培养;
中图分类号　Q943.1　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2006)19-4885-02
Optimized System of Tissue Culture , Rapid Propagation of Limonium sinense
CHEN Shi-hua et al　(College of Life Science , Shandong Normal University , Jinan , Shandong 250014)
Abstract　We optimized the tissue culture and rapid propagation system of Limonium sinense.The rapid propagation and large amount of adventitious
buds from explants leaf or pedicels in a short period can be realized only in MS medium with 0.5 mg/ L6-BA + 0.1 mg/L IBA.The optimized medium
for root induction was MS + 0.1 mg/L IBA.
Key words　Limonium sinens;Optimization;Tissue culture
　　中华补血草[ Limonium sinense(Girard)Kuntze]属蓝雪科 、
补血草属多年生草本植物。该植物耐盐 、耐湿 、耐干旱 、耐瘠
薄 ,可在沙壤地 、盐碱地和滨海滩涂等盐渍化程度较高的土
壤中生长。既可用作鲜切花同时又是理想的天然干花材料。
中华补血草还是药用植物 ,具有祛湿 、清热 、止血 、温中健脾 、
滋补强壮之功效。研究中华补血草组织培养技术 ,有助于建
立适宜于药用 、干鲜切花等不同用途的优良品种培育及再生
快繁体系 ,也可在此基础上建立补血草的遗传转化技术平
台 ,为利用补血草进行植物耐盐基础研究奠定基础。补血草
属的个别物种的组织培养虽有报道[ 1-3] ,但尚未见到关于中
华补血草的报道 。并且已有的报道中 ,多选用幼嫩花序 、种
子或茎(带腋芽的)为培养材料 ,有较大的局限性 ,芽分化效
率也并不理想。笔者对该植物的组织培养进行了优化 。
1　材料与方法
1.1　培养条件　温度 20～ 25 ℃,开始诱导愈伤组织时暗培
养;诱导不定芽分化初期光照 8 h/d ,光照强度 1 000～ 1 500
lx;不定芽分化时光照 12 h/d ,光照强度 2000 ～ 3000 lx。培养
基中琼脂 8g/L ,糖 30 g/L , pH值 5.8。
1.2　外植体材料的灭菌[ 4-6] 　选取中华补血草幼嫩的地上
部叶片或茎为材料 ,自来水流水冲洗 5 min ,用 70%酒精消毒
30 s , 0.1%升汞溶液消毒 7～ 10min ,无菌水冲洗 4～ 5次。
1.3　芽的诱导　灭菌处理的外植体材料在无菌条件下将叶
片切成长 1.0～ 1.5 cm的小段 , 接种于含激素的MS芽诱导
培养基中 ,芽诱导培养基设不同种类的生长素 、细胞分裂素
的组合及不同的生长素 、细胞分裂素浓度组合(表 1)。实验
中 ,50块实验材料(外植体块)为 1个处理 ,接种到含不同激
素的芽诱导培养基中 。
1.4　不定芽的生根诱导　在 1/2MS 、MS基本培养基分别添
加不同浓度的 IBA 、IAA或NAA ,探讨对中华补血草不定芽
生根的影响 。实验处理组合见表 2。
2　结果与分析
2.1　不同激素组合及浓度对诱导不定芽分化的影响　实验
结果表明(表 1):MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L培养基上
作者简介　陈世华(1964-),男 ,山东高安人 ,副教授 ,从事植物耐逆分
子生物学研究。
收稿日期　2006-06-19
芽诱导效果最佳 。该实验组中 ,外植体平均分化率为 94%,
培养至 6 d ,叶片或茎段两端开始产生愈伤膨大 ,多数培养材
料第 10天开始出现具有致密芽点的浅黄绿色粒状愈伤组
织 ,15d左右出现不定芽 , 20 d后逐渐分化出长有叶片的小
芽 ,30d左右每块叶片或茎段外植体可产生大量的丛生芽 ,
最少的可产生 60多个不定芽 ,多者达 200个不定芽 ,平均出
芽率为每块培养材料 110株(图 1)。
　　表1　　　　各处理对中华补血草外植体分化不定芽的影响
6-BA
mg/ L生长素
浓度
mg/ L
外植体
分化数
%
分化不
定芽数
个
芽生长状况
0.5 IAA 0 30 　6.3 绿、正常
0.1 56 28 绿、健壮
0.2 66 34 绿、健壮
0.3 60 59 绿、生长迟缓
0.4 60 55 绿、生长迟缓
0.5 56 36 黄、弱、多枯死
NAA 0 36 15 绿、健壮
0.1 86 78 绿、健壮同时出现不定根的分化
0.2 88 76 绿、健壮同时出现不定根的分化
0.3 76 60 绿、生长迟缓同时出现不定根的分化
0.4 74 56 绿、生长迟缓同时出现不定根的分化
0.5 68 40 绿、生长迟缓同时出现不定根的分化
IBA 0 38 12.5 黄、弱、多枯死
0.1 94 110 绿、健壮
0.2 90 85 绿、健壮
0.3 87 80 绿、健壮
0.4 87 80 绿、健壮
0.5 79 60 绿、健壮
2.2　不定芽增殖　在MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1 mg/L芽
诱导培养基上 ,可一次性诱导产生不定芽 ,不需要愈伤组织
诱导 、不定芽诱导和不同培养基的培养过程 。不定芽分化过
程中外植体只出现较短时间愈伤阶段 ,随后很快分化出芽
点。从外植体诱导出愈伤组织到不定芽分化形成小植株只
有 20d左右。外植体培养 25d左右即可发育形成大量带有 2
～ 4片叶的不定芽 ,且不定芽生长健壮 。将丛生的不定芽小
心分开转到生根培养基上壮苗培养 10～ 15 d即可获得大量
健壮小苗 , 切剩下的较小的不定芽和未分化好的微小不定
芽可转接到新的不定芽诱导培养基上继续用于不定芽的分
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2006 ,34(19):4885-4886　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　孙红忠　责任校对　孙红忠
化扩繁。
注:A培养 30d的外植体上分化的不定芽;B培养 5 d的外植体愈
伤分化情况;C、D 示腐殖土和沙培介质中移栽组培苗的生长
情况:左侧分别为腐殖土中移栽组培苗地上和地下部分的生
长情况 ,右侧是沙培介质中移栽组培苗生长情况。
图1　优化培养基上不定芽的分化及不同的移栽介质对组培苗生
长的影响
2.3　植物生长素对诱导不定芽生根的影响　选用 1/2MS 、
MS基本培养基分别添加 IBA 、IAA或NAA ,对 3种激素的不
同浓度进行生根比较 ,实验表明 ,MS培养基较 1/2MS培养基
更利于不定芽的生根。表 2列出了不定芽在MS基本培养基
分别添加 IBA 、IAA或NAA的生根情况 ,由表 2可看出:植物
激素的种类和浓度对中华补血草不定芽的生根影响很大。3
种激素中 IAA对再生苗的生根诱导速率最高 ,生根速度较其
他 2种快 2 ～ 4d ,生根率高达 97%(生根培养 22d统计结果),
最适宜浓度为 0.3mg/L;但生长后期不定根上产生侧根的数
量少于添加同浓度的 IBA的生根培养基上的再生苗 ,苗的长
势也弱于在含 IBA的生根培养基上生长的再生苗。3种生长
素中以NAA的生根效果最差 。
2.4　试管苗移栽及管理　生根培养 25 d左右 ,多数试管苗
可长到 4 ～ 6片叶 ,具有 10～ 20条根。此时 ,可将瓶口绑扎物
除去并逐步打开瓶口 ,置于常温下(冬季 15 ℃以上)炼苗 2～
3 d。此后 ,取出苗小心洗净根部的培养基 ,移栽到细河沙土
中 ,移栽初期 ,光线不要太强 ,3～ 5 d后移到光线充足之处。1
周后小苗生长加快 ,没有缓苗期。此后可视培养介质的湿度
浇灌Hogland ,河砂介质同土壤或其他介质相比可较好地避
免移苗初期易出现的霉菌引起的烂苗现象。移栽苗成活率
显著提高 ,可达 93%以上。
　　表2　　　　不同处理对中华补血草不定芽生根的影响
生长素 浓度
mg/ L
不定根诱导率
%
不定根数量　
个　
侧根数量　
个　
生根天数
d
IAA 0.1 18 ＊ 　　7
0.2 64 ＊＊ ＊ 7
0.3 86 ＊＊＊ ＊ 7
0.4 78 ＊＊ ＊ 7
IBA 0.1 86 ＊ ＊ 9
0.2 76 ＊＊＊ ＊＊ 9
0.3 74 ＊＊＊＊ ＊＊＊ 9
0.4 68 ＊＊＊ ＊＊ 9
NAA 0.1 74 ＊ 11
0.2 64 ＊＊ ＊ 11
0.3 64 ＊＊ ＊ 11
0.4 58 ＊ 11
　注:每种处理的生根苗为 50株;不定根诱导率为生根培养 15 d统计
值;侧根数指不定根上产生的侧根数;不定根诱导率=生根苗数/
总苗数(%);生根天数, 从开始生根统计的天数;＊示偶有根发
生 ,数量极少;＊＊1～ 5条,数量少;＊＊＊5～ 10条 ,数量较大;＊
＊＊＊10～ 20条 ,数量很大。
3　结论与讨论
通过优化激素配比证明适宜补血草诱导植株再生的一
次成芽培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L;再生苗
生根诱导培养基的筛选结果表明:最适生根激素为 IBA ,其适
宜浓度为 0.1mg/L;生根培养基为MS+IBA 0.1mg/L。中华
补血草组织培养和快速繁殖体系的建立和优化 ,可实现丛芽
大量增殖 , 短期内即可得到大量再生植株 ,为快繁及遗传转
化奠定了基础 。
参考文献
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(上接第 4880页)
mg/ml 2 , 4-D处理的黄瓜种子(图 3)茎部形成环状畸形细
胞 ,有明显的刺激生长的作用。2.278 mg/ml 2 , 4-D处理的
黄瓜种子(图 4)较为瘦小发黄 ,有明显的抑制生长作用 。
3　讨论
该实验是将黄瓜种子浸泡于药液当中 ,故测定结果比
田间实际抑制作用要强 ,仅供室内测定参考 。
试验结果表明 ,2 ,4-D对黄瓜种子鲜种的抑制作用随浓
度的增加而逐渐增强 ,浓度为 0.133mg/ml时对种子的刺激
生长作用最大 ,且引起明显的茎部畸形 。也就是说 ,如果土
壤中 2 ,4-D的浓度在 0.133 mg/ml左右 ,不但对黄瓜种子的
发芽没有抑制作用 ,反而会有增重和致畸作用 。
参考文献
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　　本刊提示　来稿请用国家统一的法定计量单位的名称和符号 ,不要使用国家已废除了的单位 。如面积用 hm2(公顷)、m2
(平方米),不用亩 、尺 2等;质量用 t(吨)、kg(千克)、mg(毫克),不再用担等;表示浓度的 ppm一律改用 mg/kg 、mg/L或 μl/L。
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