全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１５（０２）：９８～１０１
第一作者简介：李森（１９８２－），男，博士研究生，讲师，研究方向为园
艺植物种质资源利用与创新。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓａｕｌｉｓｅｎ＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：山西省重大科技攻关资助项目（２００８０３１１０１０－１）；山西
农业大学青年基金资助项目（２０１００２）。
收稿日期：２０１４－０９－０４
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５０２０２７
耧斗菜园艺品种与野生华北耧斗菜
亲缘关系的ＳＲＡＰ分析
李 森，李 婷 婷，亢 秀 萍，邢 国 明
（山西农业大学 园艺学院，山西 太谷０３０８０１）
摘 要：以采自山西省沁水县历山等８处植物多样性丰富的山区１０个华北耧斗菜材料和５
个耧斗菜园艺品种为试材，采用ＳＲＡＰ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）分子标记技术进
行了亲缘关系分析。结果表明：从８８对引物中筛选出１７对多态性丰富的引物组合用于ＰＣＲ扩
增，得到扩增条带３５２条，其中多态性条带３０７条，多态性比率为８７．２％。利用ＮＴＳＹＳｐｃ－２．０软
件进行ＵＰＧＭＡ聚类分析，分别得出１５个供试材料与１０个华北耧斗菜材料间的亲缘关系树状
图。１５个供试材料的相似系数为０．６４１６～０．８５７１，聚类结果遵循植物学分类。１０个华北耧斗菜
材料的相似系数为０．７２１８～０．８５７１，生境是影响华北耧斗菜聚类结果的主要因素，地理分布为次
要因素。
关键词：华北耧斗菜；亲缘关系；ＳＲＡＰ分析
中图分类号：Ｓ ６８２．１＋９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）０２－００９８－０４
华北耧斗菜（Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａ）属毛茛科（Ｒａｎｕｎｃ－
ｕａｃｅａｅ）耧斗菜属（Ａｑｕｉｌｅｇｉａ Ｌ．）多年生宿根草本，又称
五铃花、紫霞耧斗，在山西各大山区多有分布［１］。生山
地草坡或林边。根含糖类，可作饴糖或酿酒。种子含
油，可供工业用［２］。滕红梅等［３］在对山西南部野生花卉
种质资源的野外调查中曾提及华北耧斗菜的观赏特性、
花果期及资源状况。华北耧斗菜花型美丽而独特，花期
长，作为一种有很高观赏价值的野生花卉，有广阔的开
发利用前景。
ＤＮＡ分子标记技术已广泛应用于观赏植物亲缘关
系的分析中。明军等［４］利用ＡＦＬＰ技术进行‘美人’梅
与其近缘种亲缘关系研究，结果与形态学、遗传育种学
的结论相符；刘青林等［５］曾用ＲＡＰＤ技术对梅花亲源关
系进行了研究；戴思兰等［６］曾对菊花的起源进行了
ＲＡＰＤ分析；赵宣等［７］用ＲＦＬＰ技术对芍药属牡丹组种
间亲缘关系进行了分析；陈向明等［８］对玫瑰、月季、蔷薇
等蔷薇属植物的亲缘关系进行了ＲＡＰＤ分析；王亚玲
等［９］对几种玉兰亚属植物的ＲＡＰＤ亲缘关系进行了分
析；苏友波等［１０］用ＲＡＰＤ技术对香石竹品种的亲缘关系
进行了分析。
ＳＲＡＰ是一种新型的基于ＰＣＲ的标记系统，由美国
加州大学蔬菜作物系Ｌｉ与Ｑｕｉｒｏｓ博士于２００１年提出，
又叫基于序列扩增多态性（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｒｅｌａｔｅｄ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ＳＲＡＰ）［１１］。现利用ＳＲＡＰ分子标记技术
对耧斗菜园艺品种和山西省野生华北耧斗菜的亲缘关
系进行分析，旨在为华北耧斗菜的种质创新和园艺开发
提供分子水平的依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
２００９年５—７月在山西省沁水县历山等８处植物多
样性丰富的山区采集了华北耧斗菜（Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａ）
的叶片材料１０份（表１），在山西农业大学园艺学院花卉
研究所内采集耧斗菜（Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｃａｅｒｕｌｅａ）园艺品种的叶
片材料５份（表２），用硅胶充分干燥后［１２］，进行ＤＮＡ
提取。
表１ 供试野生华北耧斗菜材料的相关信息
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄ Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａ ｍａｔｅｒｉａｌｓ
编号 采集地 所属区域 经纬度 海拔／ｍ 生境
６ 芮城百梯山 山西南部 ３４．４０９０°Ｎ，１１０．４３３６°Ｅ １ ６５６ 阴坡疏林
７ 沁水历山 山西南部 ３５．４０４２°Ｎ，１１２．０４３３°Ｅ １ ５０２ 阴坡疏林
８ 陵川王莽岭 山西南部 ３５．６７７３°Ｎ，１１３．５７０３°Ｅ １ ２０４ 林缘
９ 陵川王莽岭 山西南部 ３５．６７７８°Ｎ，１１３．５７０５°Ｅ １ ４２０ 阴坡疏林
１０ 陵川王莽岭 山西南部 ３５．６７８２°Ｎ，１１３．５７１０°Ｅ １ ６０８ 阴坡疏林
１１ 吕梁庞泉沟 山西中部 ３７．２４９０°Ｎ，１１２．１５３６°Ｅ １ ７８３ 阴坡疏林
１２ 宁武情人谷 山西中北部 ３８．７９８９°Ｎ，１１２．０２８１°Ｅ １ ７８１ 阴坡裸岩
１３ 五台山南山寺 山西中北部 ３８．９８１８°Ｎ，１１３．５７３６°Ｅ １ ６１９ 阴坡裸岩
１４ 浑源悬空寺 山西北部 ３９．６５９１°Ｎ，１１３．７０８９°Ｅ １ ２３２ 阴坡裸岩
１５ 天镇张家河 山西北部 ４０．３７９９°Ｎ，１１４．２７５６°Ｅ １ ４０８ 阴坡疏林
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北方园艺２０１５（０２）：９８～１０１ ·生物技术·
表２ 供试耧斗菜园艺品种
Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ’ｌｉｓｔ ｏｆ Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｃａｅｒｕｌｅａ
编号 所属系列 品种名 花色 来源
１ 八音鸟 知更鸟 玫瑰红白双色 美国泛美种子公司
２ 八音鸟 金丝雀 纯淡黄色 美国泛美种子公司
３ 八音鸟 白睑鸟 蓝白双色 美国泛美种子公司
４ 八音鸟 夜莺 淡紫白双色 美国泛美种子公司
５ 天鹅 薰衣草 玫瑰红白双色 美国泛美种子公司
１．２ 试验方法
１．２．１ ＤＮＡ提取 采用改良ＣＴＡＢ法进行ＤＮＡ的提
取［１３］。取叶片于液氮中研磨后转入２．０ｍＬ离心管中，
加ＣＴＡＢ提取液于６５℃水浴４５ｍｉｎ。用等体积Ｔｒｉｓ饱
和酚和氯仿／异戊醇（２４∶１）抽提１次，氯仿／异戊醇
（２４∶１）抽提２次，充分摇匀后离心。取其上清液加入异
丙醇沉淀ＤＮＡ，用无水乙醇洗涤１次，洗涤２次。加
ＲＮａｓｅ酶于３７℃水浴２ｈ，等体积Ｔｒｉｓ饱和酚和氯仿／异
戊醇（２４∶１）抽提１次，氯仿／异戊醇（２４∶１）抽提１次。
用无水乙醇和７０％乙醇各洗涤１次，无菌水溶解。用
１％的琼脂糖凝胶检测ＤＮＡ质量。
１．２．２ ＳＲＡＰ反应 引物序列及反应程序参照Ｆｅｒｒｉｏｌ
等［１４－１５］的方法，反应程序为９４℃５ｍｉｎ，１个循环；９４℃
１ｍｉｎ，３５℃１ｍｉｎ，７２℃８０ｓ，５个循环；７２℃１０ｍｉｎ，９４℃
１ｍｉｎ，５０℃１ｍｉｎ，７２℃８０ｓ，３７个循环；最后７２℃延
伸１２ｍｉｎ。反应体系为２０μＬ，包括１０×Ｔａｑ ｂｕｆｅｒ（含
Ｍｇ２＋）３μＬ，ｄＮＴＰ（２．５ｍｍｏＬ／Ｌ）１μＬ，正反向引物
（１００μｍｏＬ／Ｌ）各１．５μＬ，模板ＤＮＡ（５０ｎｇ／μＬ）１．５μＬ，
ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．３μＬ（２．５Ｕ／μＬ）和无菌水１１．２μＬ。
试验所用引物（表３）由上海生工合成，其余试剂均购自
博迈德公司。扩增产物进行垂直板变性聚丙烯酰胺凝
胶电泳（６％）［１６］。变性程序为９５℃５ｍｉｎ后４℃保存，
６５Ｗ恒功率电泳２．０～２．５ｈ至溴酚蓝移到凝胶底部结
束后进行ＡｇＮＯ３染色。
表３ ＳＲＡＰ引物序列
Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＳＲＡＰ
正向
引物
正向引物序列
反向
引物
反向引物序列
ＭＥ１ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡ－３′ ＥＭ１ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＴ －３′
ＭＥ２ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＣ－３′ ＥＭ２ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣ－３′
ＭＥ３ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＴ－３′ ＥＭ３ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣ－３′
ＭＥ４ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＣ－３′ ＥＭ４ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＡ－３′
ＭＥ５ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＧ－３′ ＥＭ５ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＣ－３′
ＭＥ６ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＡＡ－３′ ＥＭ６ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＣＡ－３′
ＭＥ７ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＣ－３′ ＥＭ７ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＡ－３′
ＭＥ８ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＧＣ－３′ ＥＭ８ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＴＧ－３′
ＥＭ９ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＧＡ－３′
ＥＭ１０ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＧ－３′
ＥＭ１１ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＣＡ－３′
１．３ 数据分析
每个引物组合的多态性比率（％）＝引物组合扩增
的多态性条带数／总条带数×１００。采用Ｊａｃｃａｒｄｓ相似系
数，使用ＮＴＳＹＳ－ｐｃ ２．０软件，非加权组平均法（ＵＰＧＭＡ）
聚类。相似系数计算公式为：Ｓｉｊ＝ａ／（ａ＋ｂ＋ｃ），其中，
ａ表示２份材料共有带数，ｂ表示ｉ材料特有的条带数，
ｃ表示ｊ材料特有的条带数。
２ 结果与分析
２．１ ＳＲＡＰ引物的扩增结果
用筛选出的１７个引物组合对１５个供试材料进行
ＳＲＡＰ扩增，得到扩增条带３５２条，每个引物组合扩增的
ＤＮＡ带数为１３～３１条，平均每个引物组合扩增２０．７１条
带，其中每个引物组合扩增出的多态性条带数为１０～２７
条，１７个引物组合共扩增出３０７条多态性条带，多态性比
率为８７．２％，其中单个引物组合的多态性比率为７１．４％～
９６．０％。可见１５个供试材料的多态性较高。
表４ １７对引物产生的多态性
Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ １７ｐａｉｒｓ ｐｒｉｍｅｒｓ
组合编号 组合名称 总条带数 多态性条带数 多态性比率／％
３ ＭＥ－１／ＥＭ－３ １３ １１ ８４．６
６ ＭＥ－１／ＥＭ－６ １５ １１ ７３．３
１０ ＭＥ－１／ＥＭ－１０ ２３ ２０ ８７．０
１１ ＭＥ－１／ＥＭ－１１ １５ １４ ９３．３
１６ ＭＥ－２／ＥＭ－５ ２５ ２２ ８８．０
２９ ＭＥ－３／ＥＭ－７ ３１ ２７ ８７．１
３２ ＭＥ－３／ＥＭ－１０ ２５ ２４ ９６．０
３８ ＭＥ－４／ＥＭ－５ １８ １６ ８８．９
４６ ＭＥ－５／ＥＭ－２ ３０ ２７ ９０．０
４７ ＭＥ－５／ＥＭ－３ １９ １８ ９４．７
５１ ＭＥ－５／ＥＭ－７ ２１ １９ ９０．５
５３ ＭＥ－５／ＥＭ－９ １５ １３ ８６．７
５４ ＭＥ－５／ＥＭ－１０ ２０ １７ ８５．０
６８ ＭＥ－７／ＥＭ－２ １４ １０ ７１．４
７３ ＭＥ－７／ＥＭ－７ ２０ １６ ８０．０
７６ ＭＥ－７／ＥＭ１０ ２６ ２３ ８８．５
７７ ＭＥ－７／ＥＭ－１１ ２２ １９ ８６．３
２．２ 聚类分析
２．２．１ 华北耧斗菜及园艺品种的亲缘关系 １５个供试
材料的相似系数为０．６４１６～０．８５７１。亲缘关系最远的
是八音鸟系列知更鸟（１号）和采自吕梁庞泉沟的华北耧
斗菜（１１号）和天镇张家河的华北耧斗菜（１５号），亲缘关
系最近的是采自吕梁庞泉沟的华北耧斗菜（１１号）和采
自天镇张家河的华北耧斗菜（１５号）。在相似系数为
０．７０的水平上，可以将１５个供试材料聚为二大类。其
中耧斗菜５个园艺品种聚为第一类群；１０个华北耧斗菜
材料聚为第二类群。从聚类结果来看，１５个供试材料的
聚类结果遵循植物学分类，华北耧斗菜与耧斗菜园艺品
种分别聚为两大类群。园艺品种间亲缘关系的远近取
决于花色及所属系列。在第一类群的５个园艺品种中，
１、５号材料为玫瑰红白双色、２号材料为纯淡黄色，均为
暖色系列，其亲缘关系较近；而１、２号材料均属八音鸟系
列，其相似度系数更高，为０．７７６９。３、５号材料为蓝白双
色和淡紫白双色，均为冷色系列，其亲缘关系较近。
２．２．２ 华北耧斗菜的亲缘关系 １０个华北耧斗菜材料
的相似系数（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ，ＧＳ）为０．７２１８～０．８５７１，
遗传距离 Ｄ＝１－ＧＳ，得出材料间的遗传距离为
０．１４２９～０．２７８２。可见，华北耧斗菜材料间有一定的遗
传距离，但不是很大。在相似系数为０．７６的水平上，可
以将１０个华北耧斗菜材料聚为二大类。采自宁武情人
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·生物技术· 北方园艺２０１５（０２）：９８～１０１
图１ 基于ＳＲＡＰ标记获得的１５个供试材料的聚类图
Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｃｈａｒｔ ｏｆ １５ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ
ｔｈｅ ＳＲＡＰ ｍａｒｋｅｒ
谷（１２号）、浑源悬空寺（１４号）、五台山南山寺（１３号）的
３个材料聚为第二类群，剩余材料聚为第一类群。
从华北耧斗菜的聚类结果可以看出，生境是影响聚
类结果的主要因素，地理分布为次要因素。１２、１４、１３号
材料的生境均为阴坡裸岩，聚为第二类群；而剩余材料
的生境为阴坡疏林或林缘，聚为另一类。同时，１２、１４、１３
号材料采自山西省的中北部或北部地区，而剩余材料中
图２ 基于ＳＲＡＰ标记获得的１０个野生华北耧斗菜
材料的聚类图
Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｃｈａｒｔ ｏｆ １０ｗｉｌｄ Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａ
ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ＳＲＡＰ ｍａｒｋｅｒ
除１５号材料采自位于山西北部的天镇张家河外，其余
材料均采自山西中部或南部地区，可见聚类结果与地理
分布也有一定关系。而采自陵川王莽岭３个不同海拔
的８、９、１０号材料虽然聚在第一类群，但是其亲缘关系并
不是最近，可见即使在同一山区，不同海拔的自然条件
也稍有区别，使得该山区植物有较丰富的遗传多样性。
３ 讨论
从１５份供试材料的聚类结果来看，与植物学分类
一致，华北耧斗菜与耧斗菜园艺品种分别聚为两大类
群。花色在园艺品种的聚类中起到了关键作用，如八音
鸟系列冷色和暖色的品种间在遗传背景上也有一定差
别。而八音鸟系列知更鸟与天鹅系列薰衣草虽属于不
同系列，但花色相同，其亲缘关系也较近。
从１０份华北耧斗菜材料的聚类结果来看，材料生
境是影响聚类结果的主要因素。由于不同生境其温度、
水分、光照、土壤等生态因子的区别使得植物产生了丰
富的遗传多样性。采自山西中北部及北部地区的材料
聚为一类，而采自中部及南部地区的材料聚为另一类，
可能也是由于山西南北地区环境气候有一定差异造成
的。而采自陵川王莽岭３个不同海拔的材料虽然聚为
一类，但相似系数并不是很高，可见即使在同一山区，不
同海拔的自然条件也稍有区别，使得该山区植物有较丰
富的遗传多样性。
参考文献
［１］ 朱蕊蕊，杨姗姗，明晓，等．耧斗菜愈伤组织和不定芽诱导的初步研
究［Ｊ］．江西农业学报，２００９，２１（７）：８１－８２．
［２］ 吕晋慧，杨玉芳．山西野生观赏植物种质资源及其利用研究［Ｊ］．山
西农业科学，２００７，３５（６）：１２－１５．
［３］ 滕红梅，姚建信，李鸿俊，等．山西南部野生花卉种质资源调查研究
［Ｊ］．运城学院学报，２００８，２６（２）：４１－４７．
［４］ 明军，张启翔，毛庆山，等．‘美人’梅与其近缘种亲缘关系的ＡＦＬＰ
研究［Ｊ］．园艺学报，２００２，２９（６）：５８８－５８９．
［５］ 刘青林，陈俊愉．梅花亲缘关系ＲＡＰＤ研究初报［Ｊ］．北京林业大学
学报，１９９９，２１（５）：８１－８５．
［６］ 戴思兰，陈俊愉，李文彬．菊花起源的ＲＡＰＤ分析［Ｊ］．植物学报，
１９９８，４０（１１）：１１０－１１６．
［７］ 赵宣，周志钦，林启冰，等．芍药属牡丹组（Ｐａｅｏｎｉａ ｓｅｃｔ．Ｍｏｕｔａｎ）种间
关系的分子证据：ＧＰＡＴ基因的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和序列分析［Ｊ］．植物分类学
报，２００４，４２（３）：２３６－２４４．
［８］ 陈向明，郑国生，孟丽．玫瑰、月季、蔷薇等蔷薇属植物ＲＡＰＤ分析
［Ｊ］．园艺学报，２００２，２９（１）：７８－８０．
［９］ 王亚玲，李勇，张寿洲．几种玉兰亚属植物的ＲＡＰＤ亲缘关系分析
［Ｊ］．园艺学报，２００３，３０（３）：２９９－３０２．
［１０］苏友波，林春，毛静，等．香石竹品种的ＲＡＰＤ标记［Ｊ］．园艺学报，
２００４，３１（１）：１０９－１１１．
［１１］Ｌｉ Ｇ，Ｑｕｉｒｏｓ Ｃ Ｆ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＲＡＰ），Ａ
ｎｅｗ ｍａｒｋｅｒ ｓｙｓｔｅｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｓｉｍｐｌｅ ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ：ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｍａｐ－
ｐｉｎｇ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｂｒａｓｓｉｃａ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，１０７（１）：
１６８－１８０．
［１２］邱英雄，胡邵庆，陈跃磊，等．ＩＳＳＲ－ＰＣＲ技术在桂华品种分类研究中
的应用［Ｊ］．园艺学报，２００４，３１（４）：５２９－５３２．
［１３］张西西，徐进．万寿菊杂交一代遗传多态性的ＳＲＡＰ标记分析［Ｊ］．园
艺学报，２００８，３５（８）：１２２１－１２２６．
［１４］Ｆｅｒｒｉｏｌ Ｍ，Ｐｉｃｏ Ｂ，Ｎｕｅｚ Ｆ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ａ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｐｅｐｏ ｕｓｉｎｇ ＳＲＡＰ ａｎｄ ＡＦＬＰ ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，１０７：２７１－２８２．
［１５］Ｆｅｒｒｉｏｌ Ｍ，Ｐｉｃｏ Ｂ，Ｐａｓｃｕａｌ Ｆｅｍａｎｄｅｚ ｄｅ Ｃｏｒｄｏｖａ，Ｎｕｅｚ Ｆ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉ－
ｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ａ ｇｅｍｐｌａｓｍ ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｑｕａｓｈ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ）ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
ｂｙ ＳＲＡＰ ａｎｄ ＡＦＬＰ ｍａｒｋｅｒ［Ｊ］．Ｃｒｏｐ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，４４：６５３－６６４．
［１６］高丽霞，胡秀．中国姜花属基于ＳＲＡＰ分子标记的聚类分析［Ｊ］．植物
分类学报，２００８，４６（６）：８９９－９０５．
００１
北方园艺２０１５（０２）：１０１～１０３ ·植物保护·
第一作者简介：王芳（１９８０－），女，宁夏吴忠人，硕士研究生，助理研
究员，现主要从事生物农药的研发与利用等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：
ｗａｎｇｆａｎｇｗｆ８０＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：杜玉宁（１９６２－），男，本科，高级农艺师，现主要从事生物
农药研制和蔬菜病虫害防治等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｕｙｕｎｉｎｇ０１＠
１６３．ｃｏｍ．
基金项目：宁夏回族自治区科技攻关资助项目（ＫＧＸ－０９－１０－１０）；宁
夏农林科学院自主研发资助项目（ＮＫＹＱ－１３－０９）；宁夏回族自治
区自然基金资助项目（ＮＺ１４１８６，ＮＺ１３１２２）。
收稿日期：２０１４－１０－２０
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５０２０２８
藜芦碱对枸杞蚜虫室内活性测定及安全性评价
王 芳１，李 文 玲２，刘 畅１，金 徽３，杜 玉 宁１
（１．宁夏农林科学院 植物保护研究所，宁夏 银川７５０００２；２．宁夏吴忠市孙家滩农业综合开发区管理委员会，宁夏 吴忠７５１１００；
３．银川市农业技术推广服务中心，宁夏 银川７５００１１）
摘 要：以枸杞蚜虫为研究对象，采用浸虫法测定藜芦碱对枸杞蚜虫（成虫、若虫）的室内毒
力，采用药害评价法测定藜芦碱对枸杞树生长发育的使用安全性。结果表明：供试药剂０．５％黎
芦碱ＳＬＸ与１％黎芦碱ＴＫＬ对枸杞成蚜的毒力相当，０．５％黎芦碱ＳＬＸ对枸杞若蚜的毒力略高
于１％黎芦碱ＴＫＬ，枸杞若蚜对藜芦碱的敏感性高于枸杞成蚜。黎芦碱制剂对枸杞树的叶片、
花、果实均无药害产生，田间使用安全。
关键词：枸杞蚜虫；藜芦碱；毒力测定；安全性评价
中图分类号：Ｓ ４３６．６３９ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）０２－０１０１－０３
枸杞蚜虫（Ａｐｈｉｓ ｓｐ．）属同翅目（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ）蚜科
（Ａｐｈｉｄｉｄａｅ）［１］，在全国枸杞种植区均有发生，主要危害
枸杞嫩梢、幼果，是枸杞生产中的成灾性害虫。枸杞蚜
虫在宁夏１年约发生１８代左右［２］，年发生代数多，繁殖
能力强，扩散蔓延快，为害时间长，防治难度大，最高可
使枸杞减产２０％左右。目前，枸杞在宁夏的种植面积已
发展至４．６７×１０４ ｈｍ２，约占全国枸杞种植总面积的三分
之一，枸杞产品已出口３０多个国家和地区［３］。随着宁夏
枸杞种植面积的逐年扩增，枸杞蚜虫的危害呈加重趋
势。在枸杞生产中，防治枸杞蚜虫常以化学农药为主，
由于枸杞生长季节长，防治蚜虫次数多，致使农药残留
超标［４－５］，严重破坏了枸杞的品质，危害人体健康，影响枸
杞产区的生态环境，增加了宁夏枸杞进入国际市场的难
度，为此，生产管理部门和广大农户提出了纯植物源制
Ｔｈｅ ＳＲＡＰ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ Ｗｉｌｄ Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａ ａｎｄ
Ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｃａｅｒｕｌｅａ
ＬＩ Ｓｅｎ，ＬＩ Ｔｉｎｇ－ｔｉｎｇ，ＫＡＮＧ Ｘｉｕ－ｐｉｎｇ，ＸＩＮＧ Ｇｕｏ－ｍｉｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ，Ｓｈａｎｘｉ，０３０８０１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ａｍｏｎｇ １０ｗｉｌｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａｆｒｏｍ ８ｍａｉｎ ｍｏｕｎｔａｉｎｓ ｉｎ Ｓｈａｎｘｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ａｎｄ ５ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ Ａｑｕｉｌｅｇｉａｃａｅｒｕｌｅａｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＳＲＡＰ Ｍａｒｋｅｒ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ １７ｐａｉｒ ｐｒｉｍｅｓ ａｍｏｎｇ ８８ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ＰＣＲ，ａｎｄ ３５２ｃｌｅａｒ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｂａｎｄｓ ｗａｓ ａｍｏｕｎｔｅｄ ｔｏ ３０７，ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｒａｔｅ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｗａｓ ８７．２％．Ｔｈｅ １５ｓａｍｐｌｅｓ’ｍａｔｒｉｘ ｏｆ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｏｆ ＮＴＳＹＳｐｃ－２．０，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍｓ ｗｅｒｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｏｒ １５ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ １０ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａ．Ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ １５ｓａｍｐｌｅｓ ｗａｓ ｂｅｔｗｅｅｎ
０．６４１６－０．８５７１，ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｈａｄ ｍｏｒｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｂｏｔａｎｉｃａｌ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ １０
ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａ ｗａｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ０．７２１８－０．８５７１，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｈａｓ ｍｏｒｅ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｑｕｉｌｅｇｉａ ｙａｂｅａｎａ；ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ；ＳＲＡＰ ａｎａｌｙｓｉｓ
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