全 文 ：新疆梨种质资源亲缘关系的 ISSR和 RAPD分析
单江华1 ,李疆2 ,罗淑萍1 ,程 奇3 ,李 超1
(1.新疆农业大学农学院 ,乌鲁木齐　830052;2.新疆农业大学林学与园艺学院 ,新疆农业大学特色果树研究中心 ,乌鲁木齐　830052;
3.塔里木大学植物科技学院 ,新疆阿拉尔　843000)
摘　要:【目的】探讨新疆梨种质资源亲缘关系以及遗传多样性 ,旨在为供试梨资源的分类提供科学依据。【方
法】采用 ISSR和 RAPD分子标记对 48份梨种质资源进行聚类分析和遗传关系研究。【结果】14 条 ISSR引物共
扩增出113条清晰的谱带 , 其中 101条显示多态性 , 平均每个引物扩增出 7.2 条多态性谱带。 19条 RAPD引物
共扩增出163条清晰的谱带 , 其中多态性谱带 138 条 ,平均每个引物扩增出 7.2 条多态性谱带。基于 ISSR和
RAPD两种标记 ,利用 UPGMA分别构建了 48 份梨资源的聚类树状图。 ISSR和 RAPD分别聚类以及两种标记
混合聚类均将 48份梨种质分为 3 类:第 Ⅰ类群中包括 1份种质;第Ⅱ类群中包括 23 份种质;第 Ⅲ类群中包括
24 份种质。【结论】两种标记适合于梨种质资源亲缘关系和遗传多样性分析 , 可为梨资源的开发利用及新品
种的选育提供科学依据。
关键词:梨;种质资源;亲缘关系;ISSR;RAPD
中图分类号:S188;S661.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-4330(2010)09-1714-08
Analysis of Genetic Relationships of Pear Germplasm
Resources in Xinjiang Based on ISSR and RAPD
SHAN Jiang-hua1 ,Li Jiang2 , LUO Shu-ping1 , CHENG Qi3 ,LI Chao1
(1.College of Agronomy , Xinjiang Agricultural University , Urumqi 830052 , China;2.College of Forest
Science and Horticulture , Xinjiang Agricultural University , Urumqi 830052 , China;3.College of Plant Science and
Technology Tarim Univertisy , Alaer Xinjiang 843000 , China)
Abstract:【Objective】The research aimed to discuss the feasibility of classification and systematical
development of pear cultivars by ISSR and RAPD.【Method】The Inter-simple sequence repeat(ISSR)and Random
Amplified Polymorphic DNA(RAPD)molecular markers were used to analyze the genetic relationship of 48 main
pears.【Result】101 polymorphic bands among 113 reproducible DNA bands were amplified by 14 ISSR primers with
an average of 7.2 polymorphic bands per primer , and 138 polymorphic bands among 163 reproducible DNA bands
were amplified y19 RAPD primers with 7.2 bands on average.Using cluster analysis(UPGMA)based on those
polymorphism bands amplified with ISSR and RAPD primers , the 48 accessions were classified into three groups ,
group Ⅰwith 1 accessions , group Ⅱwith 23 accessions , and group Ⅲwith 24 accessions.【Conclusion】The two
molecular markers are suitable for analysis of genetic relationships and genetic diversity of pear.The study will
provide a reference for utilization and new variety selection of pear resources.
Key words:pear;germplasm resources;genetic relationships;ISSR;RAPD
0　引言
【研究意义】梨为蔷薇科(Rosaceae),梨亚科(Pomoideae),梨属(Pyrus L.)植物 ,是世界五大水果之
一[ 1] 。20世纪 50年代中期 ,俞德浚教授在考察新疆后把新疆梨从别的梨种分离出来 ,并在《中国果树
分类学》中确定新疆梨的独立地位 。根据《西京杂记》(晋·吴钧或葛洪著或西汉·刘歆著)“有瀚海梨 ,出
瀚海(今塔里木盆地)北 ,耐寒不枯”[ 2]推算 ,新疆梨的栽培历史至少有 1 400 ～ 2 000 a 。经过上千年的发
展新疆梨资源非常丰富 ,加上近几十年来从国内外引进的品种 ,梨的品种比较混乱。长期以来 ,不同地
收稿日期:2010-05-20
基金项目:国家“十一五”科技支撑项目(2007BAD36B05)(2007BAD36B01-3);新疆维吾尔自治区重大科技专项项目(200731136)
作者简介:单江华(1983-),男 ,湖南人 ,硕士研究生 ,研究方向为分子生物学 ,(E-mai l)jiangs200808@sina.com.
通讯作者:罗淑萍(1962-),女 ,甘肃人 ,教授 ,硕士生导师 ,研究方向为分子生物学及种质资源 ,(E-mail), luoshuping2008@163.com
新疆农业科学　2010 ,47(9):1714-1721
Xinjiang Agricultural Sciences
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
域相互引种栽培 ,致使出现了一些同名异物或同物异名的现象 ,导致品种分类十分混乱。如轮台句句梨
又名白香梨和可克句句梨 。这给种质资源的保存 、育种和生产带来极大不便。常规的分类 ,主要采用形
态指标 ,而形态指标易受环境影响 。因此 ,利用分子生物学手段 ,从分子水平研究地方梨属植物的遗传
背景和亲缘关系是非常必要的 。【前人研究进展】目前 ISSR和 RAPD分子标记被广泛用于李 、梅 、杏 、枇
杷 、椰子和枣等果树亲缘关系 、种质资源分类和遗传多样性分析[ 3～ 6] 。两种标记在梨上的应用也有报道
过。易琼等[ 7]采用 ISSR技术对云南 8个梨品种进行了亲缘关系分析初步揭示了云南主要栽培梨品种
的亲缘关系和丰富的遗传多样性。廖明安等[ 8]利用 RAPD技术对梨进行遗传多样性分析能够把起源不
同的东方梨和西洋梨明显分成两大类。【本研究切入点】新疆梨种质资源在分子水平上的研究比较少。
只有马兵钢等[ 9]应用 RAPD技术对新疆 18份梨品种进行了分析 。研究用两种分子标记方法对 48份新
疆梨种质资源进行聚类和多态性分析 ,为了解新疆梨资源的遗传背景及梨资源利用和育种提供分子生
物学依据 。【拟解决的关键问题】研究以 48份新疆梨种质资源为材料 ,拟采用 ISSR和 RAPD两种分子标
记综合对其亲缘关系和遗传多样性进行分析 ,以期为新疆梨资源的开发利用 、新品种选育提供科学依
据。
1　材料与方法
1.1　材 料
供试 48份梨种质资源于 2008年 5月采自新疆轮台国家果树资源圃 、新疆巴音郭楞州农科所和塔
里木大学果树资源圃 。表 1
表 1　供试样品
Table 1　The sample for analysis
编号
Code
名称　　　　
Names　　　　
编号
Code
名称　　　　
Names　　　　
1 杜梨 25 84-1-15
2 砀山梨 26 84-4-72
3 早酥 27 84-5-58
4 香梨芽变 6号 28 身不知
5 库尔勒香梨 29 市水
6 鸭梨 30 大果水晶
7 红香梨 31 甘泉
8 红香酥 32 绿云
9 库车阿木特 33 晚秀
10 黄酸梨 34 南水
11 褐色句句梨 35 黄金梨
12 沙 02号 36 雅青
13 新梨 7-1号 37 雪新
14 香梨芽变 9号 38 琥珀
15 轮台句句梨 39 玛瑙
16 黑酸梨 40 华山
17 株选 1号 41 洋梨
18 沙 03号 42 雪峰
19 棋盘梨 43 黄冠
20 沙 01号 44 天皇
21 短枝梨 45 西子绿
22 新梨 7-2号 46 爱甘水
23 贡梨 47 新世纪
24 新梨 6号 48 杭青
1.2　方 法
1.2.1　DNA的提取
采用改良的 CTAB法提取梨叶片基因组 DNA[ 10 ,11] ,琼脂糖凝胶电泳检测 DNA质量。
1.2.2　ISSR及 RAPD扩增和检测
引物参照哥伦比亚大学公布的引物序列 ,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。聚合酶链
·1715·9期　　　　　　　单江华等:新疆梨种质资源亲缘关系的 ISSR和 RAPD分析　　　　　　　　　
反应在美国 Bio-Rad PCR仪上进行。经过正交试验分别优化 ISSR和 RAPD反应体系 。
20μL ISSR优化反应体系:1×Buffer ,1.5 mmol/L Mg2+ ,300μmol/L dNTPs ,模板DNA为40 ng , Taq聚
合酶 0.5 U ,引物 0.2μmol/L;PCR扩增程序为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性 50 s , 55 ℃复性40 s , 72℃
延伸 2 min ,循环 35次;最后 72℃再延伸 10 min , 4℃保存。
20 μL RAPD优化体系:10×PCR buffer 2μL ,模板 DNA 40 ng , Taq 聚合酶 0.75 U ,0.2μmol/L 的引
物 , 300 μmol/L dNTPs。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94 ℃变性 45 s , 36 ℃复性 40 s , 72 ℃延伸
2 min ,循环 40 次;72 ℃延伸 10 min , 4 ℃保存 。
PCR扩增产物用 2.0%琼脂糖凝胶 ,1×TAE缓冲体系 ,120 V电压电泳 ,电泳 35 min。0.5 μg/mL溴
化乙锭染色 20 min ,在 BIO-RAD凝胶成像扫描并记录结果。
1.2.3　数据处理与分析
将同一位置上出现条带的记为 1 ,没有出现的
则记为0 ,以Microsoft Excel5.0/95格式保存到Excel
表格的数据库。用 NTSYS-pc V2.02 将二态数据
矩阵根据Nei&Li(1979)[ 12]的方法计算其品种间的
相似系数并按程序 Neighbor-Joining 和 UPGMA(不
加权成对群算术平均法)法进行遗传相似性聚类。
2　结果与分析
2.1　DNA提取结果
采用改良的 CTAB法提取的 DNA 电泳图谱清
晰 ,DNA主带完整 、纯度高 ,能够满足后续分子生
物学试验的要求 。图 1
M:λDNA/ EcoRⅠ +HindⅢ;Marker:λDNA/ EcoRⅠ +HindⅢ
图 1　CTAB法提取的部分梨 DNA电泳
Fig.1　Parts pear results of DNA by
improved CTAB method
2.2　ISSR分析
2.2.1　ISSR扩增的结果
用杜梨从 100条引物中筛选出条带清楚的引物 ,条带>2条的引物进行第二次筛选。第二次筛选
用早酥和库尔勒香梨品种的 DNA为模板进行扩增。选取多态性好 ,条带清晰的引物对全部供试材料进
行PCR扩增。最终确定14条引物用于48份梨材料的遗传多样性分析 。14条引物共扩增出 101条多态
性带 ,每条引物平均有 7.2条多态性带 。引物多态性信息含量变幅 66.6%～ 100%,平均为 89.5%。
表2 ,图 2
表 2　ISSR分析所用的引物序列与扩增结果
Table 2　The primer sequence and the amplified results of ISSR analysis
编号
Code
序列(5′～ 3′)
Sequence(5′～ 3′)
扩增条带数
Number of scored band
多态性带数
Number of polymorphic bands
多态百分率(%)
Polymorphism
807 (AG)8T 8 8 100
810 (GA)8T 8 7 87.5
813 (CT)8T 7 6 85.7
814 (CT)8A 11 10 90.9
818 (CA)8G 8 7 87.5
820 (GT)8C 6 6 100
823 (TC)8C 9 9 100
824 (TC)8G 6 4 66.6
825 (AC)8T 9 9 100
827 (AC)8G 8 8 100
834 (AG)8YT 8 7 87.5
856 (AC)8YA 6 6 100
866 (CTC)6 8 6 75.0
880 (GGAGA)3 11 8 72.7
总计 Total 14 113 101 89.5
　　注:Y =G /C;Note:Y=G / C
·1716·　　　　　　　　　　　　　　　新疆农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　47卷
1～ 48:不同的梨 ,编号同表 1;M:DL2000 DNA marker
1～ 48:Different pear accessions li sted in Table 1;M:DL2000 marker
图 2　引物 834对 48份梨 ISSR-PCR扩增电泳
Fig.2　The ISSR-PCR amplification patterns by primer 834 on 48 pear accessions
2.2.2　ISSR遗传相似性分析
计算 14条 ISSR引物产生的 101条 DNA片段的遗传相似系数(GS),48份梨种质两两间的相似系数
分布在 0.51 ～ 0.93。其中洋梨和天皇相似系数最大为 0.93 ,亲缘关系最近 ,遗传相似程度最高;杜梨和
天皇的相似系数最小为 0.51 ,遗传距离最远 ,遗传相似程度最低。
2.2.3　基于 ISSR标记的聚类分析
根据 ISSR标记计算的遗传相似系数矩阵 ,按 UPGMA法构建立材料间的遗传关系聚类 。从 ISSR聚
类图来看 ,以相似系数 0.58为标准 ,可将供试的 48份梨种质划分为 3大类群。图3
第一大类群包括 1份种质:杜梨 。
第二大类群包括 23份种质:砀山梨 ,早酥 ,香梨芽变 6号 ,库尔勒香梨 ,鸭梨 ,红香梨 ,红香酥 ,库车
阿木特 ,黄酸梨 ,褐色句句梨 ,沙 02号 ,新梨 7-1号 ,香梨芽变 9号 ,轮台句句梨 ,黑酸梨 ,株选 1号 ,沙
03号 ,棋盘梨 ,沙 01号 ,短枝梨 ,新梨7-2号 ,贡梨 ,新梨 6号 。第二大类群又可以细分为三亚类;以早
酥 ,砀山梨 ,鸭梨 ,贡梨为第一亚类;以沙 01号 ,短枝梨为第三亚类;其余组成第二亚类。
第三大类群包括 24份种质:84-1-15 ,84-4-72 ,84-5-58 ,身不知 ,市水 ,大果水晶 ,甘泉 ,绿云 ,
晚秀 ,南水 ,黄金梨 ,雅青 ,雪新 ,琥珀 ,玛瑙 ,华山 ,洋梨 ,黄冠 ,天皇 ,西子绿 ,爱甘水 ,新世纪 ,杭青。第三
大类群有可以分为三亚类;第一亚类以雪峰单独成类;以 84-1-15 ,84-4-72 ,84-5-58 ,市水 ,大果
水晶 ,甘泉 ,绿云 ,黄金梨 ,雅青 ,晚秀 ,南水 ,身不知和爱甘水组成第二亚类;第三亚类包括雪新 ,琥珀 ,玛
瑙 ,华山 ,洋梨 ,黄冠 ,天皇 ,西子绿 ,新世纪 ,杭青。
2.3　RAPD分析
2.3.1　RAPD扩增结果
用杜梨从 140条引物中筛选出条带清楚的引物 ,条带>2条的引物进行第二次筛选。第二次筛选
用早酥和库尔勒香梨品种的 DNA为模板进行扩增。选取多态性好 ,条带清晰的引物对全部供试材料进
行PCR扩增。最终确定19条引物用于48份梨材料的遗传多样性分析 。19条引物共扩增出 138条多态
性带 ,每条引物平均有7.2条多态性带 。引物多态性信息含量变幅 62.5%～ 100%,平均为 85.7%。表
3 ,图 4
2.3.2　RAPD遗传相似性分析
计算 19条 RAPD引物产生的 138条 DNA 片段的遗传相似系数(GS), 48份梨种质两两间的相似系
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数分布在 0.54 ～ 0.90。其中沙 01号和短枝梨相似系数最大为0.90 ,亲缘关系最近 ,遗传相似程度最高;
杜梨和新世纪的相似系数最小为 0.54 ,遗传距离最远 ,遗传相似程度最低 。
·1718·　　　　　　　　　　　　　　　新疆农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　47卷
2.3.3　基于 RAPD标记的聚类分析
根据 RAPD标记计算的遗传相似系数矩阵 ,按 UPGMA法构建材料间的遗传关系聚类 。从 RAPD聚
类图来看 ,以相似系数 0.64为标准 ,可将供试的 48份梨种质划分为 3大类群。图5
第一大类群以砧木用杜梨为一类。
第二大类群包括 23份种质:砀山梨 ,早酥 ,香梨芽变 6号 ,库尔勒香梨 ,鸭梨 ,红香梨 ,红香酥 ,库车
阿木特 ,黄酸梨 ,褐色句句梨 ,沙 02号 ,新梨 7-1号 ,香梨芽变 9号 ,轮台句句梨 ,黑酸梨 ,株选 1号 ,沙
03号 ,棋盘梨 ,沙 01号 ,短枝梨 ,新梨7-2号 ,贡梨 ,新梨 6号 。第二大类群又可以细分为两个亚类 。第
一亚类包括:砀山梨 ,鸭梨 ,香梨芽变6号 ,库尔勒香梨 ,库车阿木特 ,沙 02号 ,香梨芽变 9号 ,黑酸梨 ,褐
色句句梨 ,轮台句句梨 ,沙 01号 ,短枝梨 ,红香酥 ,黄酸梨 ,早酥 。第二亚类群包括:红香梨 ,新梨 7-1
号 ,株选 1号 ,沙 03号 ,棋盘梨 ,新梨 7-2号 ,贡梨 ,新梨 6号 。
表 3　RAPD分析所用的引物及序列与扩增结果
Table 3　The primer sequence and the amplified results of RAPD analysis
编号
Code
序列(5′～ 3′)
Sequence(5′～ 3′)
扩增条带数
Number of scored band
多态性带数
Number of polymorphic bands
多态百分率(%)
Polymorphism
R6 GGTGGTCAAG 9 9 100
R10 GGGTCTCCCT 9 7 77.7
R12 GTGCCTAACC 7 5 71.4
R18 GTGCAACGTG 10 8 80
R26 GGGCGGTACT 8 7 87.5
R29 GTAGACCCGT 7 7 100
R36 CAAACGTCGG 11 8 72.7
R40 GACGGATCAG 9 8 88.8
R52 CACTGGCCCA 9 9 100
R58 TGACCCGCCT 9 7 77.7
R62 AGTCAGCCAC 10 7 70
R71 AGGGGTCTTG 7 7 100
R84 AGGTGACCGT 9 8 88.8
R86 GTTGCGATCC 8 5 62.5
R103 GTTTCGCTCC 8 8 100
R105 GGACTGGAGT 10 8 80
R112 GGTGACGCAG 8 8 100
R130 TCCGCTCTGG 7 7 100
R132 CTCACCGTCC 8 5 71.4
总计 Total 19 163 138 85.7
第三大类群包括 24份种质:株选 1号 ,84-1-15 ,84-4-72 , 84-5-58 ,身不知 ,市水 ,大果水晶 ,
甘泉 ,绿云 ,晚秀 ,南水 ,黄金梨 ,雅青 ,雪新 ,琥珀 ,玛瑙 ,华山 ,洋梨 ,雪峰 ,黄冠 ,天皇 ,西子绿 ,爱甘水 ,新
世纪 ,杭青。第三大类群又可以分为三个亚群 ,第一亚群包括:大果水晶 ,甘泉 ,绿云 ,晚秀 ,南水 ,黄金
梨 ,雅青。第二亚群包括:株选 1号 ,84-1-15 ,84-4-72 ,84-5-58 ,身不知 ,雪新 ,琥珀 ,玛瑙 ,华山 ,
洋梨 ,黄冠 ,天皇 ,西子绿 ,爱甘水 ,新世纪 ,杭青。第三亚群包括市水和雪峰 。
2.4　RAPD和 ISSR数据综合聚类分析
将 RAPD和 ISSR两种试验的数据混合后 ,按 UPGMA法构建立材料间的遗传关系聚类图 。以相似
系数 0.64为标准 ,可将供试的 48份梨种质划分为 3大类群。其聚类结果与 ISSR和 RAPD相似 ,但是更
接近于 ISSR聚类 。图 6
3　讨论
3.1　梨广泛分布在我国南北各个地区 ,种质资源类型十分丰富。研究梨种质的遗传和分类等对梨资
源的利用具有重要的意义 。在 160×104km2 的新疆 ,新疆梨系统的品种有 30多种 ,分布在全疆各地 。如
南疆的喀什 ,和田 ,墨玉 ,麦盖提 ,叶城等 。东疆的鄯善 ,伊宁市 ,吐鲁番等地均有栽培 。集中栽培区为鄯
善 ,托克逊地区 ,仅仅这一地区就有品种 20余个[ 13] 。马兵钢等[ 14]对新疆 18份梨进行了 RAPD研究认
为几个芽变之间高度相似 ,并建议把库尔勒香梨划归为新疆梨系统。
·1719·9期　　　　　　　单江华等:新疆梨种质资源亲缘关系的 ISSR和 RAPD分析　　　　　　　　　
3.2　研究表明 ,14条 ISSR引物和 19条 RAPD引物分别检测到 101和 138条多态性位点。不同梨种质
资源之间的距离系数在 0.51 ～ 0.93(ISSR)或 0.54 ～ 0.90(RAPD),在 UPGMA聚类基础上建立了 48份
梨种质的亲缘关系系统树图。 ISSR和 RAPD两种标记获得了相似但不完全相同的聚类树 , 48个供试材
料均可明显的划分为 3个类群。第一类群以杜梨一个单独的品种为一类 ,把砧木用的杜梨与栽培品种
相区分开来 。第二类把传统的白梨和新疆梨聚在一起 ,这可能是与新疆的特殊的地理环境和丰富的梨
属资源等原因有关。第三类以白梨和砂梨杂交相关的白梨与砂梨聚在一起 。这些与传统的分类基本上
一致。然而两种标记之间也存在一定的差异性 , ISSR数据中第二类中的第一亚类贡梨 ,早酥 ,新梨 6
号 ,株选 1号 ,沙 03号的聚类图在 RAPD数据中却放在了第二类中的第二亚类。
·1720·　　　　　　　　　　　　　　　新疆农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　47卷
对于库尔勒香梨的归类 ,以往有两种观点 ,即分别被认为属于白梨系[ 15] 、新疆梨系[ 16] 。研究中两
种标记分别显示库尔勒香梨与新疆梨和白梨的相似系数分别为 0.80和 0.62(ISSR)、0.76 和 0.69
(RAPD),也就是说 ,库尔勒香梨的遗传距离与新疆梨相对较近 ,因此把库尔勒香梨归入新疆梨更为合
适 ,这与曹玉芬和马兵钢等的研究结果相一致[ 14 , 17] 。当然如果能进一步用其他分子标记技术 ,如叶绿
体DNA的 RFLP ,核 rDNA的 ITS序列直接测定 , rbcL基因序列测定等 ,用支序分析可得出更有力的证据。
3.3　由两种分子标记综合聚类(图6)与 ISSR分子标记聚类(图3)和 RAPD分子标记聚类(图 5)比较可
知 ,图 6的结果与图 3和图 5的聚类基本一致 ,图 6的第一类群与图 3和图 5是一样 ,而第 Ⅱ类群与图 3
非常接近 ,总体而言综合聚类(图 6)和 ISSR聚类(图 3)更为接近 ,可见 ISSR分析较 RAPD稳定 。ISSR引
物相对 RAPD引物条数较少 ,但是香梨芽变6号和库尔勒香梨相似系数为 0.86 ,而 RAPD数据计算的相
似系数为 0.88。上述结果表明 , ISSR的分辨能力比 RAPD分辨能力更高 ,能更好地检测到各份材料间
的遗传相似性。综合聚类(图 6)的结果与传统分类基本一致 。但是却把短枝梨和沙 01号聚在了一起 ,
可能是由于其基因组 DNA发生变异 ,使得某些种类尽管分子标记结果相似系数较高 ,但植物学形态特
征却有较大的差异。因此 ,有必要结合形态与分子分类对梨种质进行更深入研究 ,以便为梨种质资源利
用及品种改良等提供更科学的依据 。
4　结论
ISSR和 RAPD两种分子标记试验结果表明 ,库尔勒香梨与新疆梨的遗传距离比与白梨的遗传距离
相对较近 ,因此认为把库尔勒香梨归入新疆梨系统更为合适 。通过比较这两种标记在试验中的分析 ,发
现 ISSR的分辨能力比 RAPD分辨能力更高 ,能更好的检测到各份材料间的遗传相似性 。
参考文献:
[ 1] 俞德浚.中国果树分类学[M] .北京:农业出版社 ,1979:122-146.
[ 2] 张钊 ,王野苹.香梨品种种源问题的探讨[ J] .果树科学 ,1993 , 10(2):113-115.
[ 3] 杨红花 ,陈学森 ,冯宝春 ,等.李梅杏类种质资源的 RAPD分析[ J] .果树学报 , 2007 ,24(3):303-307.
[ 4] 杨向晖 ,李平 ,刘成明 ,等.枇杷属植物及其近缘属植物亲缘关系的 RAPD分析[ J] .果树学报 ,2009 , 26(1):55-59.
[ 5] 潘坤 ,王文泉 ,唐黎黎 ,等.椰子 ISSR遗传多样性分析[ J] .果树学报 , 2010, 27(2):238-243.
[ 6] 陈晓军 ,陈虞超 ,李苗 ,等.宁夏栽培枣树品种(品系)的 RAPD 分析研究[ J] .北方园艺 , 2010 ,(1):14-16.
[ 7] 易琼 ,殷海滨 ,龚丽琼 ,等.8个云南主要栽培梨品种亲缘关系的 ISSR分析[ J] .安徽农业科学, 2009 , 37(2):506-509.
[ 8] 廖明安 ,李湘麒 ,李道高 ,等.梨 RAPD分析技术体系的建立及遗传多样性研究[ J] .中国农学通报 , 2002, 18(5):39-42.
[ 9] 马兵钢 ,牛建新 ,潘立忠 ,等.应用 RAPD分析新疆主要梨品种的遗传关系[ J] .果树学报 , 2004 , 21(6):521-525.
[ 10] Salah M.Aljanabi and Iciar Martinezl Universal and rapid salt-ext raction of high quality genomic DNA for PCR-based techniques [ J] .Nucleic
Acids Research , 1997:4 692-4 693.
[ 11] 马兵钢 ,赵宗胜 ,冯建荣 ,等.梨属 DNA 提纯化方法的比较研究 [ J] .石河子大学学报(自然科学版), 2000, 4(4):277-281.
[ 12] Nei M , Li W H.Mathematical model for studying genetic variation in terms of rest riction endonucleases [ J] .Proc Nat l Acad Sci , 1979 , 76:5 269-5
273.
[ 13] 俞德浚 ,张鹏.我国梨品种的一个新的系统[ J] .园艺学报 ,1979 , 6(1):27-32.
[ 14] 马兵钢 ,牛建新 ,吴忠华 ,等.新疆主要梨品种亲缘关系的分子标记分析[ J] .石河子大学学报(自然科学版),2004 ,(1):79-102.
[ 15] 蒲富慎 ,王宇霖.中国果树志(第三卷)(梨)[M] .上海:上海科学技术出版社 , 1963:304.
[ 16] TengY , TanabeK , Tamura F , et al.Genetic relationships of pear cultivars in Xinjiang , China as measured by RAPD markers[ J] .J.Hort.Sc.i
Biotech.2001 , 76:771-779.
[ 17] 曹玉芬 ,刘凤之 ,高源 ,等.梨栽培品种 SSR鉴定及遗传多样性[ J] .园艺学报 , 2007 , 34(2):305-310.
·1721·9期　　　　　　　单江华等:新疆梨种质资源亲缘关系的 ISSR和 RAPD分析