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民族药紫金莲镇痛抗炎作用及急性毒性实验研究



全 文 :贵 州 科 学 32(1) :26-28,2014
Guizhou Science
收稿日期:2013-08-04;修回日期:2013-08-25
基金项目:贵州省科学技术基金项目[黔科合中药字(2011)LKZ7033
号]。
作者简介:卢启振(1985-) ,男,研究生。研究方向:镇痛抗炎中药药效
物质基础研究。E-mail:1218917384@ qq. com
通讯作者:邓 炜(1954-) ,女,教授。研究方向:中药民族药药效物质
基础研究。E-mail:914214883@ qq. com
民族药紫金莲镇痛抗炎作用及急性毒性实验研究
卢启振 邓 炜 田宏平 李思科
(贵阳中医学院 药理教研室,贵阳 550002)
摘 要: 对民族药紫金莲不同提取物镇痛抗炎作用及急性毒性进行实验研究。方法:以紫金莲醇提物、水提物采用醋酸扭
体法、热板法,观察其对小鼠的镇痛作用;用二甲苯致鼠耳肿胀法观察其对小鼠抗炎作用;对 2 种提取物进行了最大耐受量测
定。结果:紫金莲能明显减少醋酸致小鼠扭体次数,提高小鼠对热的痛阈值;小剂量抗炎作用明显;最大耐受量是人用剂量的
250 倍之多。结论:紫金莲两种提取物对小鼠镇痛抗炎作用显著,临床所用治疗剂量安全无毒。
关键词: 紫金莲,民族药,镇痛,抗炎,急性毒性
中图分类号 R 932. 11 文献标识码 A 文章编号 1003-6563(2013)06-0026-03
Study on the Ethnic Medicine Ceratostigma willmottianum Stapf
for Its Analgesic and Anti-inflammatory Effects and Acute Toxicity Test
LU Qi-zhen DENG Wei TIAN Hong-ping LI Si-ke
(Department of Pharmacology,Guiyang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang,Guizhou 550002,China)
Abstract: Study on the ethnic medicine Ceratostigma willmottianum Stapf (CWS)for its analgesic and antiin-
flammatory effects and acute toxicity test. Methods:Hot-plate procedure and writhing test in mice were adopted in
experiments of analgesic model with CWS extract of alcohol and water,and of anti-inflammatory model with mouse
ear edema induced by xylene. The maximum tolerance for the two kinds of extracts was measured. Results:CWS
could significantly reduce the writhing frequency caused by acetic acid,prolong the pain threshold on hot-plate in
mice,and increase the anti-inflammatory effect with small dose. The maximum tolerance dose is 250 times more
than the dose for human beings. Conclusions:The two CWS extracts have obvious analgesic and anti-inflammatory
effects in mice and the clinical therapeutic dose is safe and non-toxic.
Key words: Ceratostigma willmottianum,ethnic medicine,analgesic,anti-inflammatory,acute toxicity
紫金莲为贵州苗族等少数民族用药,药用部位
为根,具有活血止痛、通经活络等功效,民族民间常
用来治疗跌扑肿痛,胃脘疼痛等疼痛症。经文献检
索有关紫金莲相关研究极少,药效学研究更是鲜见
报道。本研究对紫金莲不同提取物的镇痛抗炎作
用及急性毒性进行了初步实验研究,结果报道如下。
1 材料
1. 1 药物
实验用药制备 紫金莲药材采自贵州威宁县,
经贵阳中医学院孙庆文副教授鉴定为蓝雪科植物
紫金莲(Ceratostigma willmottianum Stapf)。药材干
燥后打成粗粉备用。
紫金莲醇提物的制备:取粗粉 1000g,用 70 %乙醇
回流提取 3 次,每次 1h,合并滤液,回收乙醇,浓缩干
燥,得到醇提物干浸膏 125. 6 g;得膏率为 12. 56 %。
紫金莲水提物的制备:将醇提所剩药渣阴干,
再用水煎煮 3 次;分别为 70 s、60 s、60 s,合并滤液,
浓缩干燥,得到水提物干浸膏 115. 3 g;得膏率为
11. 53 %。
分别将提取浸膏于冰箱中冷藏保存,临用时配
成质量浓度为 37. 5、75、150 g /L,分别对应为低、中、
高 3 个剂量组。
1. 2 试剂
元胡止痛片,南宁市维威制药有限公司,批号:
120715;阿司匹林肠溶片,金陵药业股份有限公司南
京金陵制药厂,批号:100301;二甲苯,汕头市光华化
学厂,批号:20061209。0. 6 %冰醋酸溶液。
1. 3 动物
昆明种小鼠,清洁级,体重 18 ~ 22 g,雌雄兼
用,由贵阳医学院实验动物中心提供,合格证号:
SCXK(黔)2002-001。
1. 4 仪器
电子分析天平(AR1140 /C) ,奥豪斯(上海)公
司生产;YLS-6B智能热板仪,上海精密仪器仪表有
限公司生产;0. 25 ml全玻璃针管;眼科镊。
2 方法
2. 1 紫金莲醇提物、水提物对冰醋酸致小鼠扭体
反应的影响
将 80 只小鼠按体重随机分为 8 组,每组 10 只,
分别为:空白对照组(给予等容积蒸馏水) ;阳性药
对照组(元胡止痛片,0. 23 g /kg) ;紫金莲醇提物高、
中、低剂量组(0. 38、0. 19、0. 09 g /kg) ;紫金莲水提
物高、中、低剂量组(0. 35、0. 17、0. 09 g /kg)。各给
药组按剂量每天灌胃给药 1 次,连续给药 7 d,于末
次灌胃给药 60 min 后,腹腔注射 0. 6 %醋酸溶液
0. 2 ml /10g,分别记录 20 min、30 min 内小鼠扭体次
数,并计算药物对扭体反应的抑制率。
2. 2 紫金莲醇提物、水提物对小鼠热板致痛反应
的影响
将筛选合格的雌性小鼠 64 只,按体重随机分成
8 组,分组及给药剂量同 2. 1。各鼠实验前测 2 次痛
阈,取均值作为基础痛阈。灌胃给药 7 d,每天 1 次。
于末次灌胃给药后 30、60、90 min 分别测定小鼠的
痛阈 1 次,比较各组药后不同时间痛阈值组间差异。
2. 3 紫金莲醇提物、水提物对二甲苯致小鼠耳廓
肿胀的影响
分组及给药剂量同 2. 1,阳性药对照组(阿司匹
林肠溶片,0. 20 g /kg) ,各组灌胃给药,每天1次,连续
7 d,最后一次给药 1 h 后,于小鼠左耳正反面涂以
0. 05 ml二甲苯致炎,30 min后处死小鼠,剪下左右两
耳,用 8 mm直径打孔器取耳片,精密称重,以左右耳
片重量差值表示炎性肿胀度,并计算肿胀抑制率。
2. 4 最大耐受量实险
经预试验,由于给药体积和给药浓度限制,未
能找出 0 %动物死亡的最大剂量和 100 %动物死亡
的最小剂量,无法计算出 LDM50,故采用最大给药量
实验以测其最大耐受量。取 18 ~ 22 g 健康昆明种
小鼠 48 只,按体重随机分为 2 组,分别为紫金莲醇
提物组和水提物组。于实验首日分别灌胃,紫金莲
醇提物给药剂量为 16. 33 g /kg /4 h,水提物给药剂量
为 14. 99 g /kg /4 h,共给药 3次。然后密切观察一周。
2. 5 统计学分析
数据均采用 SPSS 17. 0 for Windows统计分析软
件处理,数据均以 x ± s表示,组间比较用 t检验。
3 结果
3. 1 紫金莲提取物对醋酸致小鼠扭体反应的影响
在腹腔注射 0. 6 % 醋酸溶液 20 min、30 min
2 个时段,结果见表 1。紫金莲醇提物高剂量组和水
提物高、中、低剂量组的扭体潜伏期与扭体次数与
空白对照组比较存在显著性差异(P < 0. 05) ,提示
紫金莲有明显镇痛作用。另外从表 1 中结果可看出
其镇痛率与剂量正相关,在 20 min和 30 min两个时
间段两种提取物的高、中、低剂量组扭体抑制率随
剂量降低基本上是依次降低的。且镇痛强度均超
过元胡止痛片,而阳性对照药元胡止痛片,在本实
验中并没有明显镇痛作用。
3. 2 紫金莲提取物对小鼠热板致痛反应的影响
在给药后 30 min测小鼠痛阈,紫金莲醇提物高
剂量组和水提物中剂量组均能显著提高小鼠热刺
激痛阈(P < 0. 05) ,提示 2 种提取物对热板致痛均
有镇痛作用,结果见表 2。而在给药后 60 min 测小
鼠痛阈,仅有醇提物高剂量组尚能明显提高痛阈值
(P < 0. 05)。药后 90 min各组小鼠痛阈差异均无统
计学意义,提示该药物镇痛持续时间不长。
721 期 卢启振,等:民族药紫金莲镇痛抗炎作用及急性毒性实验研究
表 1 紫金莲对小鼠冰醋酸致扭体反应的影响(x ± s,n =10)
Tab. 1 The impact of CWS to the writhing test caused by acetic acid in mice(x ± s,n =10)
组 别 剂量(g /kg)
潜伏期
(min)
扭体次数
(20 min)
扭体次数
(30 min)
扭体抑制率
(20min)
扭体抑制率
(30 min)
空白对照组 ——— 5. 54 ± 3. 10 29. 54 ± 16. 59 36. 38 ± 14. 67 — —
元胡止痛片组 0. 23 4. 23 ± 2. 39 27. 00 ± 10. 39 35. 23 ± 12. 96 8. 60 % 3. 16 %
醇提物高剂量组 0. 38 9. 10 ± 2. 33* 11. 90 ± 7. 48* 13. 10 ± 6. 47* 59. 72 % 63. 99 %
醇提物中剂量组 0. 19 5. 90 ± 1. 85 16. 30 ± 10. 11 22. 50 ± 12. 20 44. 82 % 38. 15 %
醇提物低剂量组 0. 09 5. 40 ± 2. 46 20. 70 ± 7. 30 23. 40 ± 7. 14 29. 93 % 35. 68 %
水提物高剂量组 0. 35 10. 70 ± 4. 72* 7. 50 ± 5. 19* 8. 60 ± 7. 46* 74. 61 % 76. 36 %
水提物中剂量组 0. 17 8. 40 ± 3. 34* 9. 00 ± 4. 14* 13. 00 ± 4. 67* 69. 53 % 64. 27 %
水提物低剂量组 0. 09 7. 90 ± 3. 35 10. 00 ± 6. 34* 12. 60 ± 7. 00* 66. 15 % 65. 37 %
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05。
表 2 紫金莲对小鼠热板致痛反应的影响(χ ± s,n =8)
Tab. 2 The impact of CWS to pain threshold on hot-plate in mice(χ ± s,n =8)
组 别
剂 量
(g /kg)
药前痛阈
(s)
药后痛阈(s)
30 min 60 min 90 min
空白对照组 ——— 16. 86 ± 7. 50 24. 80 ± 17. 13 19. 57 ± 7. 13 20. 58 ± 7. 43
元胡止痛片组 0. 23 11. 14 ± 4. 53 14. 72 ± 7. 61* 18. 07 ± 7. 89 24. 18 ± 11. 80
醇提物高剂量组 0. 38 11. 68 ± 4. 85 12. 56 ± 5. 96* 11. 03 ± 5. 34* 18. 17 ± 9. 26
醇提物中剂量组 0. 19 14. 91 ± 3. 47 15. 11 ± 8. 98 22. 68 ± 14. 18 18. 26 ± 8. 39
醇提物低剂量组 0. 09 15. 44 ± 7. 96 19. 42 ± 9. 03 15. 74 ± 8. 57 24. 91 ± 15. 97
水提物高剂量组 0. 35 13. 91 ± 7. 66 17. 41 ± 9. 69 13. 00 ± 6. 28 18. 97 ± 7. 33
水提物中剂量组 0. 17 13. 26 ± 5. 51 12. 87 ± 5. 51* 12. 60 ± 3. 38 17. 69 ± 11. 36
水提物低剂量组 0. 09 13. 31 ± 3. 50 21. 69 ± 9. 66 20. 18 ± 8. 75 12. 72 ± 3. 50
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05。
3. 3 紫金莲提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的
影响
表 3 紫金莲对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(χ ± s,n =10)
Tab. 3 The impact of CWS to the mouse ear edema
induced by xylene(χ ± s,n =10)
组 别
剂量
(g /kg)
耳廓肿胀度
(mg)
肿胀抑制率
(%)
空白对照组 ——— 17. 80 ± 3. 97 ———
阿司匹林组 0. 20 7. 10 ± 4. 70* 60. 11 %
醇提物高剂量组 0. 38 10. 70 ± 6. 87 39. 89 %
醇提物中剂量组 0. 19 13. 60 ± 7. 76 23. 60 %
醇提物低剂量组 0. 09 9. 10 ± 5. 97* 48. 88 %
水提物高剂量组 0. 35 13. 00 ± 11. 25 26. 97 %
水提物中剂量组 0. 17 7. 80 ± 7. 94* 56. 18 %
水提物低剂量组 0. 09 3. 40 ± 3. 98* 80. 90 %
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05。
紫金莲醇提物低剂量组和水提物中、低剂量组
对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀抑制作用皆显著(P
< 0. 05) ,结果见表 3。其肿胀抑制率分别为 48. 88
%、56. 18 %、80. 90 %,与阳性药阿司匹林的抑制率
(60. 11 %)相似,提示紫金莲在低剂量时较好的抗
炎作用,而且水提物显示出较大的抗炎优势。
3. 4 最大耐受量实验
一周观察期未见动物异常表现,均活动良好,
饮水饮食正常。于一周后处死动物解剖,肉眼观察
各脏器均未发现异常。计算得出紫金莲醇提物和
水提物最大耐受量均为 390 g /kg /d(生药) ,两者皆
相当于人用临床剂量的 257. 4 倍。结果提示紫金莲
醇提物和水提物在治疗剂量范围内应用是安全无
毒的。
(下转第 39 页)
82 贵 州 科 学 32 卷
分析,得到以下结论:
1)贵州七星关区大河乡岔沟泥石流从泥石流
集水区地貌特征划分为暴雨沟谷型泥石流,从泥石
流堆积物的物质组成划分为粘性泥石流,从泥石流
的发展阶段划分为发展期泥石流,从发生频率划分
为低频泥石流;
2)研究表明,从地形地貌条件上,岔沟泥石流
地形起伏总体较大,自然斜坡坡度较陡,支沟狭窄,
切割深,高差相对较大,沟谷纵坡较大,有利于泥石
流物质的汇集和成灾;从水源条件上,岔沟沟域汇
水面积较大,利于坡面地表水的汇集,在大暴雨或
持续强降雨汇集的水体,为泥石流的形成提供了水
动力条件;从物源条件上可能参与泥石流活动的松
散物质储量总计约 17. 3 × 104 m3,为泥石流形成提
供了丰富而集中的松散固体物质,在暴雨时为泥石
流泥石流产生提供丰富的物质来源;
3)岔沟泥石流历史发生都为暴雨激发,长时间
降雨与大暴雨是引发泥石流的主要因素,加之地形
地貌有利于泥石流物质的汇集和成灾,且有丰富而
集中的松散固体物质。因此,在长时间降雨与大暴
雨时,发生泥石流的可能性提高,应加强预防及防
治工作。
[REFERENCES]
Anon .(Edited by the People 's Republic of China Ministry of
Land and Resources) ,2006. Standardize Theinvestigation
of Debris Flow Disaster Prevention and Control Engineering
(DZ /T0220-2006) [S]. China Standard Press,2-3(in
Chinese).
Anon.(Edited by Guizhou Geoscientific Engineering Surey Co.
Ltd.) ,2012 . Guizhou Province Seven Cities River Xiang
Cha Gou Debris Survey Report[R]. Guizhou Guiyang(in
Chinese).
Zhu ZL,Liu XL,Shang ZH ,2010. Conditions of formation of
Beichuan County,Sichuan Province,Zhao Jia Gou earth-
quake induced landslides[J]. Chinese Journal of Geology,
21(4) :60(in Chinese).
[附中文参考文献]
中华人民共和国国土资源部,2006. 泥石流灾害防治工程勘
察规范(DZ /T0220-2006) [S]. 中国标准出版社,2-3.
贵州地矿工程勘察有限公司,2012. 贵州省七星关区大河乡
岔沟泥石流勘查报告[R]. 贵州:贵阳 .
朱中礼,刘希林,尚志海,2010. 四川省北川县赵家沟地震次
生泥石流形成条件分析[J]. 中国地质灾害与防治学
报,21(4) :60.
(上接第 28 页)
4 讨论
实验结果显示,紫金莲水提物能较好抑制醋酸
刺激腹腔黏膜引起的痛反应,减少小鼠扭体次数,
其镇痛效果优于紫金莲醇提物。而在热板法镇痛
实验中,紫金莲醇提物高剂量组和水提物中剂量组
均能明显提高小鼠热刺激体表的痛阈,延长热板痛
反应时间。据研究认为扭体法镇痛实验主要反应
药物外周镇痛机制;热板法镇痛主要证实中枢镇痛
作用。而所选择的阳性药元胡止痛片是中枢性镇
痛药,对扭体法镇痛无效也证实了这一点。本研究
结果提示紫金莲提取物对以上两种因素致痛均有
抑制作用,为我们对紫金莲镇痛机制的继续研究提
供了方向和思路。另外,紫金莲对二甲苯致小鼠耳
廓肿胀的实验结果也很有特点,低剂量的紫金莲抗
炎作用反而较高剂量更为突出,水提物显示出较大
的抗炎优势,值得我们对其抗炎作用深入探讨。急
性毒性实验研究结果提示,紫金莲临床治疗剂量口
服给药安全范围大。
[REFERENCES]
Anon. (Edited by Drug Supervision Administration Bureau of
Guizhou Province) ,2003. Traditio -nal Chinese Medicine
Quality Standards of Guizhou Province[S]. Guizhou Sci-
ence Press,369 (in Chinese).
Chen Q,2000. Pharmacology of Traditional Chinese Medicine
Research Methodology[M]. Beijing:People’s Health
Press,23,232,305-307,364(in Chinese).
Xu SY,Bian RL,Chen Xiu,2001. Pharmacological Experiment
Methodology (Third Edition) [M]. Beijing:People’s
Health Press,203-887,911(in Chinese).
[附中文参考文献]
贵州省药品监督管理局,2003. 贵州省中药材、民族药材质
量标准[S]. 贵阳:贵州科技出版社,369.
陈奇,2000. 中药药理研究方法学[M]. 北京:人民卫生出
版社,23,232,305-307,364.
徐叔云,卞如濂,陈修,2001. 药理实验方法学(第 3 版)
[M]. 北京:人民卫生出版社,203-887,911.
931 期 廖德武:贵州七星关区大河乡岔沟泥石流形成条件分析