全 文 ：畜牧兽医学报　２０１４，４５（１２）：２０５７－２０６６
Ａｃｔａ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ　ｅｔ　Ｚｏｏｔｅｃｈｎｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ
ｄｏｉ：１０．１１８４３／ｊ．ｉｓｓｎ．０３６６－６９６４．２０１４．１２．０２１
变异黄芪内生真菌种群分布特征
曹丹丹１，路　浩１，赵宝玉１＊，薛瑞旭１，权海云１，杨晓雯１，刘晓学１，严杜建１，２
（１．西北农林科技大学动物医学院，杨凌７１２１００；２．阿克苏职业技术学院，阿克苏８４３０００）
摘　要：为探明变异黄芪（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）中是否存在内生真菌及其种群分布情况，对采自内蒙古腾格里苏
木的变异黄芪样品，采用表面消毒法进行内生真菌分离纯化，并用微生物形态学观察方法和ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列分析
技术对分离获得的内生真菌进行种属鉴定。结果显示，内蒙古腾格里苏木变异黄芪植株中存在多种内生真菌，在
所有不同的消毒时间中，叶的分离率最高（１１０．００％），花最低（４５．００％）。从变异黄芪３种组织中共分离到内生真
菌３２１株，分属于５纲７目１１科１７属，其中的Ｕｎｄｉｆｉｌｕｍ　ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ分布最广，占总菌株的４７．９８％，为变异黄芪的
优势菌株，其次为炭角菌属（Ｘｙｌａｒｉａｓｐ．），其分离率为１６．５１％。结果表明，变异黄芪内生真菌数量、种属组成与分
布存在明显组织差异，叶是内生真菌侵染和定植的主要部位，而茎内生真菌多样性最高。
关键词：变异黄芪；内生真菌；分离鉴定；种群分布
中图分类号：Ｓ８５９．８７　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：０３６６－６９６４（２０１４）１２－２０５７－１０
收稿日期：２０１４－０３－２７
基金项目：国家自然科学基金（３１２０１９５８）；国家“十二五”公益性行业（农业）科研专项（２０１２０３０６２）；中央高校基本科研业务费（ＱＮ２０１１１０８）
作者简介：曹丹丹（１９８８－），女，河北滦南人，硕士生，主要从事疯草内生真菌研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｄｄ１９８８２２８＠１６３．ｃｏｍ
＊通信作者：赵宝玉，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｏｂａｏｙｕ１２００５＠１６３．ｃｏｍ
Ｔｈｅ　Ｓｐｅｃｉｅｓ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｉｎ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ
ＣＡＯ　Ｄａｎ－ｄａｎ１，ＬＵ　Ｈａｏ１，ＺＨＡＯ　Ｂａｏ－ｙｕ１＊，ＸＵＥ　Ｒｕｉ－ｘｕ１，ＱＵＡＮ　Ｈａｉ－ｙｕｎ１，
ＹＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｗｅｎ１，ＬＩＵ　Ｘｉａｏ－ｘｕｅ１，ＹＡＮ　Ｄｕ－ｊｉａｎ１，２
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；
２．Ａｋｓ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ａｋｓｕ８４３０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｅｎｇｅｌｉ　ｏｆ　Ｉｎｎｅｒ
Ｍｏｎｇｏｌｉａ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｗｈｅｔｈｅｒ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｅｘｉｓｔ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐｌａｎｔ　ａｎｄ　ｔｏ　ａｓｓｅｓｓ　ｔｈｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｄｉｓ－
ｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ．Ｓｕｒｆａｃｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｗａｓ　ｔａｋｅｎ　ｔｏ　ｉｓｏｌａｔｅ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｙ　ｔｈｅ
ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ，ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｇｅｎｕｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ
ｒＤＮＡ－ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｍａｎｙ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｉｎ　ｔｈｅ
Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｉｎ　Ｔｅｎｇｅｌｉ　ｏｆ　Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ．Ｕｎｄｅｒ　ａｌ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ
ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｌｅａｆ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｓｔ （１１０．００％），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｓｔ
（４５．００％）．３２１ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　３ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｖａｒｉａｂｉ－
ｌｉｓ，ｗｈｉｃｈ　ｂｅｌｏｎｇｅｄ　ｔｏ　１７ｇｅｎｅｒａ，１１ｆａｍｉｌｉｅｓ，７ｏｒｄｅｒｓ，ａｎｄ　５ｃｌａｓｓｅｓ．Ｕｎｄｉｆｉｌｕｍ　ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ
ｄｏｍｉｎａｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐｌａｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　４７．９８％，ｆｏｌｏｗｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｘｙｌａｒｉａ　ｓｐ．
（１６．５１％）．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａｎ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｑｕａｎｔｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏ－
ｐｈｙｔｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ．Ｌｅａｆ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｖｕｌｎｅｒａｂｌｅ　ｔｏ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ　ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｉｎ　ｓｔｅｍ　ｏｆ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ
ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
畜　牧　兽　医　学　报 ４５卷　
　　变异黄芪（Ａ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）俗称瓜瓜草、骚草，是
豆科黄芪属多年生有毒植物，主要分布于内蒙古、甘
肃、新疆、宁夏、青海等地［１］，生长在海拔９００～１　９００
ｍ的荒漠及半荒漠地区。由于其根系发达、耐干
旱、耐贫瘠、抗寒、生长快、多种子、多分枝、生命力强
等特点，变异黄芪已成为中国沙漠化草地的主要优
势植物之一。变异黄芪全株有毒，在可食牧草缺乏
或冬春季节，牲畜容易误食，中毒主要表现为中枢神
经机能障碍。采食初期变异黄芪具有催肥作用，而
后引起慢性中毒，最终造成死亡；母畜采食后可造成
不孕、流产、弱胎、畸形、难产和死胎，胎儿发育不良；
公畜采食后可造成性欲降低，精子品质下降［２－４］，严
重影响畜牧业发展。研究表明，变异黄芪引起动物
中毒死亡的主要原因是其中含有吲哚里西啶生物
碱———苦马豆素（ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ）［５］，而内生真菌Ｕ．
ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ在变异黄芪苦马豆素的合成中起主导作
用，是导致家畜疯草中毒的直接原因［６－８］。内生真菌
（Ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ）是指那些在其生活史的一定阶段或全
部阶段生活于植物各种组织和器官内部或细胞间
隙，对宿主不引起明显疾病症状的一类真菌，包括腐
生真菌、病原真菌和菌根菌［９－１０］。植物内生真菌可
产生多种生物活性物质，有些物质可能具有特殊的生
理功能［１１］，所以内生真菌的物种多样性决定了其代
谢产物的多样性。目前国内外对疯草内生真菌的研
究主要集中于菌株的分离鉴定及内生真菌与苦马豆
素的关系等问题［１２－１４］，而对疯草内生真菌种群分布特
征及多样性研究仅见于苦马豆［１５］。鉴于此，本研究
以内蒙古变异黄芪为研究对象，探讨其内生真菌的组
织分布及定植特点，为后续变异黄芪内生真菌遗传多
样性及其代谢产物生物活性的研究奠定基础。
１　材料与方法
１．１　样品采集
试验所用变异黄芪地上部分全草样品于
２０１３年５月２０日采集于中国内蒙古腾格里苏木
（Ｎ：３８．８３９，Ｅ：１０５．６７２　３０）。植株采集后立即放入
装有变色硅胶的自封袋中脱水处理，不断更换变色
的硅胶，待硅胶不再变色时停止，带回实验室用于内
生真菌分离。
１．２　培养基
分离培养基［１６］：ＰＤＡ 双抗培养基，即马铃薯
２００ｇ·Ｌ－１，葡萄糖２０ｇ·Ｌ－１，琼脂２０ｇ·Ｌ－１。
灭菌 后 加 入 １５０μｇ· ｍＬ
－１ 青 霉 素 钠 和 １２０
μｇ·ｍＬ
－１硫酸链霉素以抑制细菌生长。
１．３　主要试剂和仪器
ＮａＣｌＯ、ＣＴＡＢ提取液、氯仿、异戊醇、２×Ｅａｓｙ
Ｔａｑ　ＰＣＲ　ＳｕｐｅｒＭｉｘ（Ｔｉａｎｇｅｎ）、１０×Ｌｏａｄｉｎｇ　Ｂｕｆｆｅｒ
（ＴａＫａＲａ）、ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ（ＴａＫａＲａ）、引物ＩＴＳ１和
ＩＴＳ４（南京金斯瑞）、电热恒温培养箱、４ ℃冰箱
（ＦＲＥＳＴＥＣＨ　ＳＣ－２０８Ａ）、高速冷冻离心机（ＳＩＧＭＡ
３Ｋ１５）、ＰＣＲ 仪（ＢＩＯＥＲ）、全自动凝胶成像系统
（ＳＹＮＧＥＮＥ）、普通光学显微镜（重庆光电仪器有限
公司）。
１．４　内生真菌分离
将变异黄芪的茎、叶和花先用流水冲洗３次，洗
去表面杂质，用无菌水浸泡２～３ｈ。然后在超净工
作台上，用无菌滤纸吸干表面水分，用７５％乙醇和
２％ ＮａＣｌＯ进行表面消毒并记录消毒时间。消毒完
毕后用无菌蒸馏水冲洗３遍，以洗去残留的消毒水，
用无菌滤纸吸干组织表面水分，剪去样品断端褐变
和变白的部分，再将样品剪成小块。将相同组织块
置于同一ＰＤＡ培养基中，切口紧贴培养基，每个培
养基接种５块组织，光照培养，定时观察。
内生真菌分离过程中同时设置漂洗液检测和组
织印记检测。漂洗液检测，即在样品处理过程中，将
１个ＰＤＡ平板敞口放置于超净工作台中，将最后一
次冲洗组织块的无菌水涂到培养基上，光照培养７
ｄ；组织印记检测，即将表面消毒但未切割的样品组
织块在培养基上轻轻印记１０ｍｉｎ，弃组织块后，光
照培养７ｄ，来检查组织表面消毒是否彻底。
１．５　内生真菌纯化
待切口边缘长出菌丝时，用尖端菌丝挑取法，挑
取形态不同的菌落菌丝于新的ＰＤＡ 培养基再培
养，反复纯化２～３次，得到纯化菌株后编号，并接种
于ＰＤＡ斜面，置４℃冰箱保存备用。
１．６　内生真菌鉴定
１．６．１　形态学鉴定　　挑取已纯化的菌株尖端菌
丝接种于ＰＤＡ培养基２８℃培养８～９ｄ，每２ｄ记
录菌落表面形态、颜色、大小、质地、菌丝性质、颜色
等。然后将无菌盖玻片以４５°插入培养基内继续培
养，待菌丝爬片之后，压片，镜下观察菌丝体、产孢结
构及孢子形态等，结合菌落特征，参照相关资料对其
进行初步鉴定［１７－１８］。
１．６．２　ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列分析鉴定　　采取改良
ＣＴＡＢ法［１９］提取真菌基因组 ＤＮＡ，即挑取５０ｍｇ
菌丝于１．５ｍＬ离心管中，加入６５℃预热的ＣＴＡＢ
８５０２
　１２期 曹丹丹等：变异黄芪内生真菌种群分布特征
６００μＬ，用研磨棒研磨菌丝至充分后，６５℃水浴１
ｈ，间歇摇晃２～３次；加入等体积－２０℃氯仿－异戊
醇（２４∶１），摇晃均匀３～５ｍｉｎ后，４ ℃ １２　０００
ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，取上清入１．５ｍＬ新离心管
中，重复数次，至两相液面澄清；加入－２０℃预冷的
无水乙醇９００μＬ和６０μＬ　３ｍｏｌ·Ｌ
－１乙酸钠（ｐＨ
６．０），颠倒混匀后于－２０℃静置１ｈ，４℃１２　０００
ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，弃上清；用－２０℃预冷的无水
乙醇清洗沉淀３次，挥干乙醇；加入３０μＬ　ｄｄＨ２Ｏ
于６５℃水浴１０ｍｉｎ，并于－２０℃保存备用。采用
Ｗｈｉｔｅ设计的ＩＴＳ１（５′－ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴ－
ＧＣＧＣ－３′） 和 ＩＴＳ４ （５′－ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴ－
ＧＡＴＡＴＧＣ－３′）真菌鉴定通用引物，扩增其５．８Ｓ
ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列。ＰＣＲ反应扩增体系为５０μＬ，其
中ＤＮＡ模板３μＬ，１０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＩＴＳ１和ＩＴＳ４（各
２μＬ），２×ＥａｓｙＴａｑ　ＰＣＲ　ＳｕｐｅｒＭｉｘ　１２μＬ，ｄｄＨ２Ｏ
８μＬ。ＰＣＲ程序为９４℃预变性４ｍｉｎ；９５℃变性
３０ｓ，５６℃退火４０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，共３５个循
环，最后７２℃延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ产物经１％琼脂糖
凝胶电泳４０ｍｉｎ后，采用凝胶成像系统观察电泳结
果并拍照，切胶后利用ＰＣＲ产物纯化试剂盒对目的
片段回收纯化，将纯化产物送上海桑尼生物科技有
限公司测序。所得测序结果在ＧｅｎＢａｎｋ数据库中
与已有５．８ＳｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列进行比对，选取比对后
指标靠前的相似序列和分类上种属比较相近的序
列，用 ＭＥＧＡ５．２软件采用邻接法（Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎ－
ｉｎｇ，ＮＪ）构建系统发育树，自展次数为１　０００次，根
据系统发育树中组群关系对菌株进行分类，最后结
合形态学观察确定菌株种属。
１．７　数据处理
分离率（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ，ＩＲ）是指从样本组织块
中得到的菌株数与全部样本组织块数的比值，用来
衡量变异黄芪内生真菌的丰富程度和每个组织部位
受多重侵染的发生频率；相对分离率（ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｆｒｅ－
ｑｕｅｎｃｙ，ＲＦ）是指从样品中分离到的某一种内生真
菌的株数占分离到的总菌株数的百分率，用来衡量
植物组织中某种内生真菌的优势度。
２　结　果
２．１　内生真菌分离结果
用７５％乙醇和２％ＮａＣｌＯ设定不同的消毒时
间对变异黄芪不同组织块表面进行消毒，分离到的
内生真菌数量、种类见表１。由表１可见，７５％乙醇
和２％ＮａＣｌＯ对变异黄芪不同组织的消毒时间不
同，分离到的内生真菌的种数及分离率有很大差异。
茎组织在消毒时间短时内生真菌分离率较高
（９８．１１％），而随着消毒 时 间 延 长 分 离 率 降 低
（６６％），分离到的内生真菌种类也减少；叶和花组织
在消毒时间为７５％乙醇３０ｓ和２％ＮａＣｌＯ　２．５ｍｉｎ
时，其内生真菌分离率和种类均较高。
表１　变异黄芪不同组织内生真菌分离结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　Ａ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ
组织部位
Ｔｉｓｓｕｅｓ
灭菌时间Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ
７５％乙醇／ｓ　 ２％ＮａＣｌＯ／ｍｉｎ
组织块数
Ｔｉｓｓｕｅｓ　ｎｕｍｂｅｒ
菌落总数
Ｃｏｌｏｎｙ　ｎｕｍｂｅｒ
真菌种数
Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｎｕｍｂｅｒ
分离率／％
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
茎
Ｓｔｅｍ
３０　 ２　 ５３　 ５２　 ９　 ９８．１１
３０　 ２．５　 ５０　 ３３　 ６　 ６６．００
３０　 ３　 ５０　 ３６　 ７　 ７２．００
叶
Ｌｅａｆ
３０　 ２　 ２８　 ２６　 ７　 ９２．８６
３０　 ２．５　 ３０　 ３３　 ８　 １１０．００
３０　 ３　 ４２　 ３５　 ５　 ８３．３３
花
Ｆｌｏｗｅｒ
３０　 ２　 ２０　 ９　 ３　 ４５．００
３０　 ２．５　 ６０　 ４６　 ９　 ７６．６７
３０　 ３　 ７０　 ５０　 ７　 ７１．４３
２．２　内生真菌鉴定结果
２．２．１　内生真菌形态学特征　　本试验共分离出
３２１株内生真菌，经纯化培养后初步合并为２１株形
态型，分别将其点植于ＰＤＡ培养基上，观察并记录
菌落形态和主要显微结构（表２），通过菌落形态特
征和菌丝、孢子等显微结构对分离到的内生真菌进
行初步鉴定，但仅由形态学特征难以准确鉴别，所以
尚需分子生物学技术进行进一步鉴定。
９５０２
畜　牧　兽　医　学　报 ４５卷　
表２　变异黄芪内生真菌的主要形态学特征
Ｔａｂｌｅ　２　Ｍａｉｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｅｎｏｐｈｙｔｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＡ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ
菌株编号
Ｓｔｒａｉｎｓ　Ｎｏ．
分离部位
Ｔｉｓｓｕｅｓ
形态学特征 Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ＡＶ１Ｌ２－３ 叶Ｌｅａｆ
菌丝白色、疏松、气生生长，菌落中间凸起四周扁平，背面菌落白色、边缘白色、羽毛状，生
长速度６．３３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｌ２－７
茎Ｓｔｅｍ
叶Ｌｅａｆ
花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝白色、疏松、匍匐生长，菌落凹凸不平、辐射状，背面菌落白色、边缘白色、全圆，生长速
度５．３３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｌ２－２ 叶Ｌｅａｆ
菌丝白色、质密、匍匐生长，菌落中间凸起四周扁平，背面菌落白色，边缘白色、不规则圆，
生长速度１．５ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ１－２ 茎Ｓｔｅｍ
菌丝淡墨绿色、疏松、匍匐生长，菌落中间凸起四周扁平，背面菌落淡墨绿色，边缘淡墨绿
色、不规则圆，生长速度７．５ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｆ４－１ 花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝透明、疏松、匍匐生长，菌落扁平，背面菌落透明，边缘透明、纤毛圆，生长速度１６．３３
ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｆ５－３ 花Ｆｌｏｗｅｒ 菌丝白色、疏松、气生生长，菌落丘状，背面菌落白色，边缘白色、全圆，生长速度５．３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｌ５－３
茎Ｓｔｅｍ
叶Ｌｅａｆ
花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝淡墨绿色、疏松、气生生长，菌落扁平，背面菌落中间绿色四周白色透明，边缘白色、纤
毛圆，生长速度９ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ３－５
茎Ｓｔｅｍ
叶Ｌｅａｆ
花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝白色、疏松、气生生长，菌落球形，背面菌落深灰色，边缘白色、全圆，生长速度０．２５
ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｌ１０－１
茎Ｓｔｅｍ
叶Ｌｅａｆ
菌丝深黄绿色、质密、匍匐生长，菌落丘状，背面菌落墨绿色，边缘白色、全圆，生长速度
０．６７ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｌ１１－５ 叶Ｌｅａｆ
菌丝土黄色、疏松、匍匐生长，菌落中间凸起四周扁平，背面菌落中间黄四周透明，边缘白
色、全圆，生长速度１ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｆ８－３ 花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝绿色、质密、匍匐生长，菌落扁平，背面菌落白色，边缘白色、不规则圆，生长速度３．１４
ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ２－４
茎Ｓｔｅｍ
叶Ｌｅａｆ
菌丝浅棕色、疏松、气生生长，菌落中间凸起四周扁平，背面菌落白色，边缘白色、不规则
圆，生长速度３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ２－１ 茎Ｓｔｅｍ
菌丝白色、疏松、气生生长，菌落中间凸起四周扁平，背面菌落白色，边缘白色、全圆，生长
速度８．３３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ４－９
茎Ｓｔｅｍ
叶Ｌｅａｆ
花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝黄色、疏松、匍匐生长，菌落中间凸起四周扁平，背面菌落中间黄色四周透明，边缘白
色、全圆，生长速度２．３３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｆ４－２
茎Ｓｔｅｍ
叶Ｌｅａｆ
花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝灰色、疏松、匍匐生长，菌落中间凸起四周扁平，背面菌落中间灰色四周透明，边缘透
明、不规则圆，生长速度４．９２ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｆ１１－２
茎Ｓｔｅｍ
花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝橘黄色、疏松、匍匐生长，菌落扁平，背面菌落橘黄色，边缘白色、椭圆，生长速度２．６７
ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ１２－１ 茎Ｓｔｅｍ 菌丝白色、质密、匍匐生长，菌落丘状，背面菌落白色、边缘白色、全圆，生长速度３．７ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｆ１５－６
茎Ｓｔｅｍ
花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝灰黄色、质密、匍匐生长，菌落凹凸不平，背面菌落灰黄色，边缘灰黄色、不规则圆，生
长速度３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ７－４ 茎Ｓｔｅｍ 菌丝白色、质密、匍匐生长，菌落丘状，背面菌落白色、边缘白色、纤毛圆，生长速度３．８３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ１０－１
茎Ｓｔｅｍ
花Ｆｌｏｗｅｒ
菌丝绿色、质密、匍匐生长，菌落丘状，背面菌落灰绿色，边缘绿色、全圆，生长速度３ｍｍ·ｄ－１
ＡＶ１Ｓ１４－２ 茎Ｓｔｅｍ 菌丝黄白色、质密、匍匐生长，菌落扁平，背面黄白色，边缘黄白色、全圆，生长速度１．３３ｍｍ·ｄ－１
０６０２
　１２期 曹丹丹等：变异黄芪内生真菌种群分布特征
２．２．２　内生真菌系统发育分析　　将变异黄芪内
生真菌基因组ＤＮＡ进行扩增获得５００ｂｐ左右的
５．８ＳｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列，将 ＰＣＲ 产物测序结果在
ＮＣＢＩ上进行ＢＬＡＳＴ对比，选取比对后相似系数较
高的种属序列用邻接法构建系统发育树（图１）。由
图１可知，所有的菌株分属于不同的真菌，结合菌落
形态及孢子特征可将菌株进行种属鉴定。此外，２１
株内生真菌据进化亲缘关系可分为种群Ⅰ和种群
Ⅱ，根据亲缘关系远近，种群Ⅰ又可分为种群 Ａ、种
群Ｂ和种群Ｃ，且自检支持率分别为７３％、１００％、
１００％。种群Ⅱ又可进一步分为种群Ｄ和种群Ｅ，自
检支持率分别为９９％和１００％，种群Ａ部分内生真
菌亲缘关系较远，自检支持率分别为７３％、７２％和
２８％，而种群Ｂ、Ｃ、Ｄ和Ｅ有较高的亲缘关系，自检
图１　基于５．８ＳｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列由邻近法构建的系统发育树
Ｆｉｇ．１　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｒｏｇｒａｍ　Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ（ＮＪ）ｂａｓｅｄ　ｏｎ　５．８ＳｒＤＮＡ－ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
１６０２
畜　牧　兽　医　学　报 ４５卷　
支持率分别为１００％、１００％、９９％和１００％。
２．３　变异黄芪内生真菌种属组成及分布特点
经形态学方法结合ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列分析技术
对３２１株内生真菌进行鉴定，发现３２１株内生真菌
分属于５纲７目１１科１７属（表３），其中Ｄｏｔｈｉｄｅｏ－
ｍｙｃｅｔｅｓ　ｓｐ．未确定科。Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ、炭角菌属
（Ｘｙｌａｒｉａ　ｓｐ．）、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｂａｓｉｃｏｌａ、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｍｉ－
ｃｒｏｓｐｏｒａ和粪壳属（Ｓｏｒｄａｒｉａｌｅｓ　ｓｐ．）从变异黄芪的
茎、叶和花３种组织中均分离获得，其分离率分别为
４７．９８％、１６．５１％、１１．２１％、３．７４％和２．４９％。由
此可见，Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ（图２Ａ、２Ｂ）在变异黄芪植株内
定植频率最高，其次是炭角菌属（Ｘｙｌａｒｉａ　ｓｐ．）（图
２Ｃ、２Ｄ），因此Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ为变异黄芪内生真菌的
优势菌。
Ａ．Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ的菌落；Ｂ．Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ的菌丝，４００×；Ｃ．Ｘｙｌａｒｉａｓｐ．的菌落；Ｄ．Ｘｙｌａｒｉａｓｐ．的菌丝，４００×
Ａ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｏｎｙ　ｏｆ　Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ；Ｂ．Ｔｈｅ　ｈｙｐｈａｅ　ｏｆ　Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ，４００×；Ｃ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｏｎｙ　ｏｆ　Ｘｙｌａｒｉａｓｐ．；Ｄ．Ｔｈｅ　ｈｙｐｈａｅ　ｏｆ
Ｘｙｌａｒｉａｓｐ．，４００×
图２　Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ和Ｘｙｌａｒｉａ　ｓｐ．的菌落特征及菌丝特征
Ｆｉｇ　２　Ｔｈｅ　ｃｏｌｏｎｙ　ｓｈａｐｅ　ａｎｄ　ｈｙｐｈａｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｏｆ　Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ａｎｄ　Ｘｙｌａｒｉａｓｐ．
　　Ｕｎｄｉｆｉｌｕｍ 的Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ和Ｕ．ｂｏｒｎｍｕｅｌｌｅｒｉ
确定到种，Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ（４７．９８％）为该属的优势种；
草根霉属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｓｐ．）的 Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｂａｓｉｃｏｌａ、
Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｓｕｂｔｈｅｍｏｐｈｉｌａ确
定到种，Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｂａｓｉｃｏｌａ（１１．２１％）为该属的优势
种；座坚壳属（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｐ．）的Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ　ａｕｓｔｒａ－
ｌｉｓ，Ｃｏｎｉｏｌａｒｉｅｌｌａ的Ｃｏｎｉｏｌａｒｉｅｌｌａ　ｇａｍｓｉｉ，毛壳菌
属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｓｐ．）的Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ　ｌｕｔｅｕｍ，柄孢
壳菌属（Ｚｏｐｆｉｅｌｌａ）的阔足柄孢壳菌（Ｚｏｐｆｉｅｌｌａ
ｌａｔｉｐｅｓ），枝孢属（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）的Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ
ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ，青霉属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐ．）的草酸
青霉菌（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｏｘａｌｉｃｕｍ），曲霉属（Ａｓｐｅｒｇｉｌ－
ｌｕｓ）的Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ，泡波曲霉属（Ｅｍｅｒｉ－
ｃｅｌｌａ　ｓｐ．）的泡波曲霉 （Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌａ），光黑壳属
Ｐｒｅｕｓｓｉａｓｐ．的Ｐｒｅｕｓｓｉａ　ａｕｓｔｒａｌｉｓ均已确定到种。
对变异黄芪内生真菌种属分布情况进行比较
（图３），发现变异黄芪内生真菌在所有分离组（总体
分离率）中叶的分离率最高，但其种属分离率最低；
茎的种属分离率（７１．４３％），花和叶分别为５２．３８％
和４７．６２％，这说明在变异黄芪３种植物组织中，茎
内生真菌种属最为丰富。
３　讨　论
从目前研究过的植物来看，未发现不能分离到
图３　变异黄芪不同组织内生真菌分布情况
Ｆｉｇ．３　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　Ａ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ
的内生真菌，因此可以推断内生真菌在植物体内是
普遍存在的［２０］。但是不同植物、甚至相同植物不同
部位分离到的内生真菌的种类和数量具有很大的差
异，这主要与气候、环境、采样方法、保存条件以及植
物本身的感染性等有关［２１］。由于乙醇和ＮａＣｌＯ对
不同组织的渗透能力不同，并且渗透能力受其浓度
和持续时间的影响，并且消毒时间短不能将植物组
织表面菌杀死达不到消毒的目的，而时间长又可能
将植物组织内部的内生真菌误杀，因此，本试验采取
不同的消毒时间以期分离得到更多的内生真菌。在
所有的消毒条件下，叶的内生真菌分离率最高，表明
２６０２
　１２期 曹丹丹等：变异黄芪内生真菌种群分布特征 ３６０２
畜　牧　兽　医　学　报 ４５卷　４６０２
　１２期 曹丹丹等：变异黄芪内生真菌种群分布特征
变异黄芪叶受到内生真菌侵染的频率最高，其次是
茎，最后是花，这可能是由于叶和茎在植物的生长期
中出现的时间比较早且暴露在空气中的时间比较
长，所以受真菌侵染的概率以及侵染强度也会相应
增加。此外，叶内生真菌分离率较茎高，这可能是由
于叶组织特性以及叶在环境中暴露的面积大于茎而
有利于孢子的沉积和附着，在适宜的条件下使内生
真菌生存。花的内生真菌分离率最低，这可能是组
织特异性以及生长时间较短导致。茎、叶、花的种属
分离率分别为７１．４３％、４７．６２％和５２．３８％（图３），
茎的种属分离率远高于叶和花，这可能与不同内生
真菌定植的组织特异性有关。
变异黄芪由于其含有主要毒素苦马豆素成为农
牧区的主要毒草之一，目前研究发现，棘豆属
（Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｓｐ．）和黄芪属（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｓｐ．）疯草中
的苦马豆素由其内生真菌（Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ）合成，本试
验在变异黄芪的茎、叶、花中均分离到大量的内生真
菌Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ，这与Ｄ．Ｌ．Ｂａｕｃｏｍ等对美国黄芪
属疯草中两种产苦马豆素内生真菌Ｕｎｄｉｆｉｌｕｍ 的
研究相一致［２２］。此外，本试验在变异黄芪的茎和叶
中分离到Ｕｎｄｉｆｉｌｕｍ 属内生真菌Ｕｎｄｉｆｉｌｕｍ　ｂｏｒｎ－
ｍｕｅｌｌｅｒｉ，此种内生真菌也分属于Ｕｎｄｉｆｉｌｕｍ 属，其
能否产苦马豆素仍有待进一步研究。从变异黄芪的
茎、叶和花３种组织中均分离到内生真菌Ｕ．ｏｘｙｔ－
ｒｏｐｉｓ、炭角菌属（Ｘｙｌａｒｉａｓｐ．）、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｂａｓｉｃｏｌａ、
Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ和粪壳属（Ｓｏｒｄａｒｉａｌｅｓ　ｓｐ．），
可见这几种菌对变异黄芪的定植并无组织特异性。
Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．、Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌａ、Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ　ｓｐ．和
Ｐｒｅｕｓｓｉａ　ａｕｓｔｒａｌｉｓ仅从茎中分离到，Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ　ａｕｓ－
ｔｒａｌｉｓ、Ｃｏｎｉｏｌａｒｉｅｌｌａ　ｇａｍｓｉｉ和Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｃｌａ－
ｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ仅从叶中分离到，Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ　ｌｕｔｅ－
ｕｍ、Ｚｏｐｆｉｅｌｌａ　ｌａｔｉｐｅｓ和Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｏｘａｌｉｃｕｍ 仅
从花中分离到，这可能是由于这些菌定植具有组织
特异性或样品中的内生真菌未被全部分离。与之前
从疯草，包括甘肃棘豆、小花棘豆、黄花棘豆、兰花棘
豆、急弯棘豆以及变异黄芪中分离到的内生真菌相
比，本研究中分离到７株之前没有分离到的内生真
菌，包括Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ　ａｕｓｔｒａｌｉｓ、Ｓｏｒｄａｒｉａｌｅｓ　ｓｐ．、Ｃｌａ－
ｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｏｘａｌｉｃｕｍ、
Ｔｈｉｅｌａｖｉａ　ｓｕｂｔｈｅｍｏｐｈｉｌａ、Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ　ｓｐ．和
Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａｓｐ．，这可能与内生真菌的感染性以
及宿主植物的种属、易感性、生存环境、采样方法、保
存条件等有关。内生真菌可产生丰富的次生代谢产
物，且这些次生代谢产物大多具有生物活性［２３］，可
在生物制药、农业生产、工业发酵等方面广泛应用。
因此，从疯草中分离内生真菌、探求其种群分布特
征，得到丰富的内生真菌种质资源，可为将来从内生
真菌次生代谢产物中寻找可利用的生物活性物质，
并且也可为后续遗传多样性研究提供丰富的菌种资
源。此外，从变异黄芪的营养成分分析，可知变异黄
芪含粗蛋白、粗脂肪、矿物元素和多种氨基酸，是一
种潜在的牧草资源，尤其在干旱少雨的年份和冬春
季节，可食牧草严重匮乏，而变异黄芪却能茂盛生
长。因此，如果能够根据其内生真菌种群分布特征，
找出其产毒内生真菌，并将其诱导突变使其不产生
有毒代谢产物，则变异黄芪便能大量为畜牧业所利
用。
４　结　论
Ｕ．ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ、炭角菌属（Ｘｙｌａｒｉａ　ｓｐ．）、Ｔ．ｂａ－
ｓｉｃｏｌａ、Ｔ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ和粪壳属（Ｓｏｒｄａｒｉａｌｅｓ　ｓｐ．）在
变异黄芪不同组织部位均有分布，其中Ｕ．ｏｘｙｔｒｏ－
ｐｉｓ为变异黄芪内生真菌的优势菌；变异黄芪内生真
菌多样性比较丰富，其数量、种属组成以及分布存在
明显组织差异，叶是内生真菌侵染和定植的主要部
位，而茎内生真菌多样性最高。
参考文献：
［１］　周启武，赵宝玉，路　浩，等．中国西部天然草地疯草
生态及动物疯草中毒研究与防控现状［Ｊ］．中国农业
科学，２０１３，４６（６）：１２８０－１２９６．
［２］　张有辉，潘发利，杨万科，等．巴彦洪格日苏木羊变异
黄芪中毒病的调查及防治［Ｊ］．动物医学进展，２００５，
２６（４）：１１８．
［３］　赵宝玉，童德文，葛鹏斌，等．我国西部草原疯草危害
调查［Ｊ］．中国草地，２００３，２５（４）：６５－６８．
［４］　王生奎，安清聪，李志祥，等．家兔及绵羊变异黄芪中
毒的病理形态学观察［Ｊ］．甘肃畜牧兽医，１９９８，２８
（４）：１４－１５．
［５］　姚静雯，冯　欢，袁玉川，等．草原毒草变异黄芪的研
究进展［Ｊ］．中国草地学报，２０１３，３５（３）：１１０－１１５．
［６］　ＣＯＯＫ　Ｄ，ＧＲＵＭ　Ｄ　Ｓ，ＧＡＲＤＮＥＲ　Ｄ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｆｌｕ－
ｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ｏｎ　ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ　ｃｏｎｃｅｎ－
ｔｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｓｅｒｉｃｅａ［Ｊ／ＯＬ］．Ｔｏｘｉｃｏｎ，２０１３，
６１：１０５－１１１．［２０１４－９－２２］．ｈｔｔｐ：／／ａｃ．ｅｌｓ－ｃｄｎ．ｃｏｍ／
Ｓ００４１０１０１１２００７８５４／１－ｓ２．０－Ｓ００４１０１０１１２００７８５４－ｍａｉｎ．
ｐｄｆ？＿ｔｉｄ＝２ｂ０ｂｃｂｃｃ－４２３６－１１ｅ４－８ｅ３ｅ－０００００ａａｂ０ｆ２６＆ａｃｄｎａｔ
５６０２
畜　牧　兽　医　学　报 ４５卷　
＝１４１１３７６２９４＿９２ｅ７２ｂ５０９９ｆ４ｆ６３６ｆ０１ｂａｃ８４ｂ８６３ｅｃｃｂ．
［７］　ＧＲＵＭ　Ｄ　Ｓ，ＣＯＯＫ　Ｄ，ＧＡＲＤＮＥＲ　Ｄ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｆｌｕ－
ｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓｅｅｄ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ａｍｏｕｎｔｓ　ｏｎ　ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ　ｃｏｎ－
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ａｎｄ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｌｏｃｏｗｅｅｄｓ
［Ｊ］．Ｊ　Ａｇｒｉｃ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２０１２，６０（３３）：８０８３－８０８９．
［８］　ＣＯＯＫ　Ｄ，ＧＡＲＤＮＥＲ　Ｄ　Ｒ，ＧＲＵＭ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｗａｉｎｓｏ－
ｎｉｎｅ　ａｎｄ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｉｎ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｍｏｌｌ－
ｉｓｓｉｍｕｓ　ａｎｄ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｌｅｎｔｉｇｉｎｏｓｕ［Ｊ］．Ｊ　Ａｇｒｉｃ　Ｆｏｏｄ
Ｃｈｅｍ，２０１１，５９（４）：１２８１－１２８７．
［９］　郭良栋．内生真菌研究进展［Ｊ］．菌物系统，２００１，２０
（１）：１４８－１５２．
［１０］　文才艺，吴元华，田秀玲．植物内生菌研究进展及其存
在的问题［Ｊ］．生态学杂志，２００４，２３（２）：８６－９１．
［１１］　孙剑秋，郭良栋，臧　威，等．药用植物内生真菌及活
性物质多样性研究进展［Ｊ］．西北植物学报，２００６，２６
（７）：１５０５－１５１９．
［１２］　路　浩，马　尧，赵宝玉，等．急弯棘豆内生真菌的分
离与鉴定［Ｊ］．畜牧兽医学报，２０１０，４１（７）：９０２－９０８．
［１３］　余永涛，王建华．产苦马豆素疯草内生真菌的分离鉴
定及其遗传多态性研究［Ｊ］．动物毒物学，２００９，２４
（１）：３６－３７．
［１４］　ＢＲＡＵＮ　Ｋ，ＲＯＭＥＲＯ　Ｊ，ＬＩＤＤＥＬＬ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｄｕｃ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ　ｂｙ　ｆｕｎｇａｌ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｏｆ　ｌｏｃｏｗｅｅｄ
［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌ　Ｒｅｓ，２００３，１０７（８）：９８０－９８８．
［１５］　周启武，赵宝玉，路　浩，等．苦马豆内生真菌分离鉴
定与多样性分析［Ｊ］．畜牧兽医学报，２０１３，４４（３）：
４６５－４７４．
［１６］　何　佳，刘笑洁，赵启美，等．植物内生真菌分离方法
的研究［Ｊ］．食品科学，２００９，３０（１５）：１８０－１８３．
［１７］　张素轩，邵力平，沈瑞祥．真菌分类学［Ｍ］．北京：中国
林业出版社，１９９６．
［１８］　魏景超．真菌鉴定手册［Ｍ］．上海：上海科学技术出版
社，１９７９．
［１９］　马　尧．产苦马豆素真菌的分离鉴定及发酵条件优化
［Ｄ］．杨凌：西北农林科技大学，２０１０．
［２０］　Ｈｏｖｅｌａｎｄ　Ｃ　Ｓ．Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ　ａｎｄ　ｅｃｏｎｏｍｉｃ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｔｏ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ａｎｉ－
ｍａｌｓ　ａｎｄ　ｇｒａｓｓ　ｐｌａｎｔ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃ　Ｅｃｏｓｙｓｔ　Ｅｎｖｉｒｏｎ，
１９９３，４４（１）：３－１２．
［２１］　王　磊，章卫民，潘清灵，等．白木香内生真菌的分离
及分子鉴定［Ｊ］．菌物研究，２００９，７（１）：４２．
［２２］　ＢＡＵＣＯＭ　Ｄ　Ｌ，ＲＯＭＥＲＯ　Ｍ，ＢＥＬＦＯＮ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｗｏ
ｎｅｗ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｕｎｄｉｆｉｌｕｍ，ｆｕｎｇａｌ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｏｆ　Ａｓ－
ｔｒａｇａｌｕｓ（ｌｏｃｏｗｅｅｄｓ）ｉｎ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ［Ｊ］．Ｂｏｔａ－
ｎｙ，２０１２，９０（９）：８６６－８７５．
［２３］　陈基萍，赵宝玉，路　浩，等．中国主要疯草内生真菌
分离鉴定及其抑菌活性研究［Ｊ］．畜牧兽医学报，
２０１２，４３（９）：１４７１－１４７８．
（编辑　白永平）
６６０２