全 文 ：茺蔚子药材储藏过程中水苏碱变化的影响因素分析
张美玲1， 迟铁铮2， 单英俏1， 姜丽娇1， 于 野1， 贡济宇1* ， 蔡广知1*
(1． 长春中医药大学，吉林 长春 130117;2． 吉林市人民医院，吉林 吉林 132001)
收稿日期:2014-12-29
基金项目:吉林省重点科技攻关项目 (20130338SC)
作者简介:张美玲 (1990—) ，女，硕士生，研究方向为中药活性物质。E-mail:jlseven_fairy@ 163． com
* 通信作者:贡济宇 (1960—) ，女，教授，研究方向为药物分析。Tel: (0431)86172207，E-mail:gjy0431@ 126． com
蔡广知 (1977—)，男，讲师，研究方向为中药鉴定及质量分析。Tel:13159751573，E-mail:80188429@ qq． com
摘要:目的 以水苏碱为指标来考察影响茺蔚子药材储藏过程中水苏碱含有量的因素及其变化趋势。方法 采用
HPLC-ELSD法测定不同产地茺蔚子中水苏碱，选用以氨基键合聚合物为填充剂的色谱柱 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，
流动相为乙腈 － 0. 2%醋酸溶液 (84 ∶ 16) ;体积流量为 1. 0 mL /min，柱温是 35 ℃，蒸发光闪射检测器。考察温度、
光照和时间对茺蔚子中水苏碱的影响。结果 方法平均回收率为 98. 3%，ＲSD = 1. 1%。不同产地的茺蔚子药材中水
苏碱的含有量为 2. 19 ～ 3. 13 mg /g;温度对盐酸水苏碱的含有量无影响;光照储存 7 个月后药材中水苏碱的含有量降
低 44. 34%;储存 24 个月药材中水苏碱的含有量下降 18. 83%。结论 建立了茺蔚子药材的成分定量测定方法，填补
了药材标准的空缺;光照条件下，茺蔚子药材中水苏碱含有量明显下降，水苏碱见光易降解，故茺蔚子药材、饮片及
其相关制剂在储存或生产过程中均需要避光保存。尽量缩短药材周转期。
关键词:茺蔚子;高效液相色谱-蒸发光散射法;盐酸水苏碱;影响因素
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)05-1056-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 05. 028
Influencing factors in the change of stachydrine hydrochloride in Leonuri Fructus
during storage
ZHANG Mei-ling1， CHI Tie-zheng2， SHAN Ying-qiao1， JIANG Li-jiao1， YU Ye1， GONG Ji-yu1* ，
CAI Guang-zhi1*
(1． Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China;2． Jilin City People’s Hospital，Jilin 132001，China)
KEY WOＲDS:Fructus Leonuri;HPLC-ELSD;stachydrine hydrochloride;influencing factors
茺蔚子为唇形科植物益母草 Leonurus japonicus
Houtt． 的干燥成熟果实［1］，具有活血调经，清肝
明目的功效［2］，为常用的妇科用中药，全国大部
分地区均有分布。含益母草宁碱、水苏碱及脂肪
油［3］，油酸及亚麻酸占油总量的 84. 84%，另含维
生素 A样物质［4］。2010 年版 《中国药典》中茺蔚
子药材标准无成分定量测定项，水苏碱是茺蔚子中
的主要活性成分之一，本实验拟建立茺蔚子中水苏
碱的 HPLC-ELSD定量测定法，并对药材中水苏碱
的影响因素及变化趋势进行分析。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 安捷伦 1100 高效液相色谱仪，SEDEX
55 蒸发光散射检测器，自动进样器，安捷伦液相
色谱 工 作 站， Asahipak NH2P-50 4E 色 谱 柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm);超声波提取器 (昆山
禾创超声仪有限公司) ;AL204 型万分之一电子天
平 (瑞士) ，AB135-S 型十万分之一电子天平
(瑞士)。
1. 2 试药 盐酸水苏碱对照品 (批号 110712-
201010，购于中国食品药品检定研究院) ;药材采
自全国各地;乙腈为色谱纯，水为超纯水;醋酸为
优级纯，其他试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸水苏碱对
照品 4. 87 mg，置 10 mL棕色量瓶中，加 70%乙醇
溶解，定容至刻度，摇匀，即得。
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2. 2 供试品溶液的制备 取茺蔚子药材粉末 (过
三号筛)约 3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精
密加入 70% 乙醇 25 mL，称定质量，超声处理
30 min，放冷，再称定质量，用 70%乙醇补足失质
量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品
溶液。
2. 3 色谱条件与系统适用性试验 氨基键合聚合
物为填充剂的 Asahipak NH2P-50 4E 色谱柱 (250
mm × 4. 6 mm，5 μm);流动相为乙腈-0. 2%醋酸
溶液 (84 ∶ 16);体积流量 1 mL /min;柱温 35 ℃;
SEDEX 55 蒸发光散射检测器 (漂移管温度 35 ℃，
压力为 2. 2 bar) ，进样量为 5 μL。理论塔板数按盐
酸水苏碱计应不低于 6 000。对照品和供试品色谱
图见图 1 和图 2。
图 1 盐酸水苏碱对照品色谱图
Fig. 1 HPLC chromatogram of stachydrine
reference substance
图 2 茺蔚子色谱图
Fig. 2 HPLC chromatogram of Leonuri Fructus
2. 4 方法学验证试验
2. 4. 1 线性关系考察 分别精密吸取上述盐酸水
苏碱对照品溶液 (每 1 mL含对照品 0. 487 mg)1、
3、5、7、9 μL，注入液相色谱仪，以进样量
(μg)取对数为横坐标，峰面积积分值取对数为纵
坐标，绘制标准曲线。计算得回归方程 y =
1. 550 3x + 2. 149 5，r = 0. 999 9，表明盐酸水苏碱
在 0. 487 ～ 4. 383 μg范围内线性关系良好。
2. 4. 2 精密度试验 精密吸取同一盐酸水苏碱对
照品溶液及供试品溶液连续进样 6 次，每次 5 μL，
测得盐酸水苏碱峰面积的 ＲSD 分别为 1. 2%、
1. 9%，表明仪器的精密度良好。
2. 4. 3 重复性试验 取同一批茺蔚子药材 6 份，
精密称定，按 “2. 2”项下方法制备供试品溶液，
依法测定，测得水苏碱 ＲSD为 1. 7%，平均含有量
为 2. 62 mg /g，表明方法重复性良好。
2. 4. 4 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液及
对照品溶液各 5 μL，分别在 0、2、4、8、12、
24 h注进样测定，测得盐酸水苏碱峰面积的 ＲSD
分别为 1. 0%、1. 5%，表明盐酸水苏碱对照品溶
液和供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 4. 5 加样回收率试验 精密称取已知含有量的
样品 6 份，每份约 1. 5 g，置锥形瓶中，分别精密
加入盐酸水苏碱对照品适量，按 “2. 2”项下方法
制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果盐
酸水苏碱的平均回收率为 98. 3%，ＲSD 为 1. 1%，
说明本方法准确度良好。
表 1 回收率试验结果
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests
称样量 /
g
原有量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均回收率 /
%
ＲSD /
%
1. 508 0 4. 825 8 5. 298 3 10. 124 1 97. 94 98. 3 1. 1
1. 454 6 4. 655 4 5. 530 5 10. 185 9 99. 65
1. 472 5 4. 712 2 5. 534 0 10. 246 2 98. 65
1. 562 4 4. 999 8 5. 534 1 10. 533 9 97. 43
1. 474 7 4. 719 3 5. 093 7 9. 813 0 96. 84
1. 570 1 5. 024 7 5. 652 4 10. 677 1 99. 34
2. 5 样品测定 取 16 份不同产地的茺蔚子药材，
按“2. 2”项下方法各平行制备两份供试品溶液，
按“2. 3”项下条件测定，记录水苏碱峰面积并计
算，结果见表 2。
2. 6 影响因素考察
2. 6. 1 温度控制 取茺蔚子 3 批每批 9 份样品
(每份 100 g，置白色透明玻璃瓶)，分别放于
(15 ± 1)℃、 (25 ± 1)℃和 (35 ± 1)℃恒温箱中，
每批每箱 3 份，用黑色不透光的纸包裹，每个月取
适量样品，按上述方法制备样品溶液并测定水苏
碱量。
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表 2 不同产地茺蔚子药材中盐酸水苏碱的测定
Tab. 2 Determination of the content of stachydrine nydro
chloride in Leonuri Fructus from different
growing areas
编号 产地
盐酸水苏碱 /
(mg·g － 1)
编号 产地
盐酸水苏碱 /
(mg·g － 1)
1 河南省方城县 2. 85 9 四川省大邑县 2. 40
2 河南省信阳市 2. 75 10 四川省温江区 2. 28
3 山东省沂水县 2. 75 11 吉林省抚松县 2. 62
4 浙江省市嵊县 2. 60 12 吉林省集安县 2. 76
5 内蒙 敖汉旗 2. 45 13 黑龙江省海林县 2. 19
6 安徽省 砀山 2. 80 14 黑龙江省青冈县 2. 24
7 安徽省 滁州 2. 70 15 辽宁省大洼县 3. 02
8 安徽省 泗县 2. 61 16 辽宁省建平县 3. 13
2. 6. 2 光照控制 取茺蔚子 3 批每批 6 份样品
(每份 100 g，置白色透明玻璃瓶) ，放于留样室同
一地点的样品架，每批次取 3 份，避光保存 (黑
色遮光纸包裹)，另 9 瓶见光保存 (白色透明玻璃
瓶) ，每月取上述条件储存的样品适量，按上述方
法制备样品溶液并测定水苏碱量。
2. 6. 3 储存时间考察 取茺蔚子 3 批每批 3 份样
品，25 ℃避光放置 (黑色遮光纸包裹)，定期取上
述条件储存样品适量，按上述方法制备样品溶液并
测定水苏碱量。
2. 7 影响因素考察结果
2. 7. 1 温度对水苏碱的影响 在 (15 ± 1)℃、
(25 ± 1)℃ 和 (35 ± 1)℃条件下，储存 7 个月后
茺蔚子中水苏碱平均含有量分别下降 2. 30%、
2. 30%和 2. 60%，说明温度对药材中水苏碱的含
有量影响较小。结果见图 3。
2. 7. 2 光照对水苏碱的影响 光照对茺蔚子中水
苏碱的含有量有显著影响，避光保存 7 个月，3 批
图 3 温度对茺蔚子药材中盐酸水苏碱的影响
Fig. 3 Effect of temperature on the contents of hydro-
chloric stachydrine in Leonuri Fructus medici-
nal materials
产品中水苏碱的平均含有量为 3. 22 mg /g，见光保
存，水苏碱的平均含有量为 1. 79 mg /g，含有量降
低 44. 34%，见光降解为水苏碱含有量下降的主要
原因。结果如图 4。
图 4 光照对茺蔚子中水苏碱的影响
Fig. 4 Effect of light on the contents of hydrochloric
stachydrine in Leonuri Fructus medicinal mate-
rials
2. 7. 3 储存时间考察结果 随储存时间的延长，
茺蔚子中水苏碱的含有量逐步减少，到 24 个月时，
水苏碱含有量下降 18. 83%。结果见表 3。
表 3 储存时间对茺蔚子中水苏碱的影响
Tab. 3 Effect of storage time on the content of of hydrochloric stachydrine in Leonuri Fructus medicinal materials
指标 0 月 1 月 2 月 4 月 6 月 8 月 10 月 12 月 15 月 18 月 24 月
盐酸水苏碱 /(mg·g － 1) 3. 08 3. 07 3. 03 2. 99 2. 95 2. 88 2. 81 2. 72 2. 65 2. 59 2. 40
保留率 /% 100 99. 68 98. 38 97. 08 95. 78 93. 51 91. 23 88. 31 86. 04 84. 09 81. 17
3 讨论
《中国药典》2010 年版中茺蔚子药材的质量标
准中只作了定性鉴别规定，没有成分定量测定的具
体标准，本实验建立了茺蔚子药材中水苏碱的
HPLC-ELSD测定方法，水苏碱属于季铵碱，最大
吸收波长 192 nm 也仅有微弱吸收，使用紫外检测
器有信号响应值小、基线噪音大、基线不易稳定等
因素影响测定结果，蒸发光散射检测器能克服上述
缺点［5-9］，所以采用通用型检测器蒸发光散射检测
器进行检测。
实验参数及条件的考察。供试品溶液的制备
时，曾比较乙醇、70%乙醇和盐酸甲醇 3 种溶剂的
提取效果［10-12］，提取的完全程度 70% 乙醇 ＞ 乙
醇 ＞盐酸甲醇;提取方法考察了加热回流法和超声
提取法，两法提取效果没有差异，故选择简便、省
时的超声提取法。曾考察 《中国药典》2010 年版
益母草药材中盐酸水苏碱含量测定的色谱条件，色
谱柱选用丙烯酰胺键合硅胶 (Venusil HILIC
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4. 6 mm ×250 mm)作为填充剂［1］，结果表明，该
类色谱柱的基线噪音较高，无法达到定量要求。后
采用氨基键合聚合物 (Asahipak NH2P50 4E 4. 6
mm ×250 mm)作为填充剂，结果表明，基线噪音
低，重复性好，能够满足定量要求，故选择氨基键
合聚合物为填充剂的色谱柱进行测定。经比较乙腈
-0. 2%磷酸溶液 (80 ∶ 20)与乙腈-0. 2%磷酸溶液
(84 ∶ 16)两种流动相，结果乙腈-0. 2%磷酸溶液
(84 ∶ 16)作为流动相时，色谱峰分离度高，无拖
尾，阴性无干扰，因此选择乙腈-0. 2% 磷酸溶液
(84 ∶ 16)作为流动相。
不同产地的茺蔚子中水苏碱的含有量存在较大
差异，其中辽宁省大洼县所产茺蔚子中水苏碱的含
有量最高，16 份不同产地的茺蔚子中水苏碱的平
均含有量为 2. 63 mg /g，乘以系数 0. 8，水苏碱的
量为 2. 10 mg /g，可作为茺蔚子药材质量评价的参
考标准。
茺蔚子中水苏碱含有量的影响因素结果显示水
苏碱见光易降解［13-14］，故茺蔚子药材储藏过程中
应常温、避光保存，保存期应控制在 24 个月内。
本实验对于指导茺蔚子药材及其制剂产品的规范化
生产及安全有效使用具有现实意义。
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