全 文 ：山 东 农 业 科 学 2015，47(10):102 ～ 105 Shandong Agricultural Sciences
DOI:10． 14083 / j． issn． 1001 － 4942． 2015． 10． 026
收稿日期:2015 －05 －27
基金项目:公益性行业(农业)科研专项经费项目“兽药残留与动物源病原菌耐药性防控技术研究”(项目编号 201203040) ;国家科
技重大专项“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”子课题“超耐药菌的流行病学和防治技术研究”(课题编号:
2013ZX10004217003001) ;山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队环境控制岗位专家经费项目(编号:SDAIT － 13 － 011 － 09)
作者简介:骆延波(1973 －) ，男，研究员，现从事新兽药研制与细菌抗药性研究工作。E － mail:luoyanbosaas@ 163． com
* 同为第一作者
＊＊通讯作者:刘玉庆(1969 －) ，男，研究员，现从事细菌抗药性研究与新兽药研制工作。E － mail:liuiuqing@ 163． com
高效液相色谱 －蒸发光散射法检测雪胆溶液
中雪胆甲素的研究
骆延波1，刘晓东2* ，胡明1，李璐璐1，齐静1，刘玉庆1＊＊
(1．山东省农业科学院畜牧兽医研究所 /山东省畜禽疫病防控与繁育重点实验室，山东 济南 250100;
2．山东省农业科学院，山东 济南 250100)
摘 要:采用 HPLC － ELS法，C18 柱(4． 6 mm × 250 mm) ，流动相为乙腈 －水(40∶ 60) ;流速 0． 8 mL /min;
柱温为室温;检测器为 Alltech 2000 蒸发光散射检测器;检测温度 100℃;ELSD 载气为高纯氮气;载气压力为
0． 35 MPa，对雪胆溶液中雪胆甲素含量进行测定。结果表明:在该方法下，雪胆甲素进样量在 3． 34 ～ 16． 70 μg
之间，进样量的自然对数与峰面积积分值的自然对数呈良好的线性关系，其平均回收率为 98． 81%，ＲSD 为
0． 92%(n = 6)。所建方法简便易行、准确可靠，可用于雪胆溶液中雪胆甲素含量的测定。
关键词:雪胆溶液;雪胆甲素;高效液相色谱 －蒸发光散射法;含量测定
中图分类号:S853． 73 文献标识号:A 文章编号:1001 －4942(2015)10 －0102 －04
Detection of Hemsleya A in Hemsleya Solution by
HPLC － Evaporative Light Scattering Method
Luo Yanbo1，Liu Xiaodong2* ，Hu Ming1，Li Lulu1，Qi Jing1，Liu Yuqing1＊＊
(1． Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，Shandong Academy of Agricultural Sciences /
Shandong Provincial Key Laboratory of Animal Breeding and Disease Controlling，Jinan 250100，China;
2． Shandong Academy of Agricultural Sciences，Jinan 250100，China)
Abstract The Hemsleya A in Hemsleya solution was detected by HPLC － ELS method with C18 column
(4． 6 mm ×250 mm) ，mobile phase of acetonitrile － water (40∶ 60) ，flow rate of 0． 8 mL /min，column tem-
perature of room temperature，detector of Alltech 2 000 for evaporative light scattering detection，detection tem-
perature of 100℃，ELSD carrier gas of high purity nitrogen，carrier gas pressure of 0． 35 MPa． The results
showed that when the injection dosage of Hemsleya A was 3． 34 ～ 16． 70 μg，the natural logarithm of injection
dosage showed good linear relationship with the natural logarithm of peak area values，and the average recovery
rate was 98． 81% with ＲSD of 0． 92 % (n = 6)． The method was simple，accurate and reliable，so it could be
used to detect the Hemsleya A content in Hemsleya solution．
Key words Hemsleya solution;Hemsleya A;High performance liquid chromatography － evaporative
light scattering(HPLC － ELC)method;Content detection
雪胆溶液是经提取雪胆制成的单味药制剂，
其主要有效成分为雪胆甲素。雪胆提取物的检测
很多采用高效液相 －紫外光检测法，均为末端吸
收法［1，2］。在用高效液相 － 紫外检测法测定时，
由于雪胆甲素只在紫外末端有吸收，若采用低波
长(200 ～ 210 nm)检测，则溶剂背景难以消除，难
以得到理想的测定结果［1］。而示差折光检测器
和蒸发光散射检测器均能够避免紫外检测时末端
吸收的缺陷。示差折光检测器是基于样品组分的
折射率与流动相溶剂折射率有差异的原理。蒸发
光散射检测器是基于把从色谱柱分离的组分雾化
为小颗粒，在其穿过光束时导致光散射而被检测
的原理。但是考虑到示差折光检测器对环境要求
极为苛刻，而且灵敏度低，而利用蒸发光散射检测
器可以利用黄芪甲苷分子量大、熔点较高的优点，
有效避免因为末端吸收而带来的杂质峰干扰，是
测定黄芪甲苷较理想的方法［3，4］。为进一步提高
检测的精确度，对雪胆甲素的含量采用 HPLC 法，
用蒸发光散射检测器进行检测。
1 材料与方法
1． 1 材料
雪胆:购自河北安国中药批发市场;雪胆甲素
对照品:购自中国药品生物制品检定所，批号
111518 － 200602;雪胆溶液:由山东德州神牛药业
有限公司提供，样品批号为 20120501、20120502、
20120503。
1． 2 仪器与试药
岛津 LC －10A高效液相色谱仪，ELSD － All-
tech 2000 蒸发光散射检测;色谱柱:C18，4． 6 mm ×
250 mm，乙腈为色谱纯(迪马) ;水为纯净水(娃哈
哈)。
1． 3 HPLC － ELS检测法的色谱条件
参照有关文献［7 ～11］，选用 C18柱(4． 6 mm ×
250 mm) ，流动相为乙腈 －水(40 ∶ 60) ;流速0． 8
mL /min;柱温为室温;检测器为 Alltech 2000 蒸发
光散射检测器;检测温度 100℃;ELSD 载气为高
纯氮气;载气压力为 0． 35 MPa。
1． 4 试验用溶液制备
1． 4． 1 样品溶液制备 方法(1) :精密量取雪胆
溶液 1 mL 置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释并定容，
再精密移取 5 mL置 25 mL量瓶中，加甲醇定容至
刻度，摇匀，滤过，备用。方法(2) :精密量取雪胆
溶液 1 mL置 25 mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至
刻度，摇匀，滤过，备用。采用上述色谱条件进行
试验，记录峰面积，方法(1)得到的峰面积为
222 491，方法(2)得到的峰面积为 616 732，故取
方法(2)制备样品溶液。
1． 4． 2 对照品溶液制备 精密称取雪胆甲素对
照品 20． 88 mg置 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀
释至刻度，制成 0． 835 mg /mL 的溶液，摇匀，滤
过，备用。
1． 4． 3 空白对照溶液 甲醇溶液。
1． 4． 4 对照药材溶液制备 称取 1． 0 g 雪胆药
材，加 90%乙醇 50 mL，超声提取 30 min，滤过，取
滤液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解移至 25 mL 量瓶
中，定容，摇匀，滤过，备用。
1． 5 检测方法检验
1． 5． 1 专属性试验 取空白对照溶液、对照品溶
液、对照药材溶液、样品溶液，按照色谱条件进行
试验，记录色谱图。
1． 5． 2 线性关系考察 精密量取上述对照品溶
液 2、3、4、6、10 mL，加甲醇稀释至 10 mL，摇匀。
分别精密量取上述溶液 20 μL注入高效液相色谱
仪，测其峰面积积分值，以峰面积(A)的自然对数
为纵坐标，进样量(C)的自然对数为横坐标，计算
回归方程。
1． 5． 3 精密度试验 取对照品溶液 10 μL，连续
进样 6 次，测定峰面积积分值，求其自然对数、平
均值和 ＲSD。
1． 5． 4 稳定性试验 取样品溶液，在 0、2、4、8、
12 h分别进样，测定峰面积积分值，求其自然对
数。
1． 5． 5 重现性试验 重复上述操作，对批号为
20120501 的样品溶液各测定 6 份，取平均值。
1． 5． 6 回收率试验 取批号为 20120501 的样品
溶液 0． 5 mL，共 6 份，分置 25 mL 量瓶中。称取
35． 2 mg 雪胆甲素置 50 mL 量瓶，加甲醇稀释至
刻度，摇匀，再分别精密量取 5 mL 添加至放有样
品溶液的量瓶中。按 1． 3 的色谱条件进行测定，
计算回收率。
回收率 =测得量 －样品中含量
加入对照品的量
× 100%
1． 5． 7 样品测定 按 1． 3 的色谱条件对 3 批样
301第 10 期 骆延波，等:高效液相色谱 －蒸发光散射法检测雪胆溶液中雪胆甲素的研究
品溶液进行测定，重复 2 次。
2 结果与分析
2． 1 专属性
由图 1 可见，在样品溶液色谱图中，与对照品
溶液和对照药材溶液相同保留时间处，有相同的
色谱峰呈现;在空白对照溶液色谱图中，相同保留
时间处无相同的色谱峰呈现，说明空白无干扰。
图 1 试验用溶液图谱
2． 2 线性关系
表 1 和图 2 结果表明，雪胆甲素进样量在
3． 34 ～16． 70 μg之间，进样量(C)的自然对数与峰
面积积分值(A)的自然对数呈良好的线性关系。
表 1 雪胆甲素峰面积
进样量(μg) 峰面积(A) ln(C) ln(A)
3． 34 322554 1． 2059 12． 6840
5． 01 611946 1． 6114 13． 3244
6． 68 963858 1． 8991 13． 7787
10． 02 1788454 2． 3046 14． 3969
16． 70 4046945 2． 8154 15． 2135
图 2 雪胆甲素标准曲线
2． 3 精密度
表 2 结果显示，ln(A)平均值为 12． 6889，
ＲSD为 0． 023%，仪器精密度良好。
表 2 精密度试验结果
A 322802 323048 324810 324796 324884 324525
ln(A) 12． 6848 12． 6856 12． 6910 12． 6909 12． 6912 12． 6901
2． 4 稳定性
表 3 结果显示，样品溶液在 12 h 内稳定性良
好。
表 3 稳定性试验结果
时间(h) 0 1 2 4 8 12 平均 ＲSD(%)
A 842951 845202 855385 841879 857268 857843
ln(A) 13． 6447 13． 6473 13． 6593 13． 6434 13． 6615 13． 6622 13． 6531 0． 065
2． 5 重现性
由表 4 可见，雪胆甲素平均含量为 7． 6726
mg /mL，ＲSD =0． 33%，表明该方法重现性良好。
表 4 重现性试验结果
重复 1 2 3 4 5 6 平均
含量(mg /mL) 7． 6614 7． 6750 7． 6479 7． 6783 7． 6539 7． 7191 7． 6726
ＲSD(%) 0． 33
401 山 东 农 业 科 学 第 47 卷
2． 6 回收率
由表 5 可见，平均回收率为 98． 81%，ＲSD 为
0． 92%，表明该方法回收率良好。
表 5 回收率试验结果
取样量
(mL)
测得量
(mg)
样品中
含量(mg)
加入量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
0． 5 7． 304 3． 8363 3． 52 98． 51
0． 5 7． 257 3． 8363 3． 52 97． 18
0． 5 7． 345 3． 8363 3． 52 99． 68 98． 81 0． 92
0． 5 7． 341 3． 8363 3． 52 99． 57
0． 5 7． 322 3． 8363 3． 52 99． 03
0． 5 7． 316 3． 8363 3． 52 98． 86
2． 6 样品测定结果
结合药典中含量规定及本品处方投料量，雪
雪溶液每毫升含雪胆甲素(C30 H42 O6)不得少于
6． 0 mg。表 6 可见，3 批样品测定结果均大于 6． 0
mg /mL，说明该方法可行。
表 6 样品测定结果 (mg /mL)
批号 含量 1 含量 2 平均含量
20120501 7． 70 7． 88 7． 79
20120502 7． 32 7． 34 7． 33
20120503 6． 60 6． 63 6． 62
3 讨论与结论
蒸发光散射检测器的响应不依赖样品的化学
性质，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，
且响应因子一致。本试验使用的 Alltech 2000 蒸
发光散射检测器是低温型检测器，当漂移管的温
度为 40℃时可以把沸点为 100℃的水完全雾化，
能够把基线噪音控制在较低水平。本试验结果表
明，以雪胆甲素为指标成分，测定雪胆溶液中雪胆
甲素含量，重现性好，无杂质峰干扰，简便易行，准
确可靠，因此可作为质量标准的控制指标。
参 考 文 献:
［1］ 王贤英．高效液相色谱法测定长果雪胆中雪胆甲素的含量
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志，2010，30(1) :88 － 89．
［4］ 苏红，白华，齐静，等． 中药雪胆及其制剂研究进展［J］． 中
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501第 10 期 骆延波，等:高效液相色谱 －蒸发光散射法检测雪胆溶液中雪胆甲素的研究