免费文献传递   相关文献

银莲花的抗氧化、抑菌和抗肿瘤活性



全 文 :2014年
第34卷 第4期
河北大学学报(自然科学版)
Journal of Hebei University(Natural Science Edition)
2014
Vol.34No.4
DOI:10.3969/j.issn.1000-1565.2014.04.015
银莲花的抗氧化、抑菌和抗肿瘤活性
李建飞,王俊丽,公维镇,费良丹,刘金豆
(中央民族大学 生命与环境科学学院,北京 100081)
  摘 要:为了有效利用野生银莲花资源,将银莲花的乙醇提取物进行石油醚-丙酮梯度洗脱,得到5个组
分,分别采用DPPH法、琼脂孔扩散法、MTT法进行了抗氧化、抑菌和抗人乳腺肿瘤细胞(MDA-MB-231)活
性研究.结果表明:5个组分均有氧自由基清除能力,其中组分Ⅰ抗氧化活性最好,半数抑制质量浓度为
30.58μg/mL;5个组分均有抑菌活性,其中组分Ⅴ抑菌活性最好.各组分和单体化合物对人乳腺肿瘤细胞
均有一定的抑制作用,组分Ⅱ对人乳腺肿瘤细胞的抑制率最高,达到50.32%.
关键词:银莲花;抗氧化;抑菌;抗肿瘤
中图分类号:Q945   文献标志码:A   文章编号:1000-1565(2014)04-0414-07
Antioxidation,antibacterial and antitumor activities of
Anemone cathayensis
LI Jianfei,WANG Junli,GONG Weizhen,FEI Liangdan,LIU Jindou
(Colege of Life and Environmental Sciences,Minzu University of China,Beijing 100081,China)
  Abstract:The ethanol extract of Anemone cathayensis was separated by stepwise gradient elution with
petroleum ether/acetone and activities of 5fractions were evaluated.The antioxidant effect of fractions
was evaluated by 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH)scavenging assays.FractionⅠhad a higher DPPH
radical scavenging activity with low IC50value of 30.58μg/mL.The antimicrobial activity of the fractions
was evaluated using the agar wel diffusion method.The fractionsⅤshowed higher antimicrobial activity.
Anticancer activities of fractions and compounds were determined by MTT assay,and al tested fractions
showed inhibition activity on human breast cancer cels(MDA-MB-231).The fractionⅡ displayed the
strongest anticancer activity,and inhibition percent was 50.32%.
Key words:Anemone cathayensis;antioxidant;antimicrobial;anticancer
 收稿日期:2013-09-20
 基金项目:中央民族大学一流大学一流学科建设项目(YLDX01013);高等学校学科创新引智计划资助项目(B08044);中央
民族大学创新项目(URTP2013110031)
 第一作者:李建飞(1987-),男,河北张家口人,中央民族大学在读硕士研究生,主要从事植物资源与利用等方面研究.
E-mail:34143635@qq.com
 通信作者:王俊丽(1964-),女,河北新乐人,中央民族大学教授,博士生导师,主要从事植物细胞工程及资源利用等方面研
究.E-mail:wangjunli1698@163.com
  银莲花(Anemone cathayensis)为毛茛科(Ranunculaceae)银莲花属(Anemone)植物,在我国分布于山
第4期 李建飞等:银莲花的抗氧化、抑菌和抗肿瘤活性
西、河北等地,海拔高度为1 000~1 600m,主要生长于山坡草地、山谷沟边或多石砾坡地.朝鲜也有分布[1].
银莲花属许多植物为中国传统中药材,在民间人们将阿尔泰银莲花、西南银莲花、多被银莲花、鹅掌草、野棉
花等作为消炎[2]、镇痛、抗菌[3]、驱虫等药物使用,《中华人民共和国药典》已将多被银莲花的根茎收载,用于
祛风湿、消痈肿,同时还可治疗骨节疼痛、痈肿溃烂、风寒湿痹等症[4].
目前,国内对银莲花属植物的生物活性研究主要集中于银莲花素A抗癌活性的研究[5-10],对其抗氧化活
性和抑菌活性的研究很少.本研究主要通过DPPH法研究银莲花乙醇提取物不同组分的抗氧化活性,通过
抑菌圈法探究不同组分对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Esherichia coli)和枯草芽孢
杆菌(Bacillus subtilis)抑菌活性,通过 MTT法研究不同组分及分离到的3-氧-2,23-二羟基-齐敦果-12-烯-
28-酸等10个不同单体化合物对肿瘤细胞的抑制作用.
1 材料与方法
1.1 材料与菌种
银莲花植株采自北京灵山海拔2 200m处阳坡.取1.5kg全草干品,经体积分数为95%的乙醇闪式提
取,合并减压蒸干得粗提物.组分Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ分别是石油醚与丙酮体积比为5∶1,3∶1,2∶1,1∶1时和纯丙
酮层经过硅胶柱梯度洗脱所得浸膏.10个单体化合物分别为3-氧-2,23-二羟基-齐敦果-12-烯-28-酸(1),28-
羟基-齐敦果-12-烯-3,11-二酮(2),3-甲氧基-齐敦果-11-酮-18-烯(3),熊果酸(4),α-香树脂醇(5),28-羟基-α-
香树脂醇(6),2α,23-二羟基-熊果酸(7),香豆素(8),4,7-二甲氧基-5-甲基香豆素(9),槲皮素-7-O-鼠李糖苷
(10),其分离方法参见文献[11].
所用肿瘤细胞为人乳腺肿瘤细胞(MDA-MB-231);所用菌种分别为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus
aureus)、大肠杆菌(Esherichia coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),均由本实验室保藏.
1.2 方法
1.2.1 抗氧化活性测定
参照Kirby和Schmidt方法[12].200μL反应体系中包含:各种不同待测样品100μL(用体积分数为
95%乙醇溶解),60μmol DPPH(SIGMA-ALDRICH,批号:S90790-379)乙醇溶液100μL.于酶标仪(美国
Molecular Devices公司)中振动摇匀,暗反应30min后,用酶标仪在517nm下测量吸光度(A).维生素C作
为阳性对照,对照组和处理组都重复3次.自由基清除活性的计算公式如下[13]:抑制率=[(A对照-A样品)/
A对照]×100%.用SPSS17.0版本的相关功能计算其半数抑制浓度IC50[14].
1.2.2 抑菌活性的测定
1.2.2.1 菌悬液制备和培养基的配制
将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌接种培养(37℃的摇床上活化培养24h)后,用无菌生理盐
水稀释成含菌量为106~108/mL的菌悬液备用.
在每个直径为90mm 的培养皿中加入蛋白胨培养基约10mL,冷凝,再取0.2mL菌悬液加入到
10mL 45℃左右的培养基中,充分混合后,倒入上述培养基表面,待其凝固后,用打孔器在培养基上打孔,孔
径为6mm.
1.2.2.2 抑菌活性的测定
分别将不同质量浓度的组分Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ甲醇溶液各20μL加入到小孔中,于37℃恒温培养箱中培
养24h后,观察并测量抑菌圈的直径.以注射用青霉素钠作为阳性对照,以无菌水作为阴性对照.
1.2.3 抗肿瘤活性研究
1.2.3.1 肿瘤细胞的培养
将人乳腺肿瘤细胞(MDA-MB-231)接种于含体积分数为10%的胎牛血清、100u/mL青霉素、100u/mL链
霉素双抗RMPI-1640培养基上,置于37℃、饱和湿度、体积分数为5%的CO2 培养箱中培养48h.
加入适量培养基,将肿瘤细胞悬液稀释至1×105/mL,接种于96孔培养板,每孔100μL(约含1×10
4 个
·514·
河北大学学报(自然科学版) 第34卷
细胞).置于37℃、饱和湿度、体积分数为5%的CO2 培养箱中培养12h.
1.2.3.2 抗肿瘤活性检测
实验组各孔分别加入质量浓度为1,500,250,125,62.5μg/mL的不同组分和单体的甲醇溶液各
100μL,每个剂量组重复3次;以表阿霉素(辉瑞制药无锡有限公司)作为阳性对照,将其配制成质量浓度为
1μg/mL的溶液,每个对照孔加入20μL;以RMPI-1640完全培养基作为阴性对照,每组重复3次.将培养物
置于CO2 培养箱中培养48h,各培养孔中加入MTT 20μL,再培养4h,弃上清液,每孔加入DMSO 100μL,
充分振荡混合10min.通过酶标仪检测吸光度(OD值),检测波长为570nm.为保证实验不被污染,采用
0.2μm无菌滤器对各种试剂进行除菌处理.
1.2.3.3 肿瘤细胞抑制率的计算
不同组分和单体化合物对肿瘤细胞抑制率按如下公式计算.抑制率(CI)=[(空白对照组的OD值-实
验组的OD值)/空白对照组的OD值]×100%.
2 结果与分析
2.1 不同组分的抗氧化活性
2.1.1 DPPH自由基清除率
分析发现,各组分均有不同程度的自由基清除活性,且清除率与样品的质量浓度正向相关,在质量浓度
为100μg/mL时,组分Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ消除率分别为74.9%,43.3%,33.0%,55.1%和22.8%.其中组分
Ⅰ的清除率最高(74.9%),组分Ⅴ清除率最低,仅有22.8%(图1).与阳性对照维生素C(VC)相比,各组分抗
氧化活性均低于VC.
图1 5种不同组分对DPPH自由基的消除率
Fig.1 DPPH radical scavenging activities of different fractions
2.1.2 半数抑制质量浓度
5种不同组分对DPPH自由基的半数抑制质量浓度(IC50)如表1.
表1 5种不同组分的半数抑制质量浓度
Tab.1 IC50Value of 5different fractions μg·mL
-1
组分 IC50 组分 IC50 组分 IC50
Ⅰ 30.58±5.70 Ⅲ 126.54±5.41 Ⅴ 155.21±3.42
Ⅱ 93.43±4.31 Ⅳ 66.27±3.60 VC 2.57±0.20
  由表1可知,组分Ⅰ的抗氧化活性最好,对DPPH自由基的半数抑制质量浓度IC50为30.58μg/mL.各
·614·
第4期 李建飞等:银莲花的抗氧化、抑菌和抗肿瘤活性
组分的IC50值由小到大依次为Ⅰ<Ⅳ<Ⅱ<Ⅲ<Ⅴ.组分的IC50值越小,表明其抗氧化能力越强,不同组分
的抗氧化能力由强到弱依次为Ⅰ>Ⅳ>Ⅱ>Ⅲ>Ⅴ.
2.2 抑菌活性
不同质量浓度的5种组分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果如表2.
表2 5种不同组分的抑菌活性
Tab.2 Antimicrobial activities of 5different fractions
组分 供试菌种     
抑菌活性
160
mg/mL
80
mg/mL
40
mg/mL
20
mg/mL
10
mg/mL

mg/mL
2.5
mg/mL
金黄色葡萄球菌 +- +- - - - - -
Ⅰ 大肠杆菌 +- +- - - - - -
枯草芽孢杆菌 +- +- - - - - -
金黄色葡萄球菌 +- +- +- - - - -
Ⅱ 大肠杆菌 +- +- +- - - - -
枯草芽孢杆菌 +- +- +- - - - -
金黄色葡萄球菌 ++ + + - - - -
Ⅲ 大肠杆菌 ++ ++ + +- +- - -
枯草芽孢杆菌 ++ + + - - - -
金黄色葡萄球菌 +- +- - - - - -
Ⅳ 大肠杆菌 +- +- - - - - -
枯草芽孢杆菌 + + +- +- - - -
金黄色葡萄球菌 + + + +- +- - -
Ⅴ 大肠杆菌 + + + +- +- - -
枯草芽孢杆菌 + + + + + - -
金黄色葡萄球菌 +++ +++ +++ +++ ++ + +-
青霉素 大肠杆菌 +++ +++ +++ ++ ++ + +
枯草芽孢杆菌 +++ +++ +++ +++ ++ ++ +
金黄色葡萄球菌 - - - - - - -
无菌水 大肠杆菌 - - - - - - -
枯草芽孢杆菌 - - - - - - -
  表中“-”表示无抑菌活性,“+-”表示无明显的抑菌圈,“+”表示有明显的抑菌圈,“+”越多,抑菌圈越大.
从表2可以看出,组分Ⅴ抑菌活性最强,在质量浓度为40mg/mL时,对大肠杆菌、枯草芽抱杆菌、金黄
色葡萄球菌有明显的抑制作用,当质量浓度降低到10mg/mL时对3种菌仍表现出抑制作用.组分Ⅲ在质量
浓度为40mg/mL时对3种菌也表现出明显的抑制作用,在质量浓度为160mg/mL时抑制性最强,金黄色
葡萄球菌抑菌圈直径为13mm,大肠杆菌抑菌圈直径12mm,枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为14mm.
80mg/mL的组分Ⅳ对枯草芽孢杆菌表现出一定的抑制活性,但对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌没有明显的
抑制作用.组分Ⅰ和组分Ⅱ抑菌活性最差,它们对3种菌的抑制作用均不明显.
·714·
河北大学学报(自然科学版) 第34卷
2.3 抗人乳腺肿瘤细胞活性
2.3.1 5种不同组分对肿瘤细胞的抑制率
通过分析发现,当Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ5种不同组分质量浓度为100μg/mL时,对人乳腺肿瘤细胞(MDA-
MB-231)抑制率分别为31.79%,50.32%,37.69%,43.65%和29.47%(图2).表阿霉素对其抑制作用十分
明显,虽然加入量很少(20ng),但对肿瘤细胞的抑制率高达69.08%.
由图2可以看出,各个组分对人乳腺肿瘤细胞(MDA-MB-231)均有一定的抑制作用,其抗肿瘤活性从
高到低依次为Ⅱ>Ⅳ>Ⅲ>Ⅰ>Ⅴ,其中组分Ⅱ的抑制活性最高,达到了50.32%.虽然这5种组分对人乳
腺肿瘤细胞均有一定的抑制活性,但是与阳性对照表阿霉素相比,活性明显偏弱.
2.3.2 不同单体化合物对肿瘤细胞的抑制率
研究发现,单体化合物8,9和10对人乳腺肿瘤细胞没有明显抑制作用,化合物1~7均有一定的抗肿瘤
细胞活性.当质量浓度为100μg/mL时,这7种单体化合物对肿瘤细胞的抑制率分别达到26.41%,
37.80%,33.17%,20.38%,18.31%,16.20%和22.48%,其中化合物2(28-羟基-齐敦果-12-烯-3,11-二酮)
对肿瘤细胞的抑制活性最明显(图3).
图2 5种不同组分对 MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制率
Fig.2 Inhibition activity of different fractions
on human breast cancer cels
图3 10种单体化合物对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制率
Fig.3 Inhibition activity of different compounds
extracted on human breast cancer cels
3 讨论
盛侠[15]研究结果表明,齐墩果酸对DPPH自由基有一定的抑制作用,并且随着齐墩果酸质量浓度的增
大,其对自由基的抑制率明显提高,当齐墩果酸为1.0mg/mL时对DPPH自由基的抑制率达到60.86%.本
研究发现,组分I的抗氧化活性最高,其中是否为齐墩果酸类化合物起主要作用,需要进一步的研究.
苏波[16]研究毛茛皂苷的抑菌活性时发现,毛茛皂苷对绿脓杆菌、粪肠球菌、产气肠球菌、金黄色葡萄球
菌有一定的抑制作用,而对大肠杆菌、藤黄八叠球菌、枯草芽孢杆菌、副甲硫杆菌、鸡沙门氏菌5种菌株没有
明显的生长抑制性.白宇明[17]发现,金莲花是一种抑菌普很广的中草药,其提取物在体外对革兰氏阳性菌和
革兰氏阴性菌均有较好的抑菌活性.林晨等[18]发现,金莲花不同提取物抑菌效果不同.水提物对金黄色葡萄
球菌的MIC为3.0mg/mL,体积分数为60%的乙醇提取物对枯草芽孢杆菌的MIC是31.3mg/mL,体积分
数为60%和90%的乙醇提取物对大肠杆菌的 MIC是125.0mg/mL.本研究发现,组分Ⅴ和Ⅲ在质量浓度
为80mg/mL时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有抑制作用,这进一步说明毛茛科银莲花属
·814·
第4期 李建飞等:银莲花的抗氧化、抑菌和抗肿瘤活性
植物可作为一种很好的抗菌资源植物.
郑开波等[19]、张东方等[20]研究发现,齐墩果酸对人口腔鳞癌细胞和肺癌细胞具有一定的抑制作用,并
且对正常细胞毒性较小.王丹丹等[21]研究结果表明,齐墩果酸及其衍生物对肺癌细胞均有抑制作用,3-氧代
齐墩果酸的抑制活性最强,其抑制率高达90.0%,IC50为24.2μg/mL.本研究结果表明,齐墩果酸还对人乳
腺肿瘤细胞(MDA-MB-231)具有一定的抑制作用,说明该化合物对肿瘤细胞抑制作用具有广谱性.
参 考 文 献:
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志:第30卷:第1分册[M].北京:科学出版社,2004:54.
[2] 董梦久,姜爱莉.银莲花胶囊治疗类风湿性关节炎40例[J].湖北中医杂志,1996,18(2):8-9.
DONG Mengjiu,JIANG Aili.The treatment of 40cases of rheumatoid arthritis by Anemone capsule[J].Hubei Journal
of Traditional Chinese Medicine,1996,18(2):8-9.
[3] 邴飞虹,江俊,郭晓林.银莲花胶囊抗过敏及抗炎作用研究[J].湖北中医学院学报,1999,1(2):55-56.
BING Feihong,JIANG Jun,GUO Xiaolin.Study on antialergic and anti-inflammatory effects of Anemone capsule[J].
Journal of Hubei University of Chinese Medicine,1999,1(2):55-56.
[4] PHARMCOPOEIA COMMISSION OF THE MINISTET OF PUBILC HEALTH OF PRC.Chinese pharmcopoeia I
[M].Beijing:Chemical Industry Press,2005:116.
[5] 赵学涛.中药多被银莲花提取物抗肿瘤及免疫学调节作用的实验研究[D].石家庄:河北医科大学,2006.
ZHAO Xuetao.Study on antitumor and immunological regulation effects of extracts from Anemone raddeana Regel,a
traditional Chinese medicine[D].Shijiazhuang:Hebei Medical University,2006.
[6] 高雅蓉,安君霞,朱启彧,等.银莲花素 A对非小细胞肺癌 H460的抑制作用[J].应用与环境生物学报,2010,05:
637-641.
GAO Yarong,AN Junxia,ZHU Qiyu,et al.Inhibitory effect of Raddeanin A in human non-smal cel lung cancer H460
cels[J].Journal of Applied &Environmental Biology,2010,05:637-641.
[7] 王明奎,丁立生,吴凤锷.两头尖总苷的抗肿瘤活性研究[J].应用与环境生物学报,2008,03:378-382.
WANG Mingkui,DING Lisheng,WU Fenge.Antitumor activity of crude saponin from Anemone raddeana Regel[J].
Journal of Applied &Environmental Biology,2008,03:378-382.
[8] 王明奎,丁立生,吴凤锷.银莲花素A对S180、H22和U14细胞小鼠移植瘤的抑制作用[J].癌症,2008,09:910-913.
WANG Mingkui,DING Lisheng,WU Fenge.Antitumor effects of raddeanin A on S180,H22and U14cel Xenografts in
mice[J].Chinese Journal of Cancer,2008,09:910-913.
[9] 崔旭琴.银莲花素A诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机理研究[D].成都:西南交通大学,2011.
CUI Xuqin.Molecular mechanism of Raddeanin A inducing apoptosis and in human colorectal cancer cels[D].Chengdu:
Southwest Jiaotong University,2011.
[10] 张晓文,李克生.银莲花素A对小鼠移植性肿瘤的抑制作用[J].现代康复,2001,06:108-115.
ZHANG Xiaowen,LI Kesheng.Antitumor effects of raddeanin A on xenografts in mice[J].Modern Rehabilitation,
2001,06:108-115.
[11] 刘坤,公维镇,王俊丽,等.银莲花化学成分研究[J].中草药,2012,43(3):448-454.
LIU Kun,GONG Weizhen,WANG Junli,et al.Chemical constituents fromAnemone cathayensis[J].Chinese Tradition-
al and Herbal Drugs,2012,43(3):448-454.
[12] KIRBY A J,SCHMIDT R J.The antioxidant activity of Chinese herbs for eczema and of placebo herbs-Ⅰ[J].Journal
of Ethnopharmacology,1997,56(2):103-108.
[13] TEPE B,SOKMEN M,AKPULAT H A.In vitro antioxidant activities of the methanol extracts of five Allium species
from Turkey[J].Food Chemistry,2005,92(1):89-92.
[14] DENG JING,CHENG Wangyuan,YANG Guangzhong.A novel antioxidant activity index(AAU)for natural products
using the DPPH assay[J].Food Chemistry,2011,125:1430-1435.
[15] 盛侠.宣木瓜中齐墩果酸的提取分离及其抗氧化作用的研究[D].合肥:安徽农业大学,2010.
SHENG Xia.Study on extraction,separation and antioxidative function of oleanolic acid in Chaenomeles speciosa s.Na-
·914·
河北大学学报(自然科学版) 第34卷
kai[D].Hefei:Anhui Agriculture University,2010.
[16] 苏波.毛茛皂苷的提取及其抑菌作用初步分析[J].怀化学院学报,2011(2):53-56.
SU Bo.Extraction of saponin and preliminary analysis of antimicrobial activity[J].Journal of Huaihua University,
2011(2):53-56.
[17] 白宇明.中药材金莲花[J].中草药,1994,25(6):291.
BAI Yuming.Trollius chinensis Bunge,a traditional Chinese medicine[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs,
1994,25(6):291.
[18] 林晨,沈伟哉,李药兰,等.不同溶媒中金莲花提取物体外抑菌作用的比较[J].暨南大学学报:自然科学与医学版,
2001,06:54-55.
LIN Chen,SHEN Weizai,LI Yaolan,et al.In vitro antimicrobial activity of extracts in different solvents from Trollius
chinensis Bunge[J].Journal of Jinan University:Natural Science & Medicine Edition,2001,06:54-55.
[19] 郑开波,毛海立,孙成斌.齐墩果酸结构修饰及抗肿瘤活性的研究进展[J].黔南民族师范学院学报,2009(6):11-14.
ZHENG Kaibo,MAO Haili,SUN Chengbin.Progress in research of structure modification and antitumor activity of
oleanolic acid[J].Journal of Qiannan Normal Colege for Nationalities,2009(6):11-14.
[20] 张东方,黄炜,黄济群.齐墩果酸抗人肺癌细胞增殖、侵袭和诱导细胞凋亡的研究[J].肿瘤防治研究,2003,30(3):
180-183.
ZHANG Dongfang,HUANG Wei,HUANG Jiqun.Study on proliferation inhibition and anti-invasion and apoptotic in-
duction of oleanolic acid in human lung cancer cel line[J].Cancer Research On Prevention and Treatment,2003,30(3):
180-183.
[21] 王丹丹,葛文中.齐墩果酸衍生物合成及抗肿瘤活性的研究[J].黑龙江八一农垦大学学报,2010,2(3):54-85.
WANG Dandan,GE Wenzhong.Synthesis and and antitumor of oleanolic acid derivatives[J].Journal of Heilongjiang
Bayi Agricultural University,2010,2(3):54-85.
(责任编辑:赵藏赏)
(上接第413页)
参 考 文 献:
[1] 应建浙,卯晓岚,马启明.中国药用真菌图鉴[M].北京:科学出版社,1987:371.
YING Jianzhe,MAO Xiaolan,MA Qiming.An ilustrated handbook of medicinal fungi[M].Beijing:Science Press,
1987:371.
[2] 傅俊生,蔡衍山,柯丽娜,等.金福菇的交配型研究[J].食用菌学报,2007,14(3):10-12.
FU Junsheng,CAI Yanshan,KE Lina,et al.Mating system of Tricholoma giganteum[J].Acta Edulis Fungi,2007,14(3):
10-12.
[3] 王谦,贾震.食药用菌的药理作用研究进展[J].医学研究与教育,2010,27(5):67-70.
WANG Qian,JIA Zhen.Research prowess on pharmacological actions of edible and medicinal fungi[J].Medical Research
and Education,2010,27(5):67-70.
[4] 王谦,刘敏,张亚从.大球盖菇原生质体制备及紫外诱变[J].河北大学学报:自然科学版,2011,31(4):413-417.
WANG Qian,LIU Min,ZHANG Yacong.Protoplast preparation and ultraviolet radiation investigatio of Stropharia rugo-
soannulata[J].Journal of Hebei University:Natural Science Edition,2011,31(4):413-417.
[5] 王谦,闫蕾蕾,王永利,等.金顶侧耳的深层液体培养及相关检测[J].菌物系统,2002,21(1):103-106.
WANG Qian,YAN Leilei,WANG Yongli,et al.Submerged culture and related nutrient solution determination of Pleuro-
tus citrinopileatus[J].Mycosystema,2002,21(1):103-106.
(责任编辑:赵藏赏)
·024·