全 文 ：遗 传 学 报 , 2 1 ( 3 ) : 2 2 2一 2 2 6 , 1 9 9今
诵e t o G e n e t i e a S i n i e a
基因组对芸苔属作物原生质体培养及
植株再生的影响①
李世君 孟 征 李德葆
( 浙江农业大学生物技术研究所 伉州 3 1 0 0 2 , )
摘要 本文以包心菜 、 芜著油菜 、 浙油 6 01 的无菌苗叶肉原生质体为材料 ,经不同液体培养基
浅层培养 , 细胞分裂并形成愈伤组织 。 愈伤组织经增殖后 ,转到分化培养基上诱导分化 ,均获得
了再生植株 。 本文着重研究了植物基因组对原生质体分裂频率及植株再生的影响 。 研究结果
表明 : ( l) 植物基因组对原生质体分裂频率的影响随原生质体培养基的不同而异 ; ( 2 )植物基
因组对原生质体再生植株影响显著 ,芜脊油菜的 A基因组不利于原生质体再生植株 ,包心菜的
c 基因组有利于原生质体再生植株 ,并可部分解除 人 基因组对原生质体植株再生的抑制作用 。
关键词 基因组 ,芸苔属 ,叶肉原生质体 ,植株再生
芸苔属是一个较大的属 , 主要分为黑芥 ( B . 川 g r a ) ( BB 基因组 , 2n ~ 16) , 甘蓝
( B
.
o l e r a c e a L
.
) ( C C 基因组 , Zn ~ 1 5 ) 、 白菜或白菜型油菜 ( B . c a m P e s z r i s ) ( A A
基因组 , Z n ~ 20 ) 3 个基本种 , 以及甘蓝型油菜 ( B . 加 P “ s) ( A A C C 基 因 组 , 2n ~
3 8 )
、 芥菜及芥菜型油菜 ( B . J二 n c e a ) ( A A B B 基因组 , Zn ~ 3 6 ) 、 埃塞俄比 亚 芥 ( B .
c ar in al 。 ) ( B B c c 基因组 , 2n ~ 3 4 ) 3个自然复合种 。 其中许多是重要的油料 、 饲料和蔬
菜作物 ,具有很高的经济价值 ,是 l 个丰富的基因库 。 目前 ,在白菜型油菜 【10J 、 甘蓝 [’. ` , · ,幻 、
甘蓝型油菜 『, .6, ’ · ’田 、 芥菜 “ , , , , · ” , ’ ` ,等均从原生质体 获得了再生植 株 。 同 时 在 体 细 胞 杂
交 〔1’. ” ,川 、 外源基因的转化 「` 7’ ’ 吕·川等研究领域也取得了长足的进步 。 为了进一步深化芸苔
属作物离体培养的研究 , 系统地研究作物基因组在离体条件下对植株再生的影响尤为必
要 。 iD e fe r 等〔8] 以下胚轴为材料 , J a in 等 `川以子叶 为材料在组织水平分析了基因型在植
株再生中的作用 。 J o u r da n 等 〔3] 在原生质体水平作了类似的研究 。 我们以芜著油菜 (基因
组 A A ) 、 包心菜 (基因组 C C ) 、 浙油 60 1 (基因组 A A C C ) 3 种不同基因组植物的叶肉原
生质体为材料 ,研究了植物基因组 A 、 C 对原生质体分裂及植株再生的影响 。 现将研究
结果报道如下 。
1 材料和方法
1
.
1 供试材料
无菌苗 。 选取籽拉饱满的种子 (芜蓄油菜种子来源于浙江省农业科学院 ,浙油 6 01 种
子来源于浙江农业大学 、 包心菜种子来源于浙江种子公司 ) , 70 并 酒精浸 70 秒 , 无菌水冲
洗 1 次 ,再在 0 . 1多H g C 12 (加几滴 T o w e e n 2 0 ) 中浸 1 6 分钟 , 然后用无菌水冲洗 3 次 。 用
无菌滤纸吸干种子表面的水后 ,将种子接种于无菌苗繁殖培养基 ( 1 / ZM s【19] 培养基大 量
① 木文于 1 9 9 2 年 7 月 20 日收到 。 浙江省科省“ 八 · 五 ” 重点课题
3 期 李世君等 : 基因组对芸苔属作物原生质体培养及植株再生的影响
元素 ,全量微量元素 、维生素及 2多 蔗糖 , p H , . 8) 上 ,使其发育成无菌苗 。 无菌苗数 4 周
继代 1 次 (培养条件为 25 ℃ 、 4 0 0 L x , 16 小时光照邝小时暗 ) 。
1
.
2 原生质体游离
取完全展开的 ,一 8天叶龄的叶片 ,撕去下表皮后 , 浸人酶液 1[ . 0外 c e n ul a s e O n 。 -
z u k a R 一 1 0 , 0
·
5多 M a c e r o z y m e o n o z u k a R 一 1 0 , C p W l o M , p H S . s , 0 . 4 5协m 硝酸纤维
素滤膜过滤器抽滤 ( iS g m a ) ] 中酶解 (避光 、静置于 25 ℃ 下 18 小时 ) 。 酶解后 ,用 4 0 目
的金属网滤去酶 液中较大的组织碎片 。 滤液经 , 0 0 r p m 离心 5 分钟 , 弃上清液 , 沉淀部分
重新悬浮于 C P W 10 M 的原生质体洗液中 , 50 o r p m 离心 3 分钟 ,弃上清液 。 重复该步骤
2次 。 并用血球计数板计算其产量 。
1
.
3 原生质体培养
将纯化的原生质体以 5一 6 x l少 /m l 的密度分别用 Bp l 、 BZP 、 B3P 、 B 4P 进行浅层培
养 ( 25 ℃ 、 避光 ) 。 培养 10 天后统计细胞分裂频率 (分裂的细胞总数 占统计细胞总数的百
分比 , 每次统计 15 0个细胞左右 ,重复 3 次 ) ,这时分别 Bp s 、 B p 6 、 B p 7 对 B p l 、 B p z 中的
培养物 , B3P 中的培养物 、 B4P 中的培养物以 l : 1 的比例进行稀释 , 并分成两皿 , 置于
25 ℃ 下微光培养 。 此后每隔 10 天加液 1次 ,直至小愈伤组织长到直径约 l m m 大小 。
表 l 原生质体培养基
T a b l e 1 M
e d i a o f t h e P r o r o p l a s t e u l t u r e
培养基
M
e d i a
( B P )
2 , 4一 D
( m g / L )
N A A
( m g / L )
::
{
二 二
! 葡萄塘 } 蔗糖 } 甘露醇
,
_
_ z奋、 l , _ 万 几 、 1 G l u e o s e } s u e o s e I M a n n i t o l、 1“ 邑 z ` j l 气山 g / ` 夕 l , ~ I 百 、 l , _ , : 、 I , _ I 了 、下刃…一不{里;升日羚- {止竺子-
)
”
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I U 】 U } 2 0 1 3 1
原生质体培养基 B p l 、 B p Z 、 B p 3 、 B P S 、 B P 6 的基本成分为 K M 8 p 【` , , 培养基的大量元
素 、有机酸 、糖及糖醇 , sB gt] 培养基的微量元素 、 维生素 。 B4P 、 B P 7 培养基的基本成分
见培养基 B〔, 。 , 去掉 T o w e e n 8 0。 各种培养基的 p H 值均为 5 . 8 , 抽滤灭菌 ( 0 . 4 5” m 硝
酸纤维素滤膜滤器 S i g m a ) , 其它激素配比 、 附加成分见表 1。
1
.
4 愈伤组织增殖与植株再生
当原生质体培养基中的小愈伤组织长到直径约 l m m 大小时 ,将其转到 M SI 培养基
上增殖。 待愈伤组织长到直径约 4 m m 大小时 ,转到 M SZ 培养基上诱导植株分化 。 分化
出的苗长到 cZ m 大小时 ,将其从愈伤组织上剪下转到 M s3 培养基上诱导生根 (以上培养
条件均为 2 5℃ . 4 0 0 o L x 、 一6 小时光照 / s 小时黑暗 ) 。 M S z 、 M S z 、 M S 3培养基成分见表 2。
2 结果与讨论
2
.
1 原生质体分离与培养
本文所采用的混合酶液诱合于这 3 种基因组植物无菌苗叶肉原生质体的分离 , 从中
遗 传 学 报 2 1 卷
表 2 愈伤组织增殖及分化培养基
T a b l
e 2 M
e d ia o fe a l li gr o w tha n d r e ge n e r a tio n
洲巡…垒1竺…竺…竺…鳌…墨…燮…鳖
}
” · ,
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表 3 不同基因组原生质体的分裂频率
T a b l e 3 D i f f e r e n t g e n o m i e P r o t o p l a s t d i v i s i o n f r e q u e n e y
基因组 芜著油 菜
G e n o m e s
T u r n i P r a P e
( A A )
包心 菜
C a b b a g e
( C C )
浙油 6 0 1
Z h e i i a n g r a P e 6 0 1
( A A C C )
培养基
M
e d i a ( B p )
分裂频率
D i u i s i o n f r e q u e n e y (% )
: …分…偏…份…愉…于…分…长…去…于…导…令
可获得大量完整的原生质体 (图版 l , l ) , 其量可达 2一 6 x 10 ` / m l 酶液 · g 叶片 。 新分
离下的原生质体呈球形 , 叶绿体分布于整个胞质中。 培养 2天后大部分原生质体可从球
形变成椭圆形 , 3 天后可出现第一次细胞分裂 (图版 I , 2 ) , 5天后出现第二次细胞分裂 (图
版 I , 3 ) 。 随着对培养物定期加液 ,细胞分裂加速 (图版 I , 4 ) , 1 个月后小愈伤组织直径
可达约 l m m 大小 。
不同基因组植物的原生质体在不同培养基中的分裂频率差异很明显 (表 3 ) 。 表 3 结
果表明基因组对原生质体分裂频率的影响因培养基的不同而异 。 A A 基因组的 原 生质
体易于生长在营养较丰富的培养基中 , 2 , 4一 D 与 K T 配合使用对于刺激 A A 基因组的
原生质体分裂更为有效 , 而 C C 基因组的原生质体在离体培养条件下的生长 与 A A 基
因组的原生质体呈相反趋势 。 J ou r d an 等 『` 2]利用培养基 B (该 培养基 比 BP 4 的 渗 透
浓度稍高 ) 对芸苔属中不同基因型植物的原生质体进行培养 , A A 基因组植物原生质体
的细胞分裂频率在 。一 1关 之间 , C C 基因组植物原生质体的细胞分 裂 频 率 在 30 务左
右 , A A C C 基因组植物原生质体的细胞分裂频率在 6一 30 务 之间 , 这种较大的差异可能
与其基因组较大 、 遗传背景较复杂有关。 这些结果都与本文 B4P 中的培养结果有一致的 1
趋势 。 本文 B4P 的培养结果与 J ou r d a n 等洲的研究结果的差异可能表现为不同基因组
植物的原生质体对培养基中的渗透浓度有不同的要求。 表 3 的结果还表明对于同一种基
因型的原生质体提高培养基中的 6 一 BA 浓度 ( 0 . 25 一 0 . s m g / L ) 可刺激原生质体 分 裂 。
另外 ,不同基因组植物的原生质体在离体培养条件下褐化的程度不同 。 A A 基因组 、
C C 基因组植物的原生质体褐化轻 , A A C C 基因组植物的原生质体褐化重 , 这种褐化加
重的现象可能是 A 基因组与 C 基因组相互作用的结果 。 同一种基因型植物的原生质体在
不易于原生质体分裂的培养基中往往表现为聚集 。 所以 , 筛选最适于原生质体生长发育
的培养基是提高不同基因型植物原生质体分裂频率的关键 。
李世君等 : 基因组对芸苔属作物原生质体培养及植株再生的影响
表 4 不 同基因组植物原生质体植株再生频率
T a b l e 4 P l a n t r e g e n e r a t i o n f r e q u e n c y o f t h e p r o t o p l a s r s o f d i f f e r e n t g e n o m i e p l a n t s
培养基
M
e d i u m
基 因组
G e n o m e s
油菜
T u r n i P r
a
P e
(A A )
包心菜
C a b b
a g e
( C C )
浙油 6 0 1
Z h e i i
a n g r a p e 6 0 1
( A A C C )
培养基
M
e d i a ( B p)
分化频率
D i f f e r e n t i a t i v e
_
f r e q u e n e y (% )
二…二…一 : …二…二…一立…二…二…一二…二”
I
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l
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{
”
I
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N : 没做分化苗的实验 。 N o t d o i n g t h e e x p e r i m e n t o f i n d u e i n g s h o o t d i f f e r e n t i a t i o n f r o o c a l l
2
.
2 愈伤组织增殖与植株再生
将直径约 l m m 大小的愈伤组织转到 M IS 培养基上增殖 , 培养约 3 周后 , 愈伤组织
直径可达 4m m 左右 。 这时选取黄绿色的愈伤组织转到 M SZ 分化培养基上继续培养 , 大
约 4一 5 周后有芽再生 。 经筛选扩增培养基的实验表明 ,这 3 种基因组植物的原生质体形
成的愈伤组织在 M SI 培养基上可良好地生长 , 其它所试的培养基或是诱导大量生根 、 或
是死亡 、或是分化时不能再生植株 。 不同基因组植物的原生质体植株分化频率见表 4 。 表
4 的结果表明 : ( l) 原生质体经培养后形成的愈伤组织的植株分化能力与其基因组密切
相关 。 A A 基因组植物原生质体的植株再生能力最低 , C C 基因组植物原生质体的植株
再生能力最高 , A A C C 基因组植物原生质体的植株再生能力居中 。 这些结果与 D i e f e r t
等闭和 aJ in 等 t ,习在组织水平研究基因组对植株再生影响时得到的结果一致 。 这说明 A 基
因组不利于原生质体植株再生 ; C 基因组对原生质体植株再生有利 ;在复合种中 C 基因组
与 A 基因组相互作用 , A 基因组对植株再生的抑制作用可被部分解除 。 ( 2 ) 同一种基因
型的原生质体经不同原生质体培养基培养后形成愈伤组织的分化能力有差异 。 这说明在
原生质体培养阶段 ,培养基中诸成分对原生质体潜在的分化能力有影响 。 所以 , 在建立原
生质体值株再生体系时 ,除 了筛选植株分化培养基外 ,原生质体培养基也是一个不可忽视
的影响植株再生的因素 。
原生质体经 B ZP 培养基培养后 , 用 B p s 培养基加液形成的小愈伤组织经 M SI 增
殖 、 M SZ 诱导分化苗 、 M 3S 诱导苗生根 。 这一培养体系是我们从众多实验方案中筛选
出的适合于这 3 种基因组植物京生质体培养与植株再生的体系 。 利用该体系我们已先后
从芸苔属中的 6 种作物获得了原生质体再生植株 。
参 考 文 献
l 李文彬等 , 19 8 6。 遗传学报 , 13 ( 3 ) : 18 4一 18 7
2 罗科 , 罗鹏 , 19 9 2。 植物学报 , 3 4 : 2 3 7一 23 9
3 杨美珠 、 贾世荣 , 19 8 9。 植物 学报 , 3 1( 2 ) : 89一 9 4
4 傅幼英等 , 19 8 5。 园艺学报 , 12( 2 ): 17 1一 17 5
5 雷建军等 , 19 9 1。 植物学报 , 3 3 ( 2 ) : 9 1一 9 7
石 B a r s b y T L e r a l一 9 8 6 . P l a n t C e l l R e p . , , : 10 1一 0 3
7 C h o n g P V e r 口 l
,
1 9 8 5
.
P l a n r C e l l R e P
. ,
4 : 斗 一 6
习 D i e f e r t M F 亡 , a l , 19 8 2 . P l a n [ S e i . L e t t e r . 2 6 : 2 2 3 一 2略0
2 2 6 遗 传 学 报 2 1 卷
G en bo r gO L 亡忿 口 l , 一, ` 5 . E x p . C e l l R e s . , , o : l ,一 15 5
G li m e l i u s K
, 1 9 8 4
,
P五y s i o l . P l a n t , 6 1 : 3 8一 4 4
J a i n R K 君 r a l
,
19 8 8
.
P l a o t C e l l T i s s u e a n d o r g a n C u l t u r e
.
1峪: 19 7 一~ 2 0 6
J a i s w a l S L 亡 , a l . 1 9 9 0
.
P l a n t C e l l T i s s u e a n d o r g a n C u l t u r e
,
2 2 : 15 9一 16 5
J o u r d a n p s o t a l
, 19 8 9
.
J
.
A m e r
.
S o e
.
H o r r
.
S e i
. , 川 ( 2 ) : 34 3一 3 4 9
J o u r d a n P S 口才 口 l , 19 8 9 . T h e o r . A p p l . G e n e t . , 8 0 : 4 2 1一 4 2 7
k a o K N a n d M R M i
c h a y l u v
, 19 7 5
.
P l a n t a
, 12 : 10 5一 1 10
K 1r t i P B a n d V L C h o p r a
. 19 9 0
.
p l a n t C e l l T i s s u e a n d o r g a n C u l t u r e
,
2 0 : ` , 一 ` 1
M a t h e w s H , t a l
, 19 9 0
.
p l a n t S e i
. ,
7 2 : 2 4 ,一 2 5 2 .
M
o l o n e y M M e才 . 1, 一9 89 . P l a n r C e l l R e P . , 8 : 2 3 8一 2 4 2 .
M u r a o h i g e t “ n d T S k o o g
,
19 6 2
.
p h y s i o l
.
P l a n r
, 15 : 4 73一 4 9 7
P e l l e t i e r G 廿 , a l
,
19 8 3
.
M
o l
.
G e n
.
G e n e t
. ,
19 1 : 24 2一 2 5 2
P a u E
一
C 。 , a l , 1 9 8 8 . B i o / T e e h
.
o
l o g y
,
5 : 8 1 5一 8 17
R o b e r t s o n a n d E D E a r l e
, 19 5 6
.
P l a n t C e l l R e p
. ,
, : 6 1一 6 4
S a k a i T a n d J I m a m u r a
, 一9 9 0 . T h e o r . A p p l . G e n e t . , 8 0 : 4 2一 , 27
Y a m a s h i t a Y e考 a l , 19 8 9 . T h e o r . A p P I . G e n e r . , 7 7 : 18 9一 1 9 4
n,O-,
ù月,巴Jùb闷jOUO产n通.压`ù`一
-龟`---.二,且,`傀,山盛
E f f e e t o f G e n o m e s o n
a n d P l a n t R e
t h e M
e s o p h y l l P r o t o p l a s t C u l t u r e
g e n e r a t io n o f B r a s s i e a ①
L i S h i iu n M e n g Z h e n g L i D e b a o
( B i o l ` e几” o l o g i c a l l ” r t i t o r , o f Z人e j i a 。 窟 A , r i c o l t “ r a l U n i“ 。 r , i t y , H a n g z 人。 “ 3 10 0 2 9 )
A b st r a e t
T h r e e d i f f e r e n t g e n o m e s o f B r a s : i c a s p e c i e s
,
C a b b a g e ( B
.
o l o r a c e a t, a r c a P i t a r a
L
·
)
.
T u r n i p r a p e ( B
.
c a m P e : r r i s , a r r a 户a ) a n d z h e ii a n g 6 0 1 ( B . , a户“ ; L . ) , w e r e
t e s t e d f o r t h e i r i称 夕i t r o r e s P o n s e o f m e s o p h y l l P r o t o p l a s t s
.
P r o t o p l a s t s w e r e e u l t u r e d
i n f o u r l i q u i d m e d i a
.
P r o t o p l a s t s d i v i d e d a n d f o r m e d m i c r o
一 e a l l i
.
T h e s e m i e r o
一 e a l l i
w e r e c u l t u r e d o n M S I m
e d i u m t o e n l a r g e
, a n d t h e n i n d u e e d t h e m t o r e g e n e r a t e
s h o o t s o n M S Z m
e d i u m
.
U p t o n o w
, r e g e n e r a t i v e p l a n t s h a v e b e e n o b t a i n e d f r o m t h e
t h r e e g e n o m i e P r o t o P l a s t s
,
i n t h i s p a P e r
, t h e e f f e e t o f g e n o m e s o n t h e p r o t o P l a s t
d i v i s i o n a n d P l a n t r
七 g e n e r a t i o n o f B r a s , i c a w a s 、 t u d i e d m a i n l y
.
T h e r e s u l t s i n d i e a t e d :
( l ) T h
e e f f e e t o f g e n o m e s o n p r o t o p l a s t d i v i s i o n f r e q u e n e y v a r i e d w i th d i f f e r e n t
p r o t o p l a s t c u l t u r e m e d i a
.
( 2 ) T h
e e f f e c t o f g e n o m e s o n r l a n t r e g e n e r a t i o n w a s
o b v i o u s
.
A g e n o m e 15 n o t f a v o r a b l e o f p l a n t r e g e n e r a t i o n ; C g e n o m e 15 f a v o r a b l e o f
P l a n t r e g e n e r a t i o n
, a n d p a r t l y r e li e v e s t h e u n f a v o r a b l e e f f e e t o f A g e n o m e o n P l a n t
r e g e n e r a t l o n
K e y w o r d s G e n o m e
,
B r a s , i e a
,
M
e s o ph y l l p r o t o p l a s t
,
p l a n t r e g e n e r a t i o 。
① R e e e i v e d J u l y 2 0 , 一9 9 2 . T h e p r o i e e t s u p p o r r e d b y t h e T e e h n o l o g y C o m m i s s i o n “ 8 · , , o f z h e i i a n g
P r o v i n c e f o r i m p o r t a n t r e s e a r c h t o p i e
2 2 6 遗 传 学 报 2 1 卷
G e n b o r g O L 亡忿 口 l , 一, ` 5 . E x p . C e l l R e s . , , o : l ,一 15 5
G li m e l i u s K
, 1 9 8 4
,
P五y s i o l . P l a n t , 6 1 : 3 8一 4 4
J a i n R K 君 r a l
,
19 8 8
.
P l a o t C e l l T i s s u e a n d o r g a n C u l t u r e
.
1峪: 19 7 一~ 2 0 6
J a i s w a l S L 亡 , a l . 1 9 9 0
.
P l a n t C e l l T i s s u e a n d o r g a n C u l t u r e
,
2 2 : 15 9一 16 5
J o u r d a n p s o t a l
, 19 8 9
.
J
.
A m e r
.
S o e
.
H o r r
.
S e i
. , 川 ( 2 ) : 34 3一 3 4 9
J o u r d a n P S 口才 口 l , 19 8 9 . T h e o r . A p p l . G e n e t . , 8 0 : 4 2 1一 4 2 7
k a o K N a n d M R M i
c h a y l u v
, 19 7 5
.
P l a n t a
, 12 : 10 5一 1 10
K 1r t i P B a n d V L C h o p r a
. 19 9 0
.
p l a n t C e l l T i s s u e a n d o r g a n C u l t u r e
,
2 0 : ` , 一 ` 1
M a t h e w s H , t a l
, 19 9 0
.
p l a n t S e i
. ,
7 2 : 2 4 ,一 2 5 2 .
M
o l o n e y M M e才 . 1, 一9 89 . P l a n r C e l l R e P . , 8 : 2 3 8一 2 4 2 .
M u r a o h i g e t “ n d T S k o o g
,
19 6 2
.
p h y s i o l
.
P l a n r
, 15 : 4 73一 4 9 7
P e l l e t i e r G 廿 , a l
,
19 8 3
.
M
o l
.
G e n
.
G e n e t
. ,
19 1 : 24 2一 2 5 2
P a u E
一
C 。 , a l , 1 9 8 8 . B i o / T e e h
.
o
l o g y
,
5 : 8 1 5一 8 17
R o b e r t s o n a n d E D E a r l e
, 19 5 6
.
P l a n t C e l l R e p
. ,
, : 6 1一 6 4
S a k a i T a n d J I m a m u r a
, 一9 9 0 . T h e o r . A p p l . G e n e t . , 8 0 : 4 2一 , 27
Y a m a s h i t a Y e考 a l , 19 8 9 . T h e o r . A p P I . G e n e r . , 7 7 : 18 9一 1 9 4
n,O-,
ù月,巴Jùb闷jOUO产n通.压`ù`一
-龟`---.二,且,`傀,山盛
E f f e e t o f G e n o m e s o n
a n d P l a n t R e
t h e M
e s o p h y l l P r o t o p l a s t C u l t u r e
g e n e r a t io n o f B r a s s i e a ①
L i S h i iu n M e n g Z h e n g L i D e b a o
( B i o l ` e几” o l o g i c a l l ” r t i t o r , o f Z人e j i a 。 窟 A , r i c o l t “ r a l U n i“ 。 r , i t y , H a n g z 人。 “ 3 10 0 2 9 )
A b st r a e t
T h r e e d i f f e r e n t g e n o m e s o f B r a s : i c a s p e c i e s
,
C a b b a g e ( B
.
o l o r a c e a t, a r c a P i t a r a
L
·
)
.
T u r n i p r a p e ( B
.
c a m P e : r r i s , a r r a 户a ) a n d z h e ii a n g 6 0 1 ( B . , a户“ ; L . ) , w e r e
t e s t e d f o r t h e i r i称 夕i t r o r e s P o n s e o f m e s o p h y l l P r o t o p l a s t s
.
P r o t o p l a s t s w e r e e u l t u r e d
i n f o u r l i q u i d m e d i a
.
P r o t o p l a s t s d i v i d e d a n d f o r m e d m i c r o
一 e a l l i
.
T h e s e m i e r o
一 e a l l i
w e r e c u l t u r e d o n M S I m
e d i u m t o e n l a r g e
, a n d t h e n i n d u e e d t h e m t o r e g e n e r a t e
s h o o t s o n M S Z m
e d i u m
.
U p t o n o w
, r e g e n e r a t i v e p l a n t s h a v e b e e n o b t a i n e d f r o m t h e
t h r e e g e n o m i e P r o t o P l a s t s
,
i n t h i s p a P e r
, t h e e f f e e t o f g e n o m e s o n t h e p r o t o P l a s t
d i v i s i o n a n d P l a n t r
七 g e n e r a t i o n o f B r a s , i c a w a s 、 t u d i e d m a i n l y
.
T h e r e s u l t s i n d i e a t e d :
( l ) T h
e e f f e e t o f g e n o m e s o n p r o t o p l a s t d i v i s i o n f r e q u e n e y v a r i e d w i th d i f f e r e n t
p r o t o p l a s t c u l t u r e m e d i a
.
( 2 ) T h
e e f f e c t o f g e n o m e s o n r l a n t r e g e n e r a t i o n w a s
o b v i o u s
.
A g e n o m e 15 n o t f a v o r a b l e o f p l a n t r e g e n e r a t i o n ; C g e n o m e 15 f a v o r a b l e o f
P l a n t r e g e n e r a t i o n
, a n d p a r t l y r e li e v e s t h e u n f a v o r a b l e e f f e e t o f A g e n o m e o n P l a n t
r e g e n e r a t l o n
K e y w o r d s G e n o m e
,
B r a s , i e a
,
M
e s o ph y l l p r o t o p l a s t
,
p l a n t r e g e n e r a t i o 。
① R e e e i v e d J u l y 2 0 , 一9 9 2 . T h e p r o i e e t s u p p o r r e d b y t h e T e e h n o l o g y C o m m i s s i o n “ 8 · , , o f z h e i i a n g
P r o v i n c e f o r i m p o r t a n t r e s e a r c h t o p i e