全 文 ：纬羊实验性变异黄茂中毒
肖志国 王生奎黄有德 陈怀涛黄莉 王秋弹 朱秀琴 叶得河
(甘肃农业大学兽医系 , 兰州 , 7 3007 0 )
摘要 选 8 只年龄 1 . 5一 3 岁 , 体重 2 6. 2一 3 6. 5 公斤的健康纬羊 , 分为两组 。 实验组每 日纯
喂青干变异黄茂 , 对照组喂箭舌碗豆草 , 同期进行临来 、 实验室及病理学检查。 实验组 第 31 天 出
现 中毒症状 , 食入变异黄茂的量为 3 . 25k g /只 , 至实验结束 (共 62 天 ) , 每只食入毒草总量为
48
.
63k g
. 通过实验 , 系统地观察了中毒症状 . 血液生化变化早于 l5J 床表现 , 细胞免疫功能明显降
低 , 细胞空泡变性 。 首次对中毒绵羊的组织作了电镜观察。
关键词 : 变异黄蔑 、 实验中毒 、 绵羊
变异黄蔑 ( A s t r a g a lu s V a r i a bi lis B u , , g e )
为豆科紫云英属多年生草本植物 , 广泛分布于
甘肃河西走廊及景泰 、 靖远等地 , 我国内蒙、 新
疆和青海亦有分布。 甘肃俗称 “ 死羊草” 、 “ 瓜
瓜草” , 为甘肃牧区危害严重的毒草之一 。 草高
10一 3 o e m , 花期 5一 6 月 , 果期 6一 8月 , 多生
于荒漠区的干河床、 浅洼地及砂砾质冲积土上 。
变异黄蔑对羊的危害甚大 。 民乐县 1 9 7 6一 1 9 78
年因食变异黄蔑中毒羊 l , 1 17 只 , 死亡 l , 09 8
只 , 死亡率 98 . 2 % ; 黄羊河农场 1 9 86 年统计 ,
绵羊变异黄茂中毒的发病率为 14 . 8% , 死亡率
10 0%
。
据发病区观察 , 中毒羊主要临床症状为消
瘦 、 贫血 、 头颈颤动 , 视力损害 , 共济障碍 , 成
瘾 , 衰竭 , 分娩异常 , 致畸和流产 。 与棘豆草
(
。 x y t r o p is ) 中毒症状酷似 。
一 材料和方法
(一 ) 实验动物 : 自永昌县东寨乡无疯草区
选购健康绵羊 8 只 (公母各 4 只 ) , 年龄 1 . 5一
3 岁 , 体重 2 6. 2一56 . s kg 。 实验前 15 天分别灌
服丙脚咪哇进行驱虫 , 并进行临床 、 心电图和
X谢线检查 ,无异常发现 . 每天给以足量的箭舌
豌豆和饮水 .
(二 )变异黄蔑 : 1987 年 7 月采于武威长城
乡红水村的荒漠地 , 收集结果期全草 , 晾干备
用 。
(三 ) 箭舌豌豆 : 1987年 7月购于甘肃农大
农场 , 晾干备用 .
(四 )实验分组 : 8 只绵羊随机分为 2 组 , 每
组 4 只 , 一组喂青干变异黄蔑 ; 另一组喂箭舌
豌豆草 。 各组体重平均为 27 士 l , 9 8kg 和 29 · 25
士 2 . 0 6kg 。
(五 ) 饲喂方法 ; 用特制铁栅栏和饲槽分栏
饲养 , 每日投草二次 , 称量每次投入量与剩余
量 。 两组羊每日平均各采食 .0 5一 .1 kZ go
(六 ) 临床检查及称重 : 分组前每隔 5 日进
行一次临床常规检查 , 实验中每隔 3 天检查一
次 , 出现症状后 , 每日观察记录 。 分别在实验
前 、 中和结束后称量体重 。
(七 ) 实验室检查 :
1
. 采血样 : 实验前一天及实验的第 18 天 、
第 52 天和第 62 天各采血一次 。 每次每只羊用
离心管采血 s m l 置于 37 ℃水浴半小时 , 分离血
清 , 供生化检验用 ; 另采肝素钠抗凝 (2 。拼 /
m l) 血 Z x Zm l供血常规检查和 E一玫瑰花环试
验用 .
2
. 血液检查 : 除作血常规检查外 , 并做病
变淋巴细胞计数 。
.3 血液生化 : ( l) 血液尿素氮 ( B U N ) : 二
乙酞一肘显色法 ; ( 2) 碱性磷酸酶活性测量
7
( A TP ) : p一磷酸甘油法 ;( 3)谷草转氨酶
( GOT) :金氏法 ;( 4)谷丙转氨酶 ( GP T) :赖
氏法 ;( ) 5血磷 P ( ) :单一试剂法 ;( 6)血钙
C ( a) :乙二胺四乙酸二钠 ( ED A T NaZ )滴定法 ;
7( )肌醉 :碱性苦味酸法 ;( ) 8血糖 :邻甲苯
胺法 ;( 9)血钾 ( K) :四苯硼钠试剂比浊法 ;
(1 0)总蛋白 (P ) T :双缩脉法 。
除血钙外 , 所有生化项目的最终比色均使
用西德 P一 E 公司的 L a m da 一 7 型紫外分光光
度计。 ( n ) 血清蛋白电泳 : 醋酸薄膜电泳法 。
透明好的薄膜连同载玻片用双波长薄层扫描仪
( C S一 9 10 型 , 日本岛津 ) 扫描 , 波长 595m m ,
电压 110 v , 求出各带百分比 。
4
. 免疫功能测定 : ( l) T 淋巴细胞 : a一醋
酸蔡醋酶 ( AN A E )染色法和 E一玫瑰花环形成
率测定 ; (2 ) B 淋巴细胞 : 酵母多糖一补体花环
测定 .
(八 ) 病理学检查 : 实验结束时 , 从喂毒草
组中选出有典型症状的羊 , 静脉放血致死 , 立
即剖检 。 取组织块用 10 %福尔马林固定 , H一
E 染色 。 同时剖检一对照羊 。 剖检羊立即开颅 ,
取大脑视球 、 延脑组织块 , 2 . 5%戊二醛 4℃前
固定 , 1%锹酸后固定 , E p o n 61 8 包埋 。 超薄切
片厚 700一 s o 0 A , 用国产 DX B :一 12 电镜观察 。
二 . 结果
(一 ) 临床检查 :
1
. 临床症状 : 喂变异黄蔑羊于第 31 天相
继出现症状 . 初精神沉郁 、 被毛粗乱 , 随采食
量增多 , 体重下降 , 日渐消瘦 , 中毒症状加重 ,
表现头颈水平颤动 , 后仰 , 后躯发硬 , 步态强
拘 , 有的出现跋行 , 最后 , 颈部僵硬 , 有的甚
至全身僵硬 , 容易摔倒 , 起立困难 , 终至十分
衰弱 , 卧地不起 。
2
. 食入毒草量 : 第 31 天时 , 食入总量为
3
·
25kg /只 , 至 52 天 (最后一只羊出现中毒症
状 ) , 平均食入总量为 4 . 8 7k g /只。 实验结束时
(共 62 天 ) , 平均食入毒草总量为 48 . 6 3 k g /只。
3
. 体重变化 : 实验结束时 , 喂毒草组羊平
均体重下降 2 . I k g /只 , 而对照组增加 2 . I k g /
只 。
8
4
. 体温 、 呼吸 、 脉搏及瘤胃蠕动 : 喂毒草
组在整个实验期体温 、 呼吸 、 脉搏变化 , 同对
照组比差异不显苇 (P > 0 . 0 5 ) 。 瘤胃蠕动次数
在食欲明显下降时 , 蠕动次数减少 , 持续明显
缩短 , 有的则蠕动停止 。
(二 ) 实验室检查
1
. 血液常规 : 整个实验过程中 , Hb 、 pvc 、
白细胞总数 、 分类计数均无明显变化 , 差异不
显著。 食毒草组淋巴细胞略减少 , 同对照组差
异不显著 ( p ) 0 . 05 ) 。
2
. 外周血液淋巴细胞形成率 ( % ) : 中毒组
淋巴形成率在第 18 天 、 第 52 夭和第 62 夭分
别为 3 1 . 5士 10 . 6 6 , 46 . 5士 13 . 17 和 47士 9 . 5 6 。
对照组血液淋巴细胞未见空泡形成 。
3
. 血液生化指标 : 实验组与对照组进行非
配对 t 检验时 , n 项指标中有 3项 ( B U N 、 A T P
产 GO )T 差异极显著 (P < .0 01 ) , 血磷差异显
著 (P < 0 . 05) ; 血清蛋白电泳显示 , 实验组白
蛋白含量和蛋白系数 , 在第 18 天升高 , 以后明
显降低 , 而对照组在第 18 `夭降低外 , 以后无明
显变化 ; : 一球蛋白在各期均明显升高 , 而对照
组仅在第 18 天明显升高 。 血磷 、 钾 、 钙 、 血糖 ,
肌醉和 G PT 等变化不明显 , 与对照组无明显
差异。
4
.
E一玫瑰花环形成率 (% ) : 第 18 天变化
不明显 , 第 52 天到第 62天其形成率明显降低 ,
同对照组比 , 差异显著 ( P < 0 . 05 ) 。
(三 ) 病理变化
1
. 眼观变化: 实验羊尸体消瘦 , 腹腔积液
(约 30 0m l ) , 为淡黄透明液 , 心包积液约 30m l ,
肝质地变脆 , 结构模糊不清 , 边缘变钝 , 其余
器官无明显变化。
2
. 光镜变化 : 主要病变为大脑 、 脑干网状
系统 (桥脑 、 延脑 、 丘脑 ) 、 脊髓 、 小脑等中枢
神经系统神经元及胶质细胞有广泛的细胞质空
泡变性及坏死 。 肾小管上皮严重空泡变性 、 坏
死 。 淋巴结及脾网状细胞空泡变性 。 肝细胞亦
有程度不等的空泡变性 . 甲状腺滤泡上皮有明
显空泡变性 , 所有的细胞浆都空泡化仅剩被挤
到细胞边缘或留在中央的胞核 。 心肌无明显变
化。
3
.电镜变化 :神经细胞及胶质细胞广泛空
泡化 ; 髓鞘水肿导致板样结构彼此分离 、 松散 、
髓鞘直径增夭。 细胞质的空泡均被有一层单位
膜 , 大小不等 , 呈卵园形 。 除有少数线粒体肿
胀和变性外 , 大多数空泡内都有溶酶体样结构
的内含物 , 说明空泡是线粒体或溶酶体单位膜
不断扩张所形成的。 其它细胞器如高尔基体 ,粗
面内质网等及细胞核无明显变化 。 少数细胞的
高尔基囊泡轻度扩张 。 有的空泡内含有多泡小
体 , 可能是脂肪滴挤入空泡 (或被空泡吞噬 ) 的
结果。 部分空泡内有大小不等的管状或小泡状
结构 , 由一层单位膜包被。 此外 , 还发现 , 细
胞间质水肿及毛细血管上皮细胞内存有同样的
空泡 。
三 . 讨论
(一 ) 绵羊单喂变异黄蔑在第 31 夭可出现
明显的中毒症状 。 其主要表现为消瘦 , 被毛粗
乱 中枢神经系统机能障碍 , 机敏 , 头颈水平
颤动 (采食时更明显 ) , 步态强拘 , 贫血和衰竭 。
这些症状同作者所观察到的棘豆草中毒和国外
描述的绵羊疯草中毒症状基本一致 。有记载谓 :
“ 绵羊中毒后一般表现如常 ,但逐渐悄瘦、 喘气 ,
死亡后解剖发现肺部有化脓现象 . 国内外对疯
草中毒的研究阐明 , 疯草的主要成分是苦马豆
素 ( S w a i n s o n in e ) 和氧化氮苦马豆素 。 苦马豆
素可抑制 a 一甘露糖昔酶 , 使溶酶体中积聚大
量富含甘露糖的低聚糖 , 细胞形成空泡 , 终致
细胞 (特别是神经细胞 ) 功能紊乱 从而出现
一系列临床症状 。 至于肺的化脓可能是继发感
染 , 同变异黄蔑中毒似无直接关系 。 实验表明 ,
变异黄蔑对血液生理生化指标的影响早于临床
中毒症状的显现 。 主要影响肝脏的代谢功能和
肾脏的排泄功能 ,外周血淋巴细胞空泡形成 。血
清生化指标上升最明显的是尿素氮 ( BU N ) , 碱
性磷酸酶 ( AL P ) 和谷草转氨酶 ( S GO T ) , 差
异极显著 (P < 0 . 001 ) , 其次为血清无机磷升
高 , 差异显著。 白蛋白含量和蛋白系数 ( A /
G ) 先升高 , 后明显降低 。 尿蛋白明显升高 , 其
它指标 , 变化不明显 .
(二 ) 变异黄蔑对绵羊免疫功能有明显影
响。 E一玫瑰花环形成率明显降低。 这种变化出
现于开始出现症状的第 31 天 . 随着症状加重 ,
花环形成率逐渐下降 ; 表明免疫功能随中毒程
度而下降。 这种变化同淋巴细胞空泡形成率呈
反比关系 , 说明空泡形成可降低淋巴细胞免疫
活性 。
(三 ) 病理学检查表明 , 变异黄蔑主要毒害
中枢神经系统和肝 、 肾 、 心实质器官 , 并以细
胞空泡变性为特点 , 严重者细胞发生崩解坏死 。
经电镜观察 , 空泡被有一层电子密度较高的单
位膜 ,是溶酶体样结构或线粒体肿胀所形成的。
这些结果同国内外其他种属疯草中毒的病变报
导基本一致 。
参考文献
( l) 内蒙古植物志编写组 , 1987 , 内蒙古植物志
(第三卷 ) , 2 13 。
(2 ) 陈冀胜 、 郑硕 , 19 87 , 中国有毒植物 , 3 0 一
30 1
, 北京 , 科学技术出版社 .
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中毒 , 甘肃畜牧兽医 , 3 , 5一 7 .
(4) 陈怀涛等 , 199。 , 绵羊实验性黄花棘豆中毒的
病理观察 , 畜牧兽医学报 , 25 ( 2 ) , 13 5一 13 9 。
( 5) 黄有德等 , 199 2 , 变异黄蔑有毒成分的分离与
分析 , 中兽医医药杂志 , 4 ( 55 ) , 3一 6 .