全 文 ：蒙药瑞香狼毒及其奶制品中新狼毒素甲、瑞香素乙、新狼毒素乙的比
较研究
吴七十三1， 王青虎1* ， 刘 瑛2， 代那音台1
(1． 内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000;2． 通辽市高级技工学校，内蒙古 通辽 028000)
收稿日期:2012-07-03
基金项目:内蒙古自治区高等学校科学研究项目 (NJ0121)
作者简介:吴七十三 (1969—) ，男，博士，副教授，研究方向:蒙药有效成分的活性筛选。
* 通信作者:王青虎 (1968—) ，男，博士，教授，研究方向:蒙药有效成分的分析。
摘要:目的 建立 HPLC法同时测定蒙药瑞香狼毒及其奶制品中新狼毒素甲、瑞香素乙、新狼毒素乙。方法 Hypersil
ODS-2 色谱柱 (300 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-水梯度洗脱;检测波长 293 nm;柱温为 30 ℃。结果 在所
用的实验操作条件下，3 种对照品溶液分别在 10 ～ 180 μg /mL (r = 0. 999 7)、10 ～ 120 μg /mL (r = 0. 999 3)和 10 ～ 60
μg /mL (r = 0. 999 7)具有良好的线性关系，平均回收率分别为 98. 73% (RSD = 1. 32%)、97. 92% (RSD = 1. 44%)、
97. 83% (RSD = 1. 54%)。结论 瑞香狼毒经牛奶炮制，可降低其中毒性成分的量，提高安全性。
关键词:高效液相色谱;瑞香狼毒;奶制品;有效成分;毒性成分
中图分类号:R283 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)02-0350-04
Comparison of neochamaejasmin A，daphnetin B，neochamaejasmin B from
Stellera chamaejasme and its products processed with milk
WU Qi-shi-san1， WANG Qing-hu1* ， LIU Ying2， DAI Na-yin-tai1
(1． College of Traditional Mongolian Medicine，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028000，China;2． Senior Technical School in
Tongliao，Tongliao 028000，China)
ABSTRACT:AIM To establish a method for simultaneously determing three active compounds (neochamaejas-
min A，daphnetin B，neochamaejasmin B)from raw material and Stellera chamaejasme Limt processed with milk by
HPLC． METHODS The separation by gradient elution was performed on Hypersil ODS-2 column (300 mm ×
4. 6 mm，5 μm)at 30 °C with methanol-water as the mobile phase and detection at 293 nm． RESULTS The lin-
ear ranges of three active compounds were 10-180 μg /mL (r = 0. 999 7) ，10-120 μg /mL (r = 0. 999 3) ，10-60
μg /mL (r = 0. 999 7) ，respectively． The average recoveries of five active compounds were 98. 73% (RSD of
1. 32%) ，97. 92% (RSD of 1. 44%) ，97. 83% (RSD of 1. 54%) ，respectively． CONCLUSION Stallera
chamaejasme processed with milk can reduce toxic substances and improve its safety．
KEY WORDS:HPLC;Stellera chamaejasme Limt;products processed with milk;active compounds;toxic sub-
stances
瑞香狼毒，蒙名为达琳图日古，系瑞香科狼毒
属植物瑞香狼毒 Stellera chamaejasme Limt 的干燥
根，具有峻泻，杀 “粘”，消 “奇哈”，止腐，消
肿之功效。临床用于肌、骨、脉 “奇哈”症，丹
毒，乳痈，腮肿 (腮腺炎) ，黄水疮，痘疮［1］。在我
国大部分地区均有野生，广泛分布于西北、内蒙
古、黑龙江等地。《晶珠本草》［2］、《蒙药正典》［3］、
《中国医学百科全书·蒙医学》［4］、《识药学》［5］认
为瑞香狼毒是瑞香科狼毒属植物瑞香狼毒 Stellera
chamaejasme Limt的干燥根，对形态和功效的描述
与《蒙药学》、《内蒙古蒙药材标准》所记载的相
同。文献报道瑞香狼毒主要的活性成分有黄酮
类［6-9］、二萜类［10］、香豆素类［11-15］ 以及木脂素
类［16-17］等化合物。瑞香狼毒总黄酮提取物具有较
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强的体内和体外抗肿瘤作用［18］，同时也是瑞香狼
毒的主要有毒成分［19］，所以在传统炮制的过程中，
为减少有效成分的损失，降低毒性，中医以醋炙的
方法进行炮制［20］，而蒙医一直都有瑞香狼毒牛奶
炮制、酒制和诃子汤炮制［21］的应用，而且取得了
显著的成效。王晋等［22］提出瑞香狼毒奶制后毒性
下降，但依然保持了良好的疗效。查阅文献，尚未
见有对其有效成分和毒性成分多指标成分同时定量
分析的报道，故本实验以新狼毒素甲、瑞香素乙、
新狼毒素乙为指标成分，建立了 HPLC 同时测定方
法并对瑞香狼毒及其奶制品中 3 种即为有效成分又
是毒性成分进行了比较。
1 实验材料
1. 1 仪器 AUW220D 型电子天平 (日本岛津) ;
HH—S26S 型水浴锅 (金坛市大地自动化仪器厂) ;
RE52—2 型旋转蒸发器 (上海泸西分析仪器厂) ;
KQ—100 型系列超声波冲洗器 (昆山市超声仪器
有限公司) ;UV—2501PC 型分光光度计 (日本岛
津) ;高效液相色谱仪 (LC10—Atvp 输液泵，
SPD—M10Avp 检 测 器， SCL—10Avp 工 作 站，
DGU—12A脱气机)。
1. 2 试药 瑞香狼毒采集于内蒙古呼盟，由内蒙
古民族大学蒙医药学院蒙药生药教研室布和巴特尔
教授鉴定为瑞香科狼毒属植物瑞香狼毒 Stellera
chamaejasme Limt的干燥根。新狼毒素甲、瑞香素
乙和新狼毒素乙均自制并用高效液相色谱仪分别测
定其纯度均高于 98. 5%，可作为对照品使用;甲
醇为色谱纯 (天津市光复精细化工研究所) ;水为
超纯水;其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 大连依利特 hypersil ODS2 柱
(300 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相为甲醇和水梯
度洗脱，梯度程序见表 1;检测波长 293 nm;体积
流量 1. 0 mL /min。在上述色谱条件下，新狼毒素
甲、瑞香素乙和新狼毒素乙达到基线分离 (R ＞
1. 5) ，理论塔板数均不低于 4 000，分离色谱图见
图 1。
表 1 梯度程序
Tab. 1 Gradient elution program
时间 /min 甲醇 /% 水 /%
0. 0 28 72
10. 0 45 55
20. 0 65 35
30. 0 75 25
40. 0 75 25
1. 新狼毒素甲 2. 瑞香素乙 3. 新狼毒素乙
1. neochamaejasmin A 2. daphnetoxin B 3. neochamaejasmin B
图 1 样品溶液 (A)和混合对照品溶液 (B)色谱图
Fig. 1 Chromatograms of sample solution (A)and mixed
reference substances (B)
2. 2 炮制品的制备 取瑞香狼毒 (采集时间
20100826)20 g，切成宽度约 0. 5 cm，放入烧杯
中，加牛奶 80 mL，浸泡 5 h，加热沸腾 20 min，
然后 60 ℃烘干 5. 5 h，取出备用［22］。
2. 3 溶液的制备
2. 3. 1 对照品溶液的制备 取新狼毒素甲、瑞香
素乙和新狼毒素乙对照品适量，精密称定，加甲醇
溶解，分别配成 6. 0 mg /mL的贮备液。
2. 3. 2 供试品溶液的制备 瑞香狼毒及其炮制品
研细，称取粗粉 0. 1 g，精密称定，加甲醇 25 mL，
称定质量，超声 30 min，放冷，用甲醇补充失质
量，过滤，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 检测波长的选择 分别取新狼毒素甲、瑞
香素乙和新狼毒素乙的对照液，在 200 ～ 400 nm
内，进行扫描，根据扫描图谱分析，确定新狼毒素
甲、瑞香素乙和新狼毒素乙的检测波长为 293 nm。
2. 4. 2 线性关系考察 精密吸取新狼毒素甲、瑞
香素乙和新狼毒素乙对照品贮备液适量，分别加甲
醇配制成 5 个不同质量浓度的系列对照溶液。分别
取上述溶液 5 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。
以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方
程和线性范围，结果见表 2。
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表 2 3 种有效成分的回归方程式和最低检测限
Tab. 2 Regression equation and detection limit of three ef-
fective components
化合物 回归方程
相关
系数
线性范围 /
(μg·mL －1)
最低检测限 /
(μg·mL －1)
新狼毒素乙 y =7 460x +38 138 0. 999 7 10. 0 ～ 180 5. 0
瑞香素乙 y =5 530x +96 517 0. 999 3 10. 0 ～ 120 5. 0
新狼毒素甲 y =1 736x －42 738 0. 999 7 10. 0 ～ 60 8. 0
2. 4. 3 最低检测限 (LOQ) 取新狼毒素甲、瑞
香素乙和新狼毒素乙对照品溶液以不同比例稀释后
测定，以信噪比 2 ～ 3 为最低检出，结果见表 2。
2. 4. 4 精密度试验 分别取同一新狼毒素甲、瑞
香素乙和新狼毒素乙的对照品液，在上述色谱条件
下，连续进样 6 次，测定峰面积。计算新狼毒素
甲、瑞香素乙和新狼毒素乙的峰面积 RSD，分别
为 0. 98%、1. 05%和 0. 89%。
2. 4. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于
制备后 0、4、6、8、12 h 依法测定，以峰面积值
计算新狼毒素甲、瑞香素乙和新狼毒素乙的峰面积
RSD分别为 1. 22%、1. 43%和 1. 12%，表明供试
品溶液在 12 h内基本稳定。
2. 4. 6 重复性试验 取同一采集时间的样品 6 份，
制备供试品溶液，进行测定，计算新狼毒素甲、瑞
香素乙和新狼毒素乙的质量分数，其 RSD 分别
1. 33%、1. 29%和 1. 02%。
2. 4. 7 回收率试验 精密称取样品 (采集时间为
20100826)0. 05 g，6 份，精密加入新狼毒素甲、
瑞香素乙和新狼毒素乙适量，制备供试品溶液，测
定，计算加样回收率和 RSD，结果见表 3。
表 3 回收率测定结果 (n =6)
Tab. 3 Results of recoveries (n =6)
对照品 原有量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% RSD /%
新狼毒素甲 0. 305 0. 300 0. 601 98. 67 1. 32
瑞香素乙 1. 172 1. 200 2. 347 97. 92 1. 44
新狼毒素乙 0. 053 0. 060 0. 112 98. 33 1. 54
2. 5 样品测定 精密吸取 3 个不同采集时间的样
品供试品溶液和炮制品溶液 3 份，每份 5 μL，进
样测定，计算样品中新狼毒素甲、瑞香素乙和新狼
毒素乙的质量分数，结果见表 4。
表 4 测定结果 (n =5)
Tab. 4 Determination results (n =5)
采集日期
新狼毒素甲 /
(mg·g － 1)
瑞香素乙 /
(mg·g － 1)
新狼毒素乙 /
(mg·g － 1)
2010-08-26 6. 102 ± 0. 096 23. 44 ± 0. 246 1. 067 ± 0. 012
2009-07-29 5. 854 ± 0. 082 16. 30 ± 0. 185 1. 154 ± 0. 016
2009-08-25 6. 466 ± 0. 093 24. 86 ± 0. 268 1. 080 ± 0. 013
炮制品 3. 202 ± 0. 039 5. 031 ± 0. 067 检测不到
3 讨论
3. 1 黄酮类成分是瑞香狼毒中含有量较大的一类
成分，具有较强的体内和体外抗肿瘤作用，也是主
要有毒成分。瑞香狼毒牛奶炮制是现代蒙医临床上
常用的炮制方法，经文献查阅，尚未见关于奶制对
瑞香狼毒中黄酮类化合物影响的报道，故本实验应
用 HPLC建立了同时测定 3 个即为有效成分又是毒
性成分的方法，对比了瑞香狼毒生品、奶制品中 3
个指标成分的含有量差别，从而探讨瑞香狼毒奶制
对黄酮类成分的影响和减毒的机理。结果显示，奶
制对瑞香狼毒黄酮类成分影响明显。其中，新狼毒
素甲、瑞香素乙的含有量明显降低，新狼毒素乙检
测不到。这说明牛奶炮制可降低瑞香狼毒中毒性成
分，提高安全性。关于牛奶炮制能降低瑞香狼毒中
黄酮类成分的原因有待于进一步研究。
3. 2 在流动相选择中，曾采用甲醇-水的不同梯度
洗脱系统，结果甲醇-水梯度洗脱 (0 ～ 10 min，甲
醇比例为 28%递升至 45%，10 ～ 20 min，由甲醇
腈比例 45%递升至 65%，20 ～ 30 min，甲醇比例由
65% 递升至 755%，30 ～ 40 min，甲醇比例为
75%) ，分离效果好，重现性强，可同时检测到新
狼毒素甲、瑞香素乙和新狼毒素乙且各成分均达到
基线分离。经紫外扫描可知，新狼毒素甲、瑞香素
乙和新狼毒素乙均在 261 和 293 nm处有最大吸收，
并且 293 nm吸收强度强，故选择 293 nm为检测波
长。
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苍耳子炒制对羧基苍术苷和苍术苷的影响
朵 睿1，2， 陈 燕1， 刘玉红1， 黄志芳1， 刘云华1， 易进海1*
(1． 四川省中医药科学院，四川 成都 610041;2． 泸州医学院，四川 泸州 6460001)
收稿日期:2012-03-20
基金项目:国家重点基础研究发展计划 (973 计划)课题 (2009CB522804)
作者简介:朵 睿 (1987—) ，女 (满族) ，硕士，研究方向:中药化学成分与质量标准。E-mail:165185553@ qq. com
* 通信作者:易进海(1963—) ，男，研究员，研究方向:中药化学成分与质量标准。Tel: (028)85210843，E-mail:yijinhai@ yahoo. com. cn
摘要:目的 研究炒制对苍耳子中有毒成分羧基苍术苷与苍术苷的影响。方法 采用 HPLC 法，色谱柱为 Agilent
ZORBAX SB-phenyl (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)柱，流动相为乙腈-0. 01 mol /L NaH2PO4 溶液 (pH = 6)梯度洗脱，体
积流量 1. 0 mL /min，检测波长 203 nm，柱温 35 ℃。结果 苍耳子炒制后羧基苍术苷含有量显著降低，苍术苷含有量
先升高后降低。结论 苍耳子炒制后能较大程度地降低毒性，故应炒制后入药。
关键词:苍耳子;羧基苍术苷;苍术苷;炮制
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)02-0353-04
Influence of processing on contents of carboxyatractyloside and atractyloside in
Xanthii Fructus
DUO Rui1，2， CHEN Yan1， LIU Yu-hong1， HUANG Zhi-fang1， LIU Yun-hua1， YI Jin-hai1*
(1. Sichuan Provincial Academy of Chinese Medicine Sciences，Chengdu 610041，China;2. Luzhou Medical College，Luzhou 646000，China)
ABSTRACT:AIM To measure the poisonous contents change of carboxyatractyloside and atractyloside of Xan-
thii Fructus before and after stir-frying． METHODS Analysis of both carboxyatractyloside and atractyloside were
performed on Agilent ZORBAX SB-phenyl (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)column with 203 nm of detective wave-
length，and acetonitrile-0. 01 mol /L NaH2PO4 (pH =6)as mobile phase． The flow rate was 1. 0 mL /min，and the
column temperature was maintained at 35 ℃ ． RESULTS The carboxyatractyloside content reduced significantly
and atractyloside content increased at first and decreased subsequently． CONCLUSION It is an effective method
to cut down the toxicity and conserve the activity of Xanthii Fructus by processing．
KEY WORDS:Xanthii Fructus;carboxyatractyloside;atractyloside;processing
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