全 文 ：兰州 大学学报 ( 自佛科学版 ) 、
2 1 ( 生物学样 fJ ) ; 3 6一 4 1 . 1 98 5
银莲花素A 和阿年泰苹芦笋 . 勺
碱诱变作用.的研究 ”
王肖置 刘 秦狱 郑荣梁二 ’
· 贾忠建 · … 1 吴风愕 ,
· 摘 . ’ 要 : · 卜少 协 · _
本丈用 s C D技术浏 定 了两种植物天焦产物 : 银策花素人 ( R 。 ) 二 有尔奏幸芦总班诱 发 人 体
沐巴 细胞 S C E 的作用 . 以及 荆量与效应之间的关 系并比较二者诱发S C E 能力大小 。
初 步结果表明 : 落芦总城能诱 发人体淋巴细胞 S C E 倾率增高 , 而且 粼 黄 与 效应 i 正相 关`
在相 同浓度时诱 发 S C E的能力 : 婆声总城> R `
“ 前 几 ` ’ 飞 言厂 ` 下
姊妹染色单体分化 ( S i s t e r C h r o m a t id D i f f e r e n e e , S C D ) 染色法 是七十年代发展
起来的新技术 , 是检测诱变剂或致癌剂的一种高度灵敏的方法 l( 工` :各种已知 的 诱 变 剂或
致癌剂即使其浓度在细胞毒理学和致染色体断裂水年以下时 , 也能诱发姊 妹染 卜色 单体互换
( iS
s t e r hc
r o m 。 t i d E x c h a 五g e 护 s C E ) 〔幻 , ·化学物质致突变的能力与它诱导形成 S C E
的能力之间存在着相关性 〔’ 〕 , 8。` 助%的致癌突变物也是致癌物 , 因此 , · 测定化学物质诱
发S C E的能力可以用于鉴定其潜在的致癌性 。 厂
目前使用 的许多抗癌药物都是植物界提供的 , 但植物界也是天然致突变和致癌物的主要
来源 。 近来有专文 〔“ 〕研究植物天然产物的抗癌及致癌作用 。 该文例举了包括食用植物在内
的十多类天然产物 , 例如 , 一黄樟油素 , `食用菌中的饼类化合物犷柠檬 ` 薄荷 , 马铃薯中的龙
葵碱等等都具有致癌和诱变作用言又如日本人食用的欧洲藏可诱发母牛和大 鼠膀耽瘤 , 中草
药款冬花梗中分离出的毗咯双烧生物碱可引、起大鼠肝癌〔幻 ` 总的来说 `几对植物的抗癌作用研
究较多 , 而对它的致癌作用研究才刚刚被重视 。
本工作对两种中草药中分离出的银莲花素 A 和阿尔泰葵芦总碱诱变作用进行了研究 。 银
莲花素 A 是从竹节香附的根茎中分离出来的一种新的皂昔 , 它具有祛痰消炎和 抗 癌 作用〔 , 〕
` 1。〕 , 黎芦属百合科多年生草本植物 , 它除具有多种疗效外还有抗癌作用〔” 。 用这 两种药物
分别作用离体培养的新生儿脐血淋 巴细胞 , 检测了两种药物对人体琳 巴细 胞 S C E 的影响 ,
从而了解它们的诱变能力及剂量与效应之间的关系 。
材 料 与 方 法
1
. 银莲花素人 和阿尔泰薄芦总碱 , 均用。 . 5%吐温一 80 无菌配制成浓度为 20 林以 m l的
本文 1 98`年 6 月 8 日收到 . 西北位物研究所二 本工作为中国朴呼优朴学基金资助裸耳母二 通讯联 孟人
DOI : 10. 13885 /j . i ssn. 0455 -2059. 1985. s1. 007
生物学辑刊 银莲花素 A和阿尔芦藤芦总碱诱变作用的研究 37
悬液 。 这两种药物均由兰大有机化学研究所天然产物研究室提供〔10 〕c1 。 。
2
. 细胞 : 新生儿脐血琳巴细胞 , _甘肃省人民医院妇产科提供 。
3
. 培养液 : 无菌配制 R P M l l 640 培养在加20 %小牛血清及双抗 , 每个培养瓶分装 5 0 1 ,
再加植物血球凝集素 1 · 5垃以瓶 , 娜 , 滨脱氧尿嗜 咤核替 ( B du R ) , 使最终浓度为 8 , 以m l
(以上药品均为国产的 ) 。
.4 实验方法 , 用改进后的人体微量血姊妹染色单体培养和互换制片法 c8 〕闭
( 1 ) 外周血淋巴细胞培养及标本片制作
在 5m l培养液中加入。 . 4一。 . 6 m l全血和 o . Zm l的 B u d R , 放37 ℃避光 培 养24 小 时 后分别
加入各种不同浓度的待测药物必继续培养48 小时 。
收获细胞 : 培养终止前 3 小时加入秋水仙素 , ’ 使终浓度为6 . 0 5吨 /。 1。 终止后吹打匀培
养液并转入 sm l离心管中离心 。 ” 嵘
低渗和固定 : 弃去培养液加入 o . o 75 M K cl 5m l , 打匀放37 ℃ ’温箱中 , 30 分钟后 离心 ,
弃去上清液加固定液 ( 甲醇 : 乙酸 = :3 1) s m l, 共固定三次 , 第一次30 分钟 , 第二次 1 2一 24
小时 , 第三次 30 分钟 , 每次9 0 转 /分 , 离心 10 分钟 。
制片 : 离心后留新鲜固定裤“ · 5一 l m l, 吹打制成均匀的细胸悬液 , 将 此 悬 液 1 一 “ 滴
于冰冻载玻片上过微火后空气于燥 。 放在 37 ℃ (温箱中 1 2一 24少时) :
( 2 ) 姊妹染色单体分花染色 。
将已制好的标本片依次浸入 : o . 14 M N a C I , 0 . 0 0 4 M K C I , 1八 SM P B S ( P H 6 。 8 )
各 5 分钟 , 饥 01 %叮吮橙 ( P H 4 . 8) 染色 15 分钟 , 1 / Zo M P B S冲洗 1 分钟浸 泡 9 分钟 。 将
标本片放在铺有吸水纸的瓷盘中央 , 玻片上加上 2 义 5 S c (0 . 3M N a CI , 0 . 。 3M 柠 檬 酸 钠
P H了j ) , 再复盖上一 张擦镜纸 , 瓷盘内也加上 2 x S S C液 , 以既不蒸干也不盖过 标本片为
宜 。 将瓷盘放在 70 一 80 ℃的电热板上 , 用 30 W紫外灯照射 40 分钟扩 垂直距离 6 。 m 。 然后用水
冲洗再用 10 % G i e m s a ( P H .6 8) 染色 15 一 30 分钟 。 经水冲洗空气干燥 。
( 3
`
) 姊妹染色单体耳换频率测定
在普通光学显微镜下 , 每种处理选择约叩个铺展良好 , 染色体数目2n = 46 条差别染色清
楚的第二周期中期分裂相细胞 , 计 S C E频率 。 标准为 : 每一条染色体若臂端交换计为一次 ,
中间交换计为两次 , 着丝点处交换计为一次 。 见图 1 , 2 。
臂端交换
什`为欢〕 著
些点交换
(计为一次少
图 1 。 掺入 B u d R后经 S C D染 色的第二周期 中期分裂的细鹅来 色体 图
2
,
S C E 汉吐定的标准
兰 州 大 学 一 学 报 9 18 5年 2 1月
结 果 . _ 和 讨 论
`
( 一 )银莲花素A ( R : ): 不同浓度R : 诱发5 CE 的结果见表卜 。 共作四组各设对照组 ,
在所 用剂量范围内 , R 3对 S C E的影响与对照组相比无统计学上的显著差异 ( P > 。 . 05 ) 。 当
浓度高于 3 2林g / m l时抑制细胞增殖 , 但也未发现 S C E频率发生显著差异 。 故 R , 可 能不 是诱
变剂而可能是较理想的抗癌药 。
袅一 银莲花素 A ( R . ) 诱发人体琳巴细鲍 S C E
实 验 组 数 药 物 浓 度
( 卜g ,恤 I )
观 察 细 胞 数
( n )
又 士 S E P 值
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生物学辑刊 银莲花素 A 和阿尔泰黎芦总碱诱变作用的研究
(二 ) 阿尔泰妻芦 ( v e云。应r板奋 l。 b e a、 a 。 。 m 一B e : n 、 ) . 不同浓度的阿尔泰葵芦总尸办碱户é总
城均能诱发 S C E频率增高, 见表与 而早剂量与效应呈正相关见图 3 ` 当浓度 达 到 2林 g ZnI l
时与对照组相比在统计学上有辱著差异 一, ( 仑< ” `呱千` 因此 , 、作为娜停药物使 用时 , 应该将
剂量控制在一定范围 。
衰二 阿尔琪黎芦总喊场发人体琳细胞 s 、 C E
实 验 组 数 药 物 浓 度
( 卜g /二 1 )
观 ’察 细 胞 数 蔺 士 S E P 值
对 照 0 。 2 5 m l 0 。 5肠吐温一 80 2 4 8 . 3 8士 0 . 5 6实 脸 0 。 0 1 一 , 9 . 60土0 . 9 1 > 0 0 50 。 5 - 一~ ~ 城` ` 石沁 -一一一 9 . 6 9王0 . 4 3 、> .0 052 10 10 . 2 3土0 . 65 < 0 . 0 5
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4 0 兰 州 大 学」 学 报 1 9 8 5年 1 2月
本实验所设六个对照组 , 全部加0 . 25爪 l 工 5% 吐温一80 它们诱 发 S C E 频 率 分 别 为 :
7
.
0 5 士 2 。 5 7 , ? 。 5 0 士 2 . 7 3 ,
它们之间的差别都不明显 ,
7
.
30 生云石。奋6 . 初士 : ` e , ’ 。`蕊生: . 71 , ` 8 . 39 士·豆`71 。 可以着出
因而 , 一几向接说叻了卖坛绪桌亩童厦性较好 。 “ -
. 考 资 料
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.自目
R e s e a r e h o n l n d u e t i o n a f V a r i a t i o n b y R a bb e a n i n A ( R 3 )
a n b T o t a l A lk a l o i d s o f H e l l e b o r e (V e r a t r u m L o b e l i a n u m ) 口 .
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t h e e f f e e t o f r a d d e a n i n A ( R 3 ) a中 t o t a l a l k a l o i d s o f h e l l e b o r e ( v e r a t r -
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n o a P P a r e n t s t a t i s t i e a l d i f f e r e n e e b e t w e e n t h e e f f e e t s o f R 3 a n d e o n t r o l
。
H e l l e d o r e a l k a l o i d s e o u l d n o t o n l了 i n e r e a s e t h e f r e q u e n e 了 o f S C E b u t a l s o
m a k e t h e e f f e e t s e l o s e l了 e o r r e l a t e d w i t h t h e d o s a g e 。
尸( 上接 5 8页 )〔 1 5〕 粟时金 陈叔涵 1 9名3 , 化学通报 ( 4 ) : 2 5一 2 9