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蝉翼藤氯仿提取物防治胃溃疡作用及机制



全 文 :△通信作者,桂林医学院机能学实验室
收稿日期:2012-03-05
蝉翼藤氯仿提取物防治胃溃疡作用及机制
伍 倩 李 丽△ 唐庆年
(中国人民解放军第181医院药剂科 桂林 541002)
摘要 目的:研究蝉翼藤氯仿提取物对胃溃疡的作用和作用机制。方法:采用冰乙酸烧灼的方法使用:建立大鼠胃溃疡模型,
将大鼠分为假手术组、模型对照组、阳性对照(雷尼替丁)组和蝉翼藤氯仿提取物高、中、低(2.0,1.0,0.5g/kg)剂量组,在大鼠
乙酸胃溃疡急性期用蝉翼藤氯仿提取物治疗,并与传统的抗溃疡药雷尼替丁组相对比,观测12d的溃疡指数并计算溃疡抑
制率和发生率,收集并测定血清及胃溃疡胃黏膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性及前列腺素E2(PGE2)、丙二醛(MDA)含量。
结果:胃溃疡大鼠模型血清及胃黏膜组织中SOD活性降低,MDA含量增加,PGE2 的水平降低,溃疡指数明显增加;蝉翼藤氯
仿提取物能降低溃疡指数,提高胃组织及血清SOD的活力,降低 MDA含量,并可提高PGE2 的水平,与模型对照组比较差异
有统计学意义(P <0.01或P <0.05)。结论:蝉翼藤氯仿提取物防治消化性溃疡的作用,其机制可能与抗氧自由基损伤、提
高胃内源性PGE2 的水平有关。
关键词 蝉翼藤氯仿提取物;胃溃疡;超氧化物歧化酶;丙二醛;前列腺素E2
中图分类号:R-33   文献标志码:A   文章编号:1005-930X(2013)04-0523-03
  蝉翼藤(Securidaca inappendiculata Hassk.)为远志科、
远志族五味藤属攀援灌木,分布于印度、缅甸、越南、印度尼
西亚和马来西亚,我国产于广东、海南、广西和云南。其根茎
味辛、甘、苦,性微寒,有活血化瘀、消肿止痛、清热利尿的功
效,用于跌打损伤、风湿骨痛、腰肌劳损、急慢性肠胃炎、产后
恶露不净等[1]。本实验主要研究蝉翼藤氯仿提取物对胃溃
疡大鼠血清及胃黏膜超氧化物歧化酶(SOD)、前列腺素E2
(PGE2),丙二醛(MDA)含量的影响,探究其药理作用和作
用机制,为临床应用提供实验依据。
1 实验材料
1.1 实验药物:蝉翼藤由玉林制药厂提供,并经广西医科大
学李梅教授鉴定。蝉翼藤氯仿提取物:根皮粗粉5kg,用石
油醚(30~60℃)回流提取脱酯,残渣用氯仿加热回流提取3
次,合并提取液减压浓缩得浸膏约200g,使用时用稀释成所
需浓度即可。盐酸雷尼替丁胶囊,杭州赛诺菲民生制药有限
公司生产,150mg/粒,批号:20100409,实验时以生理盐水配
成0.5%的混悬液。
1.2 实验动物:健康清洁级SD大鼠,雌雄各半,体重(208±
16)g,动物合格证号:SCXK-桂-2009-0002,均由广西医科大
学实验动物中心提供。
1.3 试剂与仪器:冰乙酸:天津市东丽区天大化学试剂厂生
产,批号:201008240,级别:分析纯,乙酸含量 ≥99.5%。
SOD、MDA试剂盒及PGE2 放免试剂盒由南京建成生物工
程研究所提供;游标卡尺(0~125mm,精密度0.02mm,上
海精密仪器仪表有限公司)。
2 实验方法
2.1 实验动物分组:用随机抽签法将60只大鼠分为6组,即
假手术对照组(假手术组)、模型对照组、阳性对照组(雷尼替
丁组)和蝉翼藤氯仿提取物的高、中、低剂量组,每组10只。
2.2 给药方法:治疗组高、中、低3个剂量组分别灌胃给予
蝉翼藤氯仿提取物2.0,1.0,0.5g/kg;阳性对照组灌胃给予
盐酸雷尼替丁胶囊,剂量60mg/kg;假手术组和模型对照组
均灌服等量纯化水,连续用药12d,每天1次。
2.3 动物造模及取材[2~5]:实验大鼠适应性饲养2d,术前禁
食不禁水24h,3%戊巴比妥钠溶液40mg/kg体重腹腔内注
射麻醉,剑突下0.5cm纵向切开腹壁约2cm,自肝后找出
胃,轻轻移出腹腔,在各组用微量注射器注射在胃前壁胃窦
部浆膜下近肌层处注入0.03mL的冰乙酸,待出现直径
约3mm半透明的白斑后,将胃送还腹腔,以大网膜包裹,缝
合腹膜、肌层和皮肤。假手术模型:实验时将大鼠用乙醚麻
醉,固定于木板上,开腹轻轻拉出全胃,用镊子或其它手术器
械刺激腺胃部,将结扎线置于幽门部,但不结扎,缝合腹腔切
口,用生理盐水清洗创口并消毒。手术过程中严格无菌操
作。术后第3天开始各给药组按剂量灌胃给药,假手术组和
模型对照组灌胃给予等体积的纯化水,每天1次,共12d。
治疗12d后,大鼠禁食不禁水8h,3%戊巴比妥钠溶液麻醉
下,开腹,结扎幽门和贲门,摘出全胃,用1%福尔马林溶液固
定5min,将胃切开,用蒸馏水洗除内容物,平展在玻璃板上,
观察胃溃疡情况,然后沿溃疡边缘3mm切下胃壁,制作病理
切片,冰冻。处死前腹主动脉取血约5mL,加入抑肽酶,离
心,取上部血清,装入EP管中,按组别1-60编号标记,冷冻
备用。
2.3.1 胃溃疡指数和溃疡抑制率的计算[6]:将全胃置于
·325·
广 西 医 科 大 学 学 报
JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY
 2013Aug;30(4)
DOI:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2013.04.003
1%福尔马林溶液中固定5min,然后平展于玻璃板上,在胃
前部黏膜面观察溃疡发生情况,以溃疡面积的大小即溃疡面
积的总和表示溃疡指数,同时计算溃疡发生率和溃疡抑制百
分率。
溃疡抑制百分率=(模型对照组溃疡指数-给药组溃疡
指数)/模型对照组溃疡指数×100%
2.3.2 血清中PGE2、SOD、MDA的测定[7]:3%戊巴比妥钠
溶液麻醉下,开腹,腹主动脉取血约5mL,加入抑肽酶,离
心,取上部血清,装入EP管中,编号标记,冷冻备用。按试剂
盒方法测定血清中PGE2,MDA含量和SOD活性。
2.3.3 胃黏膜中PGE2、SOD、MDA的测定:治疗12d后,大
鼠禁食不禁水,用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,结扎贲门,摘
除全胃,用滤纸擦净血迹,沿胃大弯剪开胃壁,取溃疡边缘的
胃黏膜,放入生理盐水冲洗吸干,电子天平称取0.3~0.4g,
用冰0.9%氯化钠溶液制成10%匀浆,离心后取上清液,测
定胃黏膜内源性SOD活性和 MDA、PGE2 含量。均按试剂
盒说明书操作。
2.4 统计学方法:采用SPSS11.0统计软件,所有实验数据
以均数±标准差(珚x±s)表示,不同组间比较采用单因素方
差分析,两样本间比较采用t检验,P <0.05为差异有统计
学意义。
3 结 果
3.1 蝉翼藤氯仿提取物对乙酸烧灼型大鼠胃溃疡面积影
响:结果见表1。从表1中可见,模型对照组的大鼠100%出
现胃溃疡而假手术组未发生胃溃疡现象,说明造模是成功
的。雷尼替丁组、蝉翼藤氯仿提取物高、中、低剂量组均有明
显的抗胃溃疡作用,溃疡指数均明显偏低,与模型对照组比
较,差异有统计学意义(P <0.01或P <0.05)。蝉翼藤氯
仿提取物高、中、低剂量组中,蝉翼藤氯仿提取物高剂量组的
作用效果最好,其胃溃疡抑制百分率最高为66.5%,但未及
雷尼替丁组(82.1%)。
表1 蝉翼藤氯仿提取物对乙酸烧灼型大鼠胃溃疡的影响(珚x±s)
 组别 n 剂量
溃疡指数
(l/mm2)
抑制百
分率(%)
溃疡发
生率(%)
模型对照组 10  10mL/kg  29.6±10.1 — 100
雷尼替丁组 10  60mg/kg  13.4±7.5** 82.1  56
蝉翼藤氯仿提取物高剂量组 10  4.0g/kg  15.6±10.2** 66.5  65
蝉翼藤氯仿提取物中剂量组 10  2.0g/kg  17.7±9.9* 56.9  75
蝉翼藤氯仿提取物低剂量组 10  1.0g/kg  20.3±8.8* 28.7  78
假手术组 10  10mL/kg — — —
        注:与模型对照组比较,**P <0.01,*P <0.05;“—”表示未检测
3.2 对大鼠血清SOD活性和 MDA、PGE2 含量的影响:测
定结果见表2。对乙酸溃疡型大鼠血清SOD活性的影响:
假手术组、蝉翼藤氯仿提取物高剂量组、雷尼替丁组明显高
于模型对照组(P <0.01),蝉翼藤氯仿提取物中剂量组与模
型对照组比较差异有统计学意义(P <0.05),蝉翼藤氯仿提
取物低剂量组与模型对照组比较有升高趋势,但差异无统计
学意义(P >0.05)。对血清 MDA含量的影响:假手术组、
蝉翼藤氯仿提取物高、中、低剂量组、雷尼替丁组明显低于模
型对照组(P <0.01或P <0.05)。对血清PGE2 含量的影
响:假手术对照组、蝉翼藤氯仿提取物高、中、低剂量、雷尼替
丁组明显高于模型对照组(P <0.01或P <0.05),蝉翼藤
氯仿提取物低剂量组与模型对照组比较有升高趋势,但差异
无统计学意义(P >0.05)。
表2 蝉翼藤氯仿提取物对乙酸烧灼型胃溃疡大鼠血清SOD活性和 MDA、PGE2 含量的影响(珚x±s)
 组别 n
SOD
(U/L)
MDA
(cB/nmol·L-1)
PGE2
(ρB/ng·L
-1)
模型对照组 10  71.46±4.79  16.42±4.36  92.12±14.82
雷尼替丁组 10  78.71±4.89** 11.25±3.64* 118.96±12.48**
蝉翼藤氯仿提取物高剂量组 10  77.96±4.20** 12.21±2.03* 106.67±19.32**
蝉翼藤氯仿提取物中剂量组 10  76.84±3.65* 12.63±2.46* 102.44±22.33**
蝉翼藤氯仿提取物低剂量组 10  73.38±6.18  14.12±2.64* 95.98±18.65
假手术组 10  80.13±3.81** 10.21±2.28** 130.19±13.87**
        注:与模型对照组比较,**P <0.01,*P <0.05
3.3 对胃溃疡大鼠胃黏膜SOD活性和 MDA、PGE2 含量的
影响:结果见表3。表3结果显示:假手术组,蝉翼藤氯仿提
取物高剂量组,雷尼替丁组明显高于模型对照组(P <
0.01);蝉翼藤氯仿提取物中,低剂量组与模型对照组比较差
异有统计学意义(P <0.05)。对乙酸溃疡型大鼠胃胃黏膜
MDA含量的影响,假手术组,蝉翼藤氯仿提取物高、中、低剂
量组,雷尼替丁组 MDA含量明显低于与模型对照组(P <
0.05),对乙酸溃疡型大鼠胃黏膜PGE2 含量的影响:假手术
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组、蝉翼藤氯仿提取物高剂量组、雷尼替丁组明显高于模型
对照组(P <0.01),蝉翼藤氯仿提取物中、低剂量组高于模
型对照组(P <0.05)。
表3 蝉翼藤氯仿提取物对乙酸烧灼型胃溃疡大鼠胃黏膜SOD活性和 MDA、PGE2 含量的影响(珚x±s)
 组别 n
SOD
(U/L)
MDA
(cB/nmol·L-1)
PGE2
(ρB/ng·L
-1)
模型对照组 10  118.62±11.55  6.68±1.85  81.56±12.31
雷尼替丁组 10  186.65±12.28** 4.53±1.05* 116.65±11.52**
蝉翼藤氯仿提取物高剂量组 10  189.26±11.59** 4.32±1.12* 108.22±10.25**
蝉翼藤氯仿提取物中剂量组 10  168.71±12.28* 4.86±1.09* 101.38±9.9*
蝉翼藤氯仿提取物低剂量组 10  152.89±14.73* 5.53±1.38* 96.79±13.81*
假手术组 10  196.66±13.21** 3.86±0.98* 134.88±13.81**
       注:与模型对照组比较,**P <0.01,*P <0.05
4 讨 论
胃溃疡的发病原因比较复杂,一般认为是由于多种原因
引起胃黏膜损伤,导致对胃酸、胃蛋白酶的抵御能力降低,从
而出现溃疡症状。可用化学性、物理性刺激以及通过应激状
态诱发各种溃疡病理模型。乙酸法制备的胃溃疡病变与人
类胃溃疡较接近,呈慢性经过,适用于溃疡病治疗学的研究。
同时,乙酸胃溃疡模型也符合中医理论。
本实验研究蝉翼藤氯仿提取物对大鼠胃溃疡的作用,实
验结果表明,蝉翼藤氯仿提取物能明显降低溃疡指数,具有
促进溃疡愈合的作用,对消化性胃溃疡有明显的改善作用。
胃和十二指肠黏膜的内生前列腺素主要是PGE2,具有促进
胃黏膜上皮细胞分泌黏液与碳酸氢盐、加强黏膜血液循环和
蛋白质合成等作用,是增强黏膜上皮细胞更新、维持黏膜完
整性的一个重要保护因素。因此,提高胃肠黏膜内源性
PGE2 的分泌,可增强胃肠黏膜的自我保护能力。PGE2 是评
价再生黏膜功能成熟度的一个重要指标,为公认的细胞保护
因子。它作为一种局部激素,通过抑制胃酸分泌,增加黏膜
血流,促进胃黏液和碳酸氢盐分泌,促进蛋白合成和细胞更
新,介导适应性细胞保护作用,从而间接减少黏膜损害,使已
受损的胃黏膜修复。蝉翼藤氯仿提取物能提高血浆及胃黏
膜PGE2 水平。模型组大鼠PGE2 水平较假手术组明显降
低,说明溃疡形成过程中,胃黏膜分泌细胞保护性激素PGE2
功能受损。而经蝉翼藤氯仿提取物治疗后,大鼠血浆及胃黏
膜PGE2 水平明显上升,与模型对照组比较差异有统计学意
义(P <0.01或P <0.05),说明蝉翼藤氯仿提取物可显著
促进胃溃疡大鼠上皮细胞合成和分泌PGE2,增强胃黏膜防
御功能,有提高再生黏膜功能成熟度的作用,这可能是其促
进溃疡愈合的机制之一。胃肠黏膜在化学物质作用或缺血
等情况下可产生大量的氧自由基,过量的氧自由基在整体水
平和细胞水平都可以引起胃黏膜或黏膜细胞的脂质过氧化,
并以共价键结合的方式造成胃黏膜的损伤。清除氧自由基
不但能防止胃肠黏膜损伤,还可促进损伤的修复。SOD是催
化、清除氧自由基的重要酶类,是生物体内氧自由基清除系
统的首要防线,具有保护细胞 DNA、蛋白质与细胞膜的功
能,是胃黏膜的保护因子之一,其活力的高低间接反应了机
体清除自由基的能力;MDA 是胃黏膜的攻击因子之一,
MDA含量的高低又间接反映出机体组织细胞受氧自由基攻
击的严重程度,因而 MDA的测定常和SOD的测定相互配
合。在胃黏膜损伤过程中,SOD的活性降低,MDA的含量升
高。
本实验结果显示,蝉翼藤氯仿提取物可提高胃黏膜及血
清SOD和PGE2 水平、降低 MDA水平,显示出较强的清除
氧自由基、保护胃黏膜的能力。蝉翼藤氯仿提取物对实验性
胃溃疡模型有保护作用,为进一步开发及临床治疗胃溃疡提
供了依据。
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