全 文 ：第 1 4卷 箕 6 湘 中反食周苗 E D工B E LN F U G工 O F CH工N A
草灵芝菌丝液体
培养的复因子筛选
柔专
李弓
(西安植豹园
璐
西安 7 100 6 工 )
张递义
(西北师范大学 兰州 3 7o G丁。 )
摘要 为了龄止草灵芝菌丝液 体 J吝荞的 高产纽 今 , 作
者进行 了三因 素二水平的正交 设计试脸 。 生物统计的 结哭
表明 , 草灵芝 菌丝 液体培养的主料是玉术粉 , 共最佳 高产
组合是 p H 伍 为 .5 。的玉 术粉培 养基 。
关镇词 草天芝菌 液体培养 复因 予
我国 自7 0年代起对灵芝的深层培养 , 利 用发酵
生产获得菌丝体 , 大大缩短 了生产周期 , 解决了药
源 。 但关于名贵药用菌草灵芝 ( G洲。 d er 川 a s p . )
菌丝的液体培养尚未见报道 。 作者采用了正交试验
探讨了影响草灵芝菌丝液体培养产量 的主要因子 ,
并筛选 出了高产组合 。
材杆与方法
菌种与培养基 草灵芝菌种 由西北师范 大 学
生物系生物化学教研室提供 。 斜面培养基含蛋 白陈
1 %
、 苟萄糖 1 0% 、 醇母 汁 0 . 1% 、 M g S O 。 · 7 H , O
。 . 05 % 、 K Z H p O ` 0 . 1% 、 琼脂粉 2 % 、 N A A和维
生 素极微 星 。 招瓶培养基的主料为玉米粉 5 %或鼓
皮 5 % 、 辅料皆为 K H : P O ` 。 . 1% 、 蛋白陈。 . 15 % 、
醉 母膏 。 . 1% 、 葡萄精 1 %和 M g S O ` 。 . 07 5 % 。
1
.
2 试验方法 本文采用 L : ( 2 , ) 正交设计试 验
(丧 1 ) , 含 8 个组合 , 2 次重 复。 摇瓶培养基的制备
是先将主料煮沸 3。分钟 , 然后用 6 层纱布过滤 , 取
滤液加蒸馏水至 4 0 m l , 加辅料 , 测出 p H 值 , 在
5。。 m l 摇瓶培养瓶内装液 20 o m l , 并 用塞子封 口 ;
农 1 . 2卜g / c m “压力 下灭菌 30 分钟 , 冷却 ; 取草灵芝
的斜面菌 种 , 在无菌条件下刮取苗苔和 少 量 培 养
墓 , 制 成苗悬液 , 在恒沮振荡器上培养 10 天后按照
5 m l和 l o m l的接种量 分别接种 。 然后在恒温振荡器
上继续培养 。 拧速 90 一 1 2 0次 /分 , 温度 2 3一 25 ℃。
培养10 天后取样测定 。
生物量的测定是用真空泵过滤 , 使 菌 丝 结 成
团 , 用天平秤称得混重 ; 然后在电热干挽箱中70 ℃
下 烘至恒贡 , 用天秤称得干重 。 设各试验菌丝湿重
和干重 的最大值各为 50 分 , 则 Y = 组合湿重 / 同次
试验 最大湿重 十 组合干重 /同次试验最大干重 x 5 o 。
Y 值大产量高 。
2 试验结果与分析
2
.
1 直观分析 试验得知 , 培养 10 天后 a , 、 a Z 两
种培养基组合均表现出菌液粘稠 , 浅黄色 , 均匀满
布菌丝 , 菌丝颜色较醛液色浅 , 有芳香气 味。 p H
值均为 6 . 0 , a : 培养基中菌丝多于 a Z培养基中菌丝 。
2
.
2 极差分析 试验结果 (表 2 ) 的极差 分 析表
明 , 二因素极差 R过 , R c 均大于R E , 表明试验结果
可靠。 而且C 因素 R值最大 , 说明因素 C在草灵芝 菌
丝液体培养中效应最大 , 是草灵芝菌丝产量影响的
主要因子 。 其三因子主次顺序是因素 C> A > B 。 又
表 I L : ( 2 7 ) 正 交 试 验 设 计
淤壁 A培养基 蝴 , 。雌
i.1
a r (玉 米粉 )
a Z (鼓皮 )
b
i ( s m l )
b Z ( 1 om l )
e l ( 7
。
0 )
e Z ( 5
。
0 )
户 、产、 2、 .~ 声
、了一产户 ~ , 产、 门、 产、 自、 产、 J产、 了、 `门、 产 、 ~ ~、 尹、 了、 /, 、 尸~ 、 产、 目产 、 洲、沪 、 产J 、 产、 、 z 、户了、 产、 2 、 尹、 尹、 2、 了、 尹 、 厂、 内` 气了 、~ 、 ~ 入~
八
~
八
~
了
~
护 、 户~ 、 气 ~气 、 气力八六 爪 ~八力 别、 r 卜乃八 ~
~ 、 ~一八~ 、 、 气乃`、表 3 菌 丝 体 重 量 (X) 与 培 养 液 中 剩 余 营 养 元 素 的 回 归 关 系
剩余营养元素 理论回 归方程 f o 一 0 1 r o 。 0 5
一 O 。 9 3 9 4…
一 0 一 8 2 3 0 t 二
一 0 一 9 1 9 9…
一 0 。 7 9 5 9二 *
一 O 。 6 9 6…
Y = 0
。 15 8 3 一 0 。 I OOZX
Y
= 0 。 2 4 4 一 0 。 05 6 6 X
Y
二 3 。 7 4 4 3 一 2 。 5 4 3 X
Y 二 0
。
07 6 2 一 0 。 〕`94 X
Y = I
。 3 4 6 8 一 0 。 9 7 4 4 X
C . 7 3 5
0 . 了3于
0
.
7 35
0
。
7 3 5
0 一 7 3 5
0
。
6 0 2
0
。
6 C 2
O
。
6 0 2
0
。
6 02
0
。
6 e 2
gn
NPCM
从表 2 结果看出 : 竹荪菌丝体增范量与培养液
中 C 、 N 、 P 、 M g 、 M n 各元素消耗后剩余量呈负
相关 。 如 p H 4 . 7的处理 , 菌丝体增殖量最大 , 所剩
余的元素量为最小 。 这说明菌丝体的增殖与营养元
索的消耗情况是一致的 。 回归分析结果近一步证 明
了 , 竹荪菌丝体增殖量与其对 C 、 N 、 P 、 M g 、 M n
的利用为 极显著相关 。
3 刁、 结
液体培养竹荪菌丝体 , 培养液 p H 值是影响其
增效的乖要因素之一 。 在 p H值 3 . 0一 6 . 0 范 田内菌
丝休虽都有所增殖 , 但 p H 值在 4 . 1~ 5 . 1条件下增
殖为快 , 尤其 p H 4 . 71 寸最 决。
不 同 p H对 菌丝 体营养物质的吸收和利用有狡
显著的影响 。 在 p H 4 . 1一 5 . 1 条件下 , 营养物质利
用率最高 , 菌丝体的增殖与氮 、 碳 、 磷 、 镁 、 锰等
营养元素关系极为密切 。
(主要参考文献略 )
中国 食用菌 E D IB L E F U N G I O F CH I N A V o l。 1 4, N o 。 6
表 2 草 灵 芝 菌 丝 液 体 培 养 正 交 试 验 结 果
组合 A B A C 湿重 干重
14805793万..…121二0nll八自几`-
2
2
2
2
3 1 2
。
3
2 7 3
一 0
3 9
。
3
1
1
2
2
l
l
2
2
3 0 0
。
6
2 8 4
。
7
1 5
。
9
l
l
2
2
2
2
l
1
2 9 3
。
6
2 9 1
。
7
! , 9
一
2
2 5 2
。
3
3 3 3
. 0
8 0
。
7
,` 日
l
2 5 2
。
3
3 3 3
。
0
80 一 7
l
2
2
l
l
2
2
I
3 0 3
。
6
2 8 1
。
7
2 1
。 9
12
。
9 4
2 2
。
3 0
1 1一 5 7
2 1
.
3 5
1 1 。 0 9
1 0 。 7 0
1 6 。 1 5
1 0 。 4 2
6 0
。
6
1 00 一 0
5 5
一
2
96
。
5
7 5
一 0
6 5
. 0
6 1 . 5
7 1
一 5
5 8 5
。
3
8KR
从表 2 中得知 , 各因素中最大的水平为 a 、 二 31 2 . 3 ,
b l 二 30 0
。
6
, c : = 3 3 3
.
0
, 所 以本次试验表明 , 草 灵
芝菌丝液体培养的高产组合应是 a ; b 、 c : 的组合 。
2
。
3 方差分析
表 3 方 差 分 析 表
变 异来源 平方和 自由度 均方 F
A 因素 19 3。 0 6 1 19 3 。 G 6 3 。 8 2 7
B 因素 3 1 。 6 0 1 3 1 。 6 0 0 。 6 26
A B交互作 用 。 。 45 1 0 。拓 。 。 。 09
C 因素 8 1 4 。 06 1 8 14 。 0 6 16 。 1 3 b
人 C交互 作用 8 14 。 0 6 一 8 x 4 。 0 6 】6 , 13 6
误 差 10 0 。 9 0 2 5 0 . 4 5
总 和 1 9 5 4 。 1 4 7
顺序是 C > A > B , 因此可以得出结论 , C 因素 对
实验结果有显著影响。
2
.
4 交互作用分析 为了选出交互作用的最 优 水
平 , 需列出双向表 (表 4 ) 。 其中 a l o Z最好 , 所以
A 取 a 、 , C 取 c : 。 交互作用所取水平与主效应所取
水平相一致 。
表 4 交 互 作 用 双 向 表
C 1 C Z
a 一 1 15
。
8 19 6
。
5
从方差分析结果 (表 3 ) 可看 出 , C 因素是影
响草灵芝液体培养的主要因子 (不考虑 A C 交互作
用 ) 。 人 因素与 B 因素较小 , 表明二者不是影响草
灵芝液休培养的主要因素 , 且B 因素的均方远小于
人 因素的均方 , 故影 响草灵芝液体培养因子的主次
a Z 1 36
。
5 1 36 。 5
3
,
J
、 结 与讨论
草灵芝 液体培养中 , 适当的培养基及 p H 值对
产量影响均有显著促进作用。 p H 值是影响草灵芝
液体培养产量的主要因素。 主料是玉米粉的培养基
在 p H 为 5 . 0时最适合其生长 。 本文筛选出的 高 产
组合若应用于较大规模的生产工艺时 , 尚需进一步
的验证和优选。
(参考文献 略)
S E L E C T 10 N O F M UL T I
一
F AC T O R !N L IQU ID
CU LT U RE O F G A N O D E R M A
F a n L u 1 Z卜a n g Z卜u n y i3
( IX i
’ a n
B
o tan ica l G
a r d e刀 , X i ’ a n 7 10 0 6 1 )
( 忍N o 讨hw e s t T e a e il e r U n iv e r s ity , L a n z h o u 2 30 0 7 0 )
AB S T R A C T T h e o r t h o g o n a l d e s i g n e d e x p e r im e n t o f t h r e e f a e t o r s a n d t w o
l e v e l s w a s c a r r i e d o u t i n o r d e r t o s e l e e t t h e h i g h q u a n t i t y e o m b i n a t i o n f o r
G a n o d e ,
·
m a l iq u i d e u i t u r e
。
T h e r e s u l t o f b i o s t a t i e s s h o w e s t h a t
, t h e m a i n m a 一
t e x i a l o f G a n o d ` r川 a l iq u i d e u l t u r e i s m a i z e P o w d e r , a n d t h e b e s t h i g h q u a n t i t y
e o m b i n a t i o n 15 m a i z e P o w d e r e u l t u r a l m e d i u m o f P H 5
.
0
.
长 E Y W O R D S G a n o d 口 r胡 a , L iq u i d e u l t u r e , M u l t i一 f a e t o r