全 文 ：
2010,39(3):30-31.
Subtropical Plant Science


青叶胆愈伤组织的诱导与液体继代培养
甄 莉
（黑龙江八一农垦大学 动物科技学院，黑龙江 大庆 163319）

摘 要：以青叶胆（Swertia mileensis）幼叶为外植体，在添加不同生长调节剂组合的MS培养基上进行愈伤组
织诱导。结果表明，最有效的生长调节剂组合为IAA 1.0 mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋KT 1.0 mg/L和NAA 4.0 mg/L＋
KT 2.0 mg/L＋GA3 1.0 mg/L，其诱导率分别为 96.6%和 96.0%。使用以上两种生长调节剂组合进行愈伤组织的
液体继代培养，10 d可使愈伤组织增殖率分别达 257.3%和 310.2%。
关键词：青叶胆；组织培养；愈伤组织；液体培养
Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2010.03.010
中图分类号：Q943.1 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2010)03-0030-02
Callus Induction of Swertia mileensis and Its Subculture in Liquid
ZHEN Li
(College of Animal Science & Veterinary Medicine, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, Heilongjiang China)

Abstract：The young leaves of Swertia mileensis, as explants, were cultured on MS culture medium
by adding different kinds and levels of hormones to study their callus induction. The results showed
that the most suitable phytohormone combination to induce callus were IAA1.0mg/L＋NAA 1.0
mg/L＋KT 1.0 mg/L and NAA 4.0 mg/L＋KT 2.0 mg/L＋GA3 1.0 mg/L, with the corresponding
induction rate were 96.6% and 96.0% respectively. The callus subculture in liquid by adding the two
kinds of phytohormone combination could lead the proliferation rate to 257.3% and 310.2% 10 days
later.
Key words：Swertia mileensis; tissue culture; callus; liquid culture

青叶胆（Swertia mileensis）是龙胆科獐牙菜属一年生小草本植物，分布于云南弥勒、开远县等地。
青叶胆具有清肝利胆、清热除湿的功效。民间多用于治疗急性黄疸型肝炎，具有退黄快、降谷丙转氨
酶及缩小肝肿大的作用[1,2]。然而，青叶胆由于采挖过度，加之其生态环境破坏，野生居群已不多见，
且目前尚无人工引种栽培成功的报道。为有效保护和利用我国这一特有的类群，有必要对其进行繁殖
生物学研究，特别是以组织培养为手段的人工繁殖研究。
1 材料与方法
1.1 材料
青叶胆种子由云南生物谷弥勒药业有限公司提供。
1.2 方法
1.2.1 愈伤组织诱导 将青叶胆种子用 100 mg/L GA3浸泡 15 h，然后置于发芽床上，在 28 ℃、自然光
照条件下萌发[3,4]。取萌发后的第一对幼叶为外植体，用自来水冲洗后，70%酒精浸泡 2 min，无菌水漂
洗 3 次；再用 2%次氯酸钠浸泡 15 min，无菌水漂洗 3～4 次。最后分别接种于添加不同种类和浓度生
长调节剂的MS培养基（表 1）上，25℃，24 h光照培养。
收稿日期：2010-04-27
作者简介：甄莉(1978-)，女，辽宁抚顺人，讲师，硕士，从事中草药研究。
第 3 期 甄莉：青叶胆愈伤组织的诱导与液体继代培养 ﹒31﹒
表 1 不同生长调节剂组合的愈伤组织诱导培养基[5-7]
序号 IAA(mg/L) NAA(mg/L) 6-BA(mg/L) 2,4-D (mg/L) KT(mg/L) GA3(mg/L)
1 0.2 0.1 0.1
2 1.0 1.0 0.1
3 1.0 2.0
4 1.0 1.0 1.0
5 0.4 0.5
6 4.0 2.0 1.0
7 0.5 0.05 0.1
8 0.2 3.0
9 0.2 4.0
10 0.5 3.0
11 0.5 5.0
12 1.0 2.0
13 2.0 1.0
1.2.2 愈伤组织的液体增殖培养 将生长两周的愈伤组织转移到与原培养基相同成分的液体培养基中
进行增殖培养，25 ℃，110 r/min，自然光照。
2 结果与分析
2.1 愈伤组织诱导
从接种后一周开始，外植体出现膨大，
并有愈伤组织形成；接种 20 d后，统计愈
伤组织形成情况，结果见表 2（污染除外）。
统计表明，诱导青叶胆愈伤的适宜生长调
节剂组合为培养基 4 和培养基 6，即IAA 1.0
mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋KT 1.0 mg/L和
NAA 4.0 mg/L＋KT 2.0 mg/L＋GA3 1.0
mg/L，其诱导率分别达 96.6%和 96.0%，且
愈伤组织的生长量较大，质量较好。
表 2 不同激素组合对诱导愈伤组织的影响
培养基 培养数 愈伤组织形成数 出愈率(%) 生长量
1 89 22 24.7 ＋＋
2 92 0 0 －
3 94 15 20.0 ＋＋
4 87 84 96.6 ＋＋＋
5 95 7 7.4 ＋
6 100 96 96.0 ＋＋＋
7 90 16 17.8 ＋
8 85 2 2.4 ＋＋
9 91 30 33.0 ＋＋＋
10 76 9 11.8 ＋＋
11 88 13 14.8 ＋＋
12 92 18 19.6 ＋＋
13 94 4 4.3 ＋
注：＋：少量；＋＋：绿色，质地紧密：＋＋＋；大量，表面有白色霜状组织
层；－：无
2.2 愈伤组织的液体增殖培养
液体培养 10 d 后，培养基 4 和培养基
6 的愈伤组织增殖率分别为 257.3%和
310.2%。
3 结 语
本研究为青叶胆愈伤组织培养提供了一个快速的方法，可为大规模人工无性繁殖提供参考。
青叶胆愈伤组织在液体培养过程中增殖很快，可考虑采用大规模发酵的方法获得大量愈伤组织，
进而考虑直接利用愈伤组织进行其有效成分的生产。
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