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第 1 2 卷 第 3 期
2010 年 3 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 12 No. 3
Mar . ，2010
紫菊清热片是由紫花地丁、羊耳菊、黄芩、甘草
等药材经提取加工，采用现代药物制剂手段制成的
片剂，具有疏风清热、解毒利咽之功效，适用于治疗
热毒内蕴、咽干灼热、吞咽不利、舌边尖红等症。为
了进一步为临床应用提供实验依据，本实验研究了
紫菊清热片的体外抗细菌作用。
1 实验材料
1.1 药物
取紫菊清热片干浸膏（20061016-2）加水适量，
微热溶解，用 2% 氢氧化钠调 pH 至 6~6.5，用 1.2μm
滤膜滤过，滤液再用适量灭菌生理盐水稀释，振摇
混合，配制成澄清液体，每 1mL 含生药 1g，试验前用
0.22μm 滤膜滤过，-30℃冻存，小管分装，备用。
1.2 菌种及传代
标准株：金黄色葡萄球菌（26112）、乙型溶血性
链球菌（32210）、甲型溶血性链球菌（30210）、肺炎
双球菌（29010）、流感嗜血杆菌（58534）、大肠杆菌
（44102）、变形杆菌、绿脓杆菌，以上由武汉大学医学
院免疫学教研室提供；以上菌种的临床分离菌株由
湖北省人民医院检验科细菌培养室提供。
将菌种接种于适合生长的平皿培养基中，分离
单个菌落，挑取单个菌落接种于半固体培养基，加入
无菌石蜡油 1mL，4℃保存备用。
1.3 菌种培养
取牛肉膏 0.3g，蛋白胨 1g，氯化钠 0.5g，置烧杯
中，加少量蒸馏水加热熔化后，再加蒸馏水稀释至
100mL，用 0.1mol/L 氢氧化钠溶液调 pH 值至 7.5，滤
过，分装于三角烧瓶内，灭菌 30min。将保存的金黄
色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、变形杆菌标准株和临床
分离菌株分别接种于上述培养基中，并将肺炎双球
菌、甲型链球菌、乙型溶血性链球菌标准株和临床分
离菌株菌种接种于含有 10% 绵羊血的上述培养基
中，置 37℃温箱培养 18h，用生理盐水稀释至 10-3 浓
度，冻存，小管分装，备用。
1.4 药物无菌试验
取试药用灭菌生理盐水稀释成 10-1、10-2、10-3、
10-4、10-5 浓度，各取 0.1mL 涂布接种于琼脂平板和
液体培养基中，置 37℃温箱培养 24h 后观察结果。
试验结果表明试药无菌生长。
2 实验方法与结果[1-6]
2.1 平皿法
2.1.1 牛肉膏汤琼脂培养基的制备　取牛肉膏 3g，
蛋白胨 10g，氯化钠 5g，琼脂 20g，置烧杯中，加少量
蒸馏水加热熔化后，再加蒸馏水稀释至 1000mL，用
0.1mol/L 氢氧化钠溶液调 pH 值至 7.5，滤过，分装于
三角烧瓶内，灭菌 30min，备用。
2.1.2 含药培养基的制备　 分 别 取 试 药 供 试 液
（1g/mL）10mL 至第一皿，加 40mL 已熔化并保温于
56℃的牛肉膏汤琼脂培养基，混匀，制成含药琼脂
培养基；再吸取上述牛肉膏汤琼脂 25mL 于第二皿，
加 25mL 牛肉膏汤琼脂培养基，混匀；如此等倍稀
释，制成终浓度为 200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、
1.56mg/mL（1/5、1/10、1/20、1/40、1/80、1/160、1/320、
1/640）的含药琼脂培养基。冷却凝固后，于 4℃的
冰箱中保存备用。同法制备不含药物的菌株对照和
阴性对照培养基。
2.1.3 菌株的接种与培养　按常规打孔法和平皿法
试验取各菌种分别接种于含药琼脂平板、不含药物
的菌株对照和阴性对照平板，置 37℃温箱培养 24h
后，观察不同菌种在不同浓度的药物平板上的生
紫菊清热片的体外抗菌作用研究
朱祖成
（湖北民族学院医学院，湖北 恩施 445000）
摘 要：目的：研究紫菊清热片的体外抗菌作用。方法：采用平皿法和液体稀释法对紫菊清热片进行体外抗菌
实验研究。结果：紫菊清热片对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流
感嗜血杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌标准株和临床分离菌株均有不同程度的抑制作用。结论：紫菊清热片在体外具有
良好的抗菌作用。
关键词：紫菊清热片；药效学；菌株；体外抗菌实验
中图分类号：R222.19 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2010) 03- 0167- 03
收稿日期：2009-09-07
作者简介：朱祖成（1975-），男，湖北恩施人，讲师，学士，研究方向：病理与病理生理学。
Antibacterial Investigation of Zijuqingre Troche in Vitro
ZHU Zu-cheng
（Medical School of Hubei Institute for Nationalities, Enshi 445000, Hubei, China）
Abstract：Objective: To study the effects of Zijuqingre Troche against bacteria in vitro. Methods：By
taking the method of dish culture and the method of serial dilution. Results：Zijuqingre Troche have certain
inhibition on the type strain and clinical-separated strain of Staphylococcus aureus，Escherichia colt，alpha
hemolytic streptococcus，beta hemolytic streptococcus，Diplococcus lanceolatus，Hemophilus influenza，
Pseudomonas aeruginosa，Bacillus proteus. Conclusion：The antibacterial action of Zijuqingre Troche in
vitro is remarkable.
Key words：Zijuqingre Troche; pharmacodynamics; strain; antibacterial test in vitro
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2010.03.169.zhuzch.079
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长情况，细菌不生长的最低浓度即为药物对该菌的
MIC，结果见表 1~2。
表 1 对标准菌株的抑菌（MIC）试验结果
菌 株 抑菌环直径 最低抑菌浓度 药物稀释度 （mm） （MIC, mg/mL）
金黄色葡萄球菌 15.8 12.5 1：80
甲型链球菌 11.9 12.5 1：80
乙型链球菌 10.2 25.0 1：40
肺炎双球菌 12.6 12.5 1：80
流感嗜血杆菌 13.2 6.25 1：160
大肠杆菌 9.5 50.0 1：20
绿脓杆菌 10.7 25.0 1：40
变形杆菌 11.4 25.0 1：40
表 2 对临床菌株的抑菌（MIC）试验结果
菌 株 抑菌环直径 最低抑菌浓度 药物稀释度 （mm） （MIC, mg/mL）
金黄色葡萄球菌 15.3 12.5 1：80
甲型链球菌 17.6 6.25 1：160
乙型链球菌 9.9 25.0 1：40
肺炎双球菌 12.8 12.5 1：80
流感嗜血杆菌 13.8 12.5 1：80
大肠杆菌 9.0 50.0 1：20
绿脓杆菌 12.0 25.0 1：40
变形杆菌 10.7 25.0 1：40
试验结果表明，紫菊清热片浸膏对金黄色葡萄
球菌、大肠杆菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链
球菌、肺炎双球菌、流感嗜血杆菌、绿脓杆菌、变形杆
菌标准株和临床分离菌株均有不同程度的抑制作
用，其中对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、肺
炎双球菌和流感嗜血杆菌的抑制作用较强。
2.2 液体稀释法
2.2.1 牛肉膏汤液体培养基的制备 取牛肉膏 3g，
蛋白胨 10g，氯化钠 5g，置烧杯中，加少量蒸馏水加
热熔化后，再加蒸馏水稀释至 1000mL，用 0.1mol/L
氢氧化钠溶液调 pH 值至 7.5，滤过，分装于三角烧瓶
内，灭菌 30min，备用。
2.2.2 含药液体培养基的制备 分别取试药的无
菌供试液（1g/mL）10mL 至第一皿，加 40mL 已熔化
并保温于 56℃的牛肉膏汤琼脂培养基，混匀，制成
含药琼脂培养基；再吸取上述牛肉膏汤琼脂 25mL
于第二皿，加 25mL 牛肉膏汤琼脂培养基，混匀；如
此等倍稀释，制成终浓度为 200、100、50、25、12.5、
6.25、3.12、1.56mg/mL（1/5、1/10、1/20、1/40、1/80、
1/160、1/320、1/640）的含药液体培养基。
2.2.3 菌种的接种与培养 取小试管 10 支，1~8
分别加入上述各浓度药物液体培养基 1mL，再加
入 10-3 稀释的新鲜菌液 0.1mL; 同法制备试药对照
（不加菌液）和菌株对照（加不含药物的液体培养
基）。置 37℃温箱培养 24h，观察细菌生长情况，
以不显示混浊、完全无菌生长的试药浓度为药物
对该菌株的最低抑菌浓度（MIC）；选出 MIC 试验
中无菌生长的培养基管，用接种环取一环接种于
不含试药的琼脂培养基上，置 37℃温箱培养 18h，
观察细菌生长情况，完全无菌生长的试药浓度为
药物对该菌株的最低杀菌浓度（MBC），结果见表
3~6。
试验结果表明，紫菊清热片浸膏对金黄色葡萄
球菌、大肠杆菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链
球菌、肺炎双球菌、流感嗜血杆菌、绿脓杆菌、变形杆
菌标准株和临床分离菌株均有不同程度的杀灭作
用，其中对大肠杆菌的作用较弱。
表 3 对标准菌株的抑菌（MIC）试验结果
菌 株 药物稀释度（mg/mL） 试药 菌株 200 100 50 25 12.5 6.25 3.12 1.56 对照 对照
金黄色葡萄球菌 - - - - - + + + - +
甲型链球菌 - - - - - - + + - +
乙型链球菌 - - - - - + + + - +
肺炎双球菌 - - - - - - + + - +
流感嗜血杆菌 - - - - - - + + - +
大肠杆菌 - - - + + + + + - +
绿脓杆菌 - - - - + + + + - +
变形杆菌 - - - - - + + + - +
表 4 对标准菌株的抗菌试验结果
菌 株 最低抑菌浓度 药物稀释度 最低杀菌浓度 药物稀释度 （MIC, mg/mL） （MBC, mg/mL）
金黄色葡萄球菌 11.5 1：80 25.0 1：40
甲型链球菌 5.25 1：160 12.5 1：80
乙型链球菌 12.5 1：80 25.0 1：40
肺炎双球菌 6.25 1：80 25.0 1：40
流感嗜血杆菌 6.50 1：160 12.5 1：80
大肠杆菌 50.0 1：20 100.0 1：10
绿脓杆菌 25.0 1：40 50.0 1：20
变形杆菌 12.5 1：80 25.0 1：40
表 5 对临床菌株的抑菌（MIC）试验结果
菌 株 药物稀释度（mg/mL） 试药 菌株 200 100 50 25 12.5 6.25 3.12 1.56 对照 对照
金黄色葡萄球菌 - - - - - + + + - +
甲型链球菌 - - - - - - + + - +
乙型链球菌 - - - - - + + + - +
肺炎双球菌 - - - - - + + + - +
流感嗜血杆菌 - - - - - - + + - +
大肠杆菌 - - + + + + + + - +
绿脓杆菌 - - - + + + + + - +
变形杆菌 - - - - + + + + - +
表 6 对临床菌株的抗菌试验结果
菌 株 最低抑菌浓度 药物稀释度 最低杀菌浓度 药物稀释度 （MIC, mg/mL） （MBC, mg/mL）
金黄色葡萄球菌 12.5 1：80 25.0 1：40
甲型链球菌 6.25 1：160 12.5 1：80
乙型链球菌 12.5 1：80 25.0 1：40
肺炎双球菌 12.5 1：80 25.0 1：40
流感嗜血杆菌 6.25 1：160 12.5 1：80
大肠杆菌 100.0 1：10 100.0 1：10
绿脓杆菌 50.0 1：20 50.0 1：20
变形杆菌 25.0 1：40 25.0 1：40
3 讨 论
抗生素的应用使人类许多严重的细菌感染性
疾病得到有效控制。然而 , 由于抗生素的不合理使
用导致了耐药菌株的增加 , 降低了现有抗生素的效
率。中药几千年来为人类的健康作出了重大贡献 ,
在预防和控制细菌性感染疾病方面发挥了积极作
用。由于中药的特殊性 , 细菌较少对中药产生耐药 ,
研究和开发抗菌中药对解决耐药菌株的产生和抗生
素短缺问题具有重要意义 [7]。
本实验选用了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、甲
型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎双球菌、
流感嗜血杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌 8 种的标准株和
临床分离菌株，采用平皿法和液体稀释法对紫菊清
热片进行了体外抗菌实验。该方法简便经济，是很
便捷的初步筛选方法。但抗菌试验的结果易受外界
因素影响，例如药物的种类、颜色、制备方法、药物浓
度、试验菌的种类、培养的温度和时间等。因此，菊
紫菊清热片物还需进一步通过动物体内实验来证明
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消 癌 平 注 射 液 是 由 萝 藦 科 植 物 通 关 藤
Marsdenia Tenacissima （Roxb.） Wight et Arn 的 干
燥藤茎经水提醇沉制成的制剂 , 具抗癌、消炎的作
用 [1]。主要用于治疗食道癌、胃癌、肺癌、肝癌等多
种恶性肿瘤 [2]。通关藤药材中所含成分复杂 , 且各
种成分的含量均较低，文献中报道通关藤药材中的
主要成分为多糖、皂苷、酚酸性物质、氨基酸、香豆素
及内酯类化合物 [3-6]。消癌平注射液中通关藤的主
要成分为水溶性成分，根据中药注射剂指纹图谱研
究的技术要求 , 采用 HPLC 方法测定了中药通关藤
及其制剂的指纹图谱。
1 实验与方法
1.1 试剂
甲醇（Fisher 色谱纯），磷酸氢二钠（分析纯），磷
酸（分析纯），重蒸水。
1.2 样品
通关藤药材 , 产自云南 , 秋后采收；中间体（水
提醇沉的上清液 , 浓缩而得）；消癌平注射液，自
制，批 号 分 别 为 050301、050302、050303、050401、
050402、050403、050501、050502、050503、050504；南
京圣和药业有限公司生产，批号分别为 200409241、
200412151、200412231。
1.3 仪器
Dionex Summit 高 效 液 相 色 谱 仪（含 在 线 真 空
脱气机，P680A 低压四元梯度泵，ASI-100 自动进
样器，TCC-100 柱温箱，四通道紫外 - 可见检测器，
CHROMELEONTM 色谱信息管理软件），Shim-pack
VP-ODS 柱（150mm×4.6mm，5μm）。
1.4 测定方法
1.4.1 供试品溶液的制备 （1）药材供试品溶液的
消癌平注射液指纹图谱研究
朱金英 1，聂 晶 2
（1.吴江市第一人民医院，江苏 吴江 215200；2.湖北省药品检验所中药室，湖北 武汉 430064）
摘 要：目的: 建立消癌平注射液的HPLC指纹图谱。方法: 选择Shim-pack VP-ODS柱, 流动相为A：50mM
磷酸盐缓冲液（磷酸调pH=3）；B：甲醇；流速1mL/min，检测波长330nm，参比波长390nm，柱温25℃，进样量20μL，
记录时间为70min。梯度洗脱程序为，0min，B为5％；10min，B为5％；30min，B为20％；70min，B为45％。结果:
根据13批次供试品的检测结果，选择了各批样品共有的、峰面积较大且保留时间以及峰面积相对稳定的8个色谱峰
作为消癌平注射液指纹图谱的共有峰，其峰面积之和占总峰面积大于95%。测定了通关藤药材、中间体及注射液的
指纹图谱, 结果表明消癌平注射液与其中间体及通关藤药材之间有较好的相关性。结论：该方法简单可靠, 可作为
消癌平注射液的质量控制指标。
关键词：消癌平注射液；指纹图谱；HPLC
中图分类号：R2-03 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2010) 03- 0169- 02
收稿日期：2009-09-14
作者简介：朱金英（1967-），女，江苏吴江人，副主任中药师，学士，研究方向：医院中药学。
Research of Fingerprint Chromatogram of Xiaoaiping Injection by HPLC
ZHU Jin-ying1，NIE Jing2
（1. First Peoples Hospital of Wujiang，Wujiang 215200，Jiangsu，China；2.Department of Traditional
Chinese Medicine，Hubei Provincial Institute of Drug Contorl，Wuhan 430064，Hubei，China）
Abstract：Objective: To establish the fingerprint chromatogram of Xiaoaiping Injection (Caulis
Marsdeniae Tenacissimae) by HPLC. Methods: The HPLC method was established by Shim-pack VP-ODS
column, with gradient elution by mobile phase A: 50mM phosphate buffer (pH=3); B: methanol. The detection
wavelength was set at 330nm with reference wavelength 390nm. Results: According to the results of thirteen
lots sample analysis, eight peaks were relatively stable and marked on the HPLC fingerprint of Xiaoaiping
Injection. The sum of the eight peaks area was over 95 percent of the total peak area. And the fingerprint
chromatogram of injection was traceable to intermediate and medicinal materials. Conclusion: The method is
simple with good reproducibility and can be used as a quality control method for Xiaoaiping Injection.
Key words：Xiaoaiping injection; fingerprint chromatogram; HPLC
其抗菌作用，为紫菊清热片的开发奠定基础。◆
参考文献
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