全 文 ：［收稿日期］ 20130413(005)
［基金项目］ 贵州省中药现代化项目(黔科合中药字［2010］
5029);教育部春晖计划项目(Z2011036) ;贵阳市
科技计划项目(2012204)
［第一作者］ 张龙，硕士研究生，从事天然有机化学研究，Tel:
13765823402，E-mail:281824960@ qq． com
［通讯作者］ * 张前军，教授，从事天然有机化学研究，Tel:
13007880021，E-mail:qianjunzhang@ 126． com
波叶山蚂蝗α-葡萄糖苷酶抑制活性研究
张龙1，2，王俊霞3，顾雪竹4，张前军1*
(1. 贵州大学化学与化工学院，贵阳 550025;2. 贵州省产品质量监督检验院，贵阳 550002;
3. 河南大学中药研究所，河南 开封 475004;4. 中国中医科学院中药研究所，北京 100700)
［摘要］ 目的:评价波叶山蚂蝗提取物对 α-葡萄糖苷酶的抑制活性。方法:通过建立体外 α-葡萄糖苷酶抑制模型，对波
叶山蚂蝗石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取物进行活性筛选。结果:波叶山蚂蝗 3个提取物均有较好的 α-葡萄糖酶抑制作用，抑制
活性均远远大于阳性对照阿卡波糖 (IC50 = 1 103. 01 mg·L
－1)，其中以石油醚部位 (DSPE)活性最好 (IC50 = 45. 16 mg·L
－1)。乙
酸乙酯部位 (DSEA)和正丁醇部位 (DSME)对 α-葡萄糖苷酶抑制活性呈显浓度依赖性。结论:波叶山蚂蝗 3 个提取部位有
较显著的 α-葡萄糖苷酶抑制活性，具有开发应用的价值。
［关键词］ 波叶山蚂蝗;α-葡萄糖苷酶;抑制活性
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)07-0070-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfix． 2014070070
α-Glucosidase Inhibitory Activity of Extracts from Desmodium sequax
ZHANG Long1，2，WANG Jun-xia3，GU Xue-zhu4，ZHANG Qian-jun1*
(1. School of Chemistry and Chemical Engineer of Guizhou University，Guiyang 550025，China;
2. Institution of Supervision and Inspection Product Quality of Guizhou Province，Guiyang 550002，China;
3. Institute of Chinese Materia Medica，Pharmaceutical College，Henan University，Kaifeng 475004，China;
4. Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China)
［Abstract］ Objective:To evaluate α-glucosidase inhibitory activity of extracts from Desmodium sequax．
Method:By establishing α-glucosidase inhibitory model in vitro，the activity of petroleum ether extract，ethyl
acetate extract and methanol extract from D． sequax was screened． Ｒesult:Three extracts from D． sequax showed
good inhibitory activity，which showed far greater activity than that of acarbose (IC50 =1 103. 01 mg·L
－1)． Petroleum
ether extract (DSPE)had the highest inhibitor activity (IC50 = 45. 16 mg·L
－1)． α-glucosidase inhibitory activity
of ethyl acetate extract (DSEA)and methanol extract (DCME)had concentration-dependent． Conclusion:Three
extracts had more significant α-glucosidase inhibitory activity and great development and application value．
［Key words］ Desmodium sequax;α-glucosidase;inhibitory activity
豆科山蚂蝗属植物为灌木、亚灌木或草本，全世
界约 350 种，遍布世界各地，盛产于热带和亚热带地
区，我国约有 27 种，分布于全国，多集中于西南部至
东南部;贵州省有 12 种，民间多作药用［1］。山蚂蝗
属植物性味甘、苦、凉，具有祛风利湿、活血消肿、解
毒止痛、清热利尿等功效，民间主要用于治疗胃痛、
毒蛇咬伤、小儿疳积、肝炎、乳腺炎、腮腺炎、尿道炎、
淋巴结炎、创伤、痢疾等疾病。山蚂蝗属植物在抗氧
化、预防泌尿系统结石、保肝、抗炎镇痛、治疗心脑血
管疾病、解痉等方面有很好的生物活性［2］。
目前，国内外研究者已从山蚂蝗属植物广金钱
草、长叶排钱草、小槐花、南美山蚂蝗、饿蚂蝗、D．
alatum、葫芦茶、排钱草、台湾山蚂蝗、椴叶山蚂蝗、
D． canum、银 叶 山 蚂 蝗、D． adhaesivum、D．
·07·
第 20 卷第 7 期
2014 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 7
Apr．，2014
sandwicense、大叶山蚂蝗、三点金、大叶拿身草、小叶
三点金中分离得到多种化合物，主要包括挥发油、烷
烃类、酸类、萜类、甾体、黄酮类、生物碱类等［3-4］。
其生物活性主要有抗氧化、保肝、抗炎等［5-7］。
α-葡萄糖苷酶抑制剂可竞争性抑制小肠内α-葡
萄糖苷酶的活性，使淀粉类分解为葡萄糖的速度减
慢，从而减缓肠道内葡萄糖的吸收，可以明显降低 2
型糖尿病人餐后血糖水平，减少糖尿病并发症的发
生。α-葡萄糖苷酶抑制剂由于其独特的优势，目前
已被广泛用于糖尿病及其并发症的防治，临床上主
要使用阿卡波糖和伏格列波糖等。
波叶山蚂蝗为豆科山蚂蝗属植物，又名瓦子草、
野豆子、牛巴嘴、山蚂蝗、过路黄、檀草、长波叶山蚂
蝗，分布四川、湖北、贵州、云南、台湾等地，味微苦、
涩，性平，具有清热泻火、活血祛瘀、敛疮之功效，主
治风热目赤、胞衣不下、血瘀经闭、烧伤等［8］。山蚂
蝗属植物具有良好生物活性，本课题组也持续对山
蚂蝗属植物进行了系统的化学与生物活性的筛
选［9-14］。为了综合开发利用波叶山蚂蝗植物，作者
对波叶山蚂蝗的化学成分及生物活性进行系统研
究，从波叶山蚂蝗植物分离得到的化合物主要有烃
类、酸类、萜类、甾体、黄酮类。通过建立体外 α-葡
萄糖苷酶抑制模型，并对波叶山蚂蝗石油醚、乙酸乙
酯、正丁醇提取物进行活性筛选。
1 材料
波叶山蚂蝗于 2010 年 9 月采自贵州省安顺市，
经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为豆科山蚂蝗属植
物波叶山蚂蝗 Desmodium sequax Wall． 标本存于贵
州大学化学与化工学院化学系。
α-葡萄糖苷酶 (α-glucosidase，EC 3. 2. 1. 20) ，
4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-α-D-
glucopyranoside，PNPG，026 K1516) ，阿 卡 波 糖
(Acarbose，Lot 16869) ，二甲亚砜 (DMSO)均购自
美国 Sigma公司，其他试剂均为分析醇。
Multiskan MK3 型酶标仪 (美国 Thermo Electron
公司) ，LＲH-150 型恒温培养箱 (上海一恒科技有限
公司) ，DELTA 320 型 pH计 (美国 Mettler-Toledo公
司) ，电子天平 (美国 Mettler-Toledo 公司) ，TGL-16
型高速离心机 (江苏金坛市中大仪器厂)。
2 方法
2. 1 波叶山蚂蝗浸膏的提取 将波叶山蚂蝗全草
阴干，粉碎，用 75%的乙醇室温下浸泡 3 次，每次 7
d，合并提取滤液后浓缩，得到提取总浸膏。总浸膏
分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，
减压浓缩得到波叶山蚂蝗石油醚部位 (DSPE)、乙
酸乙酯部位 (DSEA)、正丁醇部位 (DSME)。
2. 2 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
2. 2. 1 标准曲线制作 根据采用的反应体系，用磷
酸缓冲液(pH 6. 8)配制 1 000 μmol·L －1PNP，稀释
成 400，300，200，150，100，50，25，5，0 μmol· L －1。
分别取 7 种不同质量浓度的 PNP溶液各 160 μL，加
入 0. 2 mol·L －1 Na2CO3 溶液 80 μL，混匀，在 405 nm
下测定 A值，测 3 组取平均值。以 A值为纵坐标，对
硝基苯酚浓度为横坐标，做出标准曲线。
2. 2. 2 α-葡萄糖苷酶活力测定 112 μL 磷酸钾缓
冲液(pH 6. 8) ，加入 20 μL 0. 2 U·mL －1 α-葡萄糖苷
酶和8 μL DMSO，37 ℃恒温15 min后加入2. 5 mmol·
L －1 PNPG 20 μL，摇匀，37 ℃恒温反应 15 min。再加
入 80 μL 0. 2 mol·L －1的 Na2CO3 溶液，于 405 nm波
长下测 A值。
酶活力单位定义:37 ℃、pH 6. 8 条件下，每分钟
水解底物所产生 1 μmol对硝基苯酚的酶量，规定为
一个酶活力单位(U)［15］。
2. 2. 3 检测方法 将波叶山蚂蝗各提取物以
DMSO溶解，并存储于 4 ℃冰箱中。以张丽等［16-18］
建立的 96 微孔板筛选方法，405 nm处检测其 A 值。
同时做相同体系下的样品空白组，不加样品、酶与底
物的空白对照组、不加样品的阴性对照组和以阿卡
波糖为抑制剂的阳性对照组。并用 Origin软件求出
相应的 IC50值。
酶活性抑制率 = (A 样品阴性 － A 样品空白)/(A 阴
性 － A空白)× 100%
3 结果与讨论
3. 1 波叶山蚂蝗不同提取部位 α-葡萄糖苷酶抑制
活性比较分析 图 1 显示，初筛时，在同一质量浓度
下(1 500 mg·L －1) ，波叶山蚂蝗 3个提取物 α-葡萄糖
苷酶抑制率从大到小依次为乙酸乙酯部位 ＞石油醚
部位 ＞正丁醇部位，且初筛抑制率均高于阳性对照阿
卡波糖。但是，初筛时抑制率大其 IC50值不一定大，
仅从某一浓度的抑制率评价其活性并不可靠，应结合
IC50值综合判断。为进一步研究抑制活性，对提取物
的初筛浓度依次对半稀释，进行 IC50计算。表 1 显
示，3 个提取物中，石油醚部位 (IC50 = 45. 14 mg·
L －1)α-葡萄糖苷酶抑制活性最高，其次为其次为乙
酸乙酯部位 (IC50 = 92. 77 mg·L
－1)和正丁醇部位
(IC50 = 175. 6 mg·L
－1) ，均远远高于阳性对照阿卡
波糖(IC50 = 1 103. 01 mg·L
－1) ，表明波叶山蚂蝗各
提取物均具有好的 α-葡萄糖苷酶抑制活性。
·17·
张龙，等:波叶山蚂蝗 α-葡萄糖苷酶抑制活性研究
图 1 波叶山蚂蝗不同提取部位 α-糖苷酶初筛抑制活性
表 1 波叶山蚂蝗提取部位 α-葡萄糖苷酶抑制活性
提取物
抑制率
/%
IC50
/mg·L －1
石油醚部位 (DSPE) 99. 48 45. 14
乙酸乙酯部位 (DSEA) 100. 88 92. 77
甲醇部位 (DSME) 98. 77 175. 6
阿卡波糖 (Acarbose) 57. 26 1 103. 01
注:阿卡波糖为阳性对照，初筛质量浓度均为 1 500 mg·L －1。
3. 2 提取物浓度对 α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响
图 2 显示，DSEA 和 DSME 对 α-葡萄糖苷酶抑制
活性均随质量浓度增加而增加，呈浓度依赖性。
DSPE对 α-葡萄糖苷酶抑制活性较高，质量浓度 ＜
0. 187 5 mg·L －1时，抑制率随浓度的增大而呈线性
增加 (浓度与其清除率的相关系数为 0. 945 7) ，当
质量浓度 ＞ 0. 187 5 mg·L －1，再增加提取物质量浓
度抑制活性缓慢增加。
图 2 提取物浓度对 α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响
4 结论
本文采用体外 α-葡萄糖苷酶体外抑制模型对
波叶山蚂蝗提取物 α-葡萄糖苷酶抑制活性进行研
究，发现波叶山蚂蝗提取物均具有一定的 α-葡萄糖
苷酶抑制活性，且提取物的活性高于阳性对照阿卡
波糖。另外，DSEA 和 DSME 对 α-葡萄糖苷酶抑制
活性均随浓度增加而增加，呈浓度依赖性。DSPE
对 α-葡萄糖苷酶抑制活性较高。
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［责任编辑 蔡仲德］
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第 20 卷第 7 期
2014 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 7
Apr．，2014