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延边地产传统朝药材万年蒿的高效液相指纹图谱



全 文 :延边大学医学学报 2011年9月 第34卷 第3期
[收稿日期] 2011-06-22
*[通信作者] 姜英子(1964—),女(朝鲜族),教授,硕士,
研究方向为朝药质量标准化.
延边地产传统朝药材万年蒿的高效液相指纹图谱
徐影,朴光春,姜英子*
(延边大学药学院,吉林 延吉133002)
[摘要]  [目的]建立延边地产传统朝药材万年蒿的化学成分指纹图谱,并进行延边不同产地万年蒿的
化学成分指纹图谱进行分析,为万年蒿的质量控制及品种鉴定提供依据.[方法]采用高效液相色谱法,
应用Diamonsil C18色谱柱(250.0mm×4.6mm,5m),流动相为甲醇-4mL/L磷酸水溶液,流动速度为
1.0 mL/min,检测波长为360nm,柱温为35℃,采用线性梯度洗脱.[结果]对延边地产9批万年蒿药
材化学成分的指纹图谱进行分析,共检出16个分离度大于1.0的共有峰.[结论]高效液相色谱法简
便、快速,可作为控制、鉴定与评价传统朝药材万年蒿质量的有效方法.
[关键词] 万年蒿;指纹图谱;色谱法,高压液相
[中图分类号] R 284   [文献标志码] A   [文章编号] 1000-1824(2011)03-0183-04
HPLC fingerprint of the Artemisia sacrorumledeb of Korean traditional
crude herbs in Yanbian
XU Ying,PIAO Guang-chun,JIANG Ying-zi*
(Yanbian University College of Pharmacy,Yanji 133002,Jilin,China)
ABSTRACT:OBJECTIVETo study the chemical composition of the fingerprint of the Artemisiia sacrorum
ledeb of korean traditional crude herbs in Yanbian,and to analyze the chemical composition of the fingerprint
of the Artemisiia sacrorumledeb in different habitats of Yanbian toprovide the basis of quality control and
identification of variety.METHODS The high performance liquid chromatography(HPLC)was used,
chromatographic column was Diamonsil C18(250.0mm×4.6mm,5μm),mobile phase was methanol:
phosphoric acid aqueous solution in gradient elution,the flow rate was 1.0 mL/min,the detecting
wavelength was at 360nm,and the column temperature was 35℃.RESULTS1.0of commom peaks over 16
of separating dgree were al detected with analysis the fingerprint by HPLC for 9of batchs Artemisiia
sacrorumledeb from other different places of Yanbian.CONCLUSION The HPLC is simple,quick as
a effective method for controling,identifying and evaluating the quality of Artemisiia sacrorumledeb.
Key words:Artemisia sacrorum ledeb;fingerprint;chromatography,high pressure liquid
  万年蒿系菊科植物万年蒿(Artemisiia sacro-
rum Ledeb.)的干燥地上部分.作为朝鲜族民间习
用传统朝药材,在《东医宝鉴》等朝鲜族民族医药古
书籍文献中均有记载,民间常用于治疗急慢性肝炎、
小儿惊风、退热、杀虫、阑尾炎及急慢性胃肠炎.目
前,在延边地区仍有万年蒿膏剂在民间出售,用于治
疗和预防急慢性肝炎及妇女内寒等[1].万年蒿的基
源清楚,用药历史悠久,资源蕴藏丰富.该药材是首
批纳入国家三级标准《吉林省药品标准》(1977年
版)的延边地产朝药材.朴光春等[2]对万年蒿中多
糖、微量元素和维生素的含量进行了分析,张德志
等[3-5]进行了物质基础研究,但有关万年蒿的指纹图
谱研究尚未见报道.指纹图谱是新的药材质量控制
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Journal of Medical Science Yanbian University Sep.2011 Vol.34 No.3
及品种鉴定技术,本实验选择延边地产9批万年蒿
药材样品,对其化学成分进行了指纹图测定和相似
度计算,旨在为控制、鉴定与评价传统朝药材万年蒿
的质量提供科学依据.
1 材料
1.1 仪器与试剂 LC-10A高效液相色谱仪及
SPD-10A紫外检测器均为日本岛津公司产品;Lcso-
lution色谱工作站;Diamonsil C18色谱柱(250.0mm
×4.6mm,5m)为迪马产品;BSA-224S电子分析
天平为德国赛多利斯有限公司产品;AS3120A型超
声波清洗脱气器为奥特赛思仪器有限公司产品.东
莨菪内酯、槲皮素及木犀草素对照品均购自中国药
品生物制品检定所,批号分别为110768-200504,
100081-200907,111520-200504;甲醇为色谱醇;水
为超纯水;其余试剂均为分析纯.
1.2 药材来源 9批万年蒿药材样品采集自延边
朝鲜族自治州境内8个县市,经延边大学药学院生
药学教研室吕惠子副教授鉴定为万年蒿(Artemisi-
ia sacrorum Ledeb.)的干燥地上部分;万年蒿标准
药材由延边民族医药研究所提供;见表1.
表1 药材产地及品种
编号 品种 样品产地  采集时间
S1
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
安图县
永庆乡 2010-05
S2
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
和龙县
土山子 2010-08
S3
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
敦化市
官地镇 2010-10
S4
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
珲春市
密江镇 2010-11
S5
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
延吉市
台岩乡 2010-06
S6
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
龙井市
铜佛寺镇 2010-08
S7
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
图们市
苇子沟镇 2010-09
S8
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
汪清县
依兰镇 2010-07
S9
万年蒿
(Artemisiia sacrorum Ledeb.)
延边民族医药
研究所提供 
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称定东莨菪内酯、槲
皮素及木犀草素对照品适量,置于同一10mL容量
瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,定容,制备成质量浓
度分别为42.4,20.8,4.8g/L的溶液,经0.45m
微孔滤膜滤过,备用.
2.2 供试品溶液的制备 取标准药材万年蒿粉末
(过40目筛)约1.0g,精密称定,置于圆底烧瓶中加
入甲醇-250mL/L盐酸溶液(4∶1)25mL,称定质
量,加热回流1h,取出,冷却至室温,用上述混合溶
液补足减失质量,摇匀,过滤,取续滤液,绿叶旋转减
压蒸干,用甲醇定容至25mL,用0.45m微孔滤膜
滤过,即得.
2.3 色谱条件 Diamonsil C18(250.0mm×4.6
mm,5m);流动相A为甲醇,B为4mL/L磷酸水
溶液(A+B=100%);流动速度为1.0mL/min;柱
温为35℃;检测波长为360nm;进样量为10μL.二
元线性梯度洗脱,洗脱时间程序为开始时为41%
A,10min时为55%A,30~35min时为60%A.色谱
记录时间为35min.
2.4 检测波长的选择 利用PDA检测器对190~
400nm进行全波段扫描,每10nm提取1次色谱
图,综合考虑峰的数目、峰形和面积,确定检测波长
为360nm.建立万年蒿的指纹图谱.
2.5 方法学考察
2.5.1 精密度试验 精密称取标准药材万年蒿粉
末,按照2.2项下方法制备供试品溶液,依照2.3项
下色谱条件进行分析,连续进样6次,进样量为
10L,东莨菪内酯、槲皮素和木犀草素的峰面积比
值RSD(n=6)分别为0.38%,0.95%,0.95%,说
明仪器精密度良好;分别对共有峰的相对保留时间
及峰面积比值进行考察,结果示共有峰相对保留时
间RSD为3.76%,峰面积比值RSD 小于1.26%,
符合特定指纹图谱要求.
2.5.2 重复性实验 精密称取标准药材万年蒿粉
末样品5份,按照2.2项下方法制备供试品溶液,依
据2.3项下色谱条件进行分析,进样量为10L,分
别对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考
察,结果见各共有峰相对保留时间 RSD 小于
0.72%,峰面积比值RSD小于0.91%,符合特定指
纹图谱分析要求.
2.5.3 稳定性实验 精密称取标准药材万年蒿粉
末样品5份,按照2.2项下方法制备供试品溶液,依
据2.3项下色谱条件进行分析,分别于0,2,4,6,8,
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延边大学医学学报 2011年9月 第34卷 第3期
10,12,24h进样10L,分别对共有峰的相对保留
时间及峰面积比值进行考察,结果各共有峰相对保
留时间 RSD 小于0.55%,峰面积比值 RSD 小于
1.83%,表明供试品溶液在24h内稳定,符合特定
指纹图谱分析要求.
2.6 指纹图谱的相似性评价
2.6.1 共有峰及东莨菪内酯、槲皮素和木犀草素峰
的标定 依照2.3项下色谱条件对1~9批供试品
进样分析,记录色谱图,确定分离度大于1.0的共有
峰为16个,其中S9号样品的色谱图见图1.通过保
留时间定性可知,1,2,3峰分别为东莨菪内酯、槲皮
素和木犀草素的色谱峰,其中东莨菪内酯的色谱峰
含量较高,且峰形好,作为参照峰,计算各峰对它的
相对保留时间及相对峰面积,结果见表2及表3.
2.6.2 相似度的计算 利用《中国药典》“中药色谱
指纹图谱相似度评价系统2004A版”[6],将1~9批
供试品药材图谱数据导入,经多点校正和数据匹配,
以中位数生成指纹图谱,建立共有模式,见图2.
2.6.3 不同产地之间的相似度比较 依照2.3项
下色谱条件分别对延边8个县市的万年蒿供试品进
行分析,记录色谱图,利用《中国药典》“中药色谱指
纹图谱相似度评价系统2004B版”,将1~9批万年
蒿药材图谱生成的对照谱图导入,按照夹角余弦法
计算延边不同产地样品与共有模式间的相似度,并
进行比较.结果表明,延边不同产地万年蒿药材的相
似度分别为 0.900,0.917,0.917,0.916,0.977,
0.987,0.973,0.900.
A:万年蒿标准对照药材;B:混合对照品溶液;1:东莨
菪内酯;2:槲皮素;3:木犀草素.
图1 万年蒿药材指纹图谱及东莨菪内酯、槲皮素和
木犀草素标准品色谱图
表2 9批万年蒿指纹图谱中共有指纹峰的相对保留时间


各样品相对保留时间/min
1  2  3  4  5  6  7  8  9
平均 RSD/%
1  0.411  0.409  0.398  0.429  0.401  0.405  0.382  0.368  0.20  0.403  4.614
2  0.474  0.471  0.464  0.476  0.461  0.478  0.443  0.457  0.491  0.468  2.967
3  0.554  0.549  0.541  0.556  0.594  0.572  0.572  0.557  0.633  0.570  4.984
4  0.658  0.650  0.635  0.657  0.654  0.721  0.633  0.608  0.685  0.656  4.924
5  0.814  0.818  0.829  0.780  0.831  0.842  0.768  0.773  0.847  0.811  3.715
6  0.875  0.867  0.861  0.877  0.898  0.913  0.832  0.829  0.972  0.880  4.967
7  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  0.000
8  1.080  1.087  1.088  1.085  1.084  1.128  1.103  1.074  1.132  1.096  1.908
9  1.217  1.149  1.203  1.221  1.139  1.288  1.196  1.111  1.189  1.190  4.409
10  1.342  1.311  1.330  1.313  1.362  1.419  1.399  1.521  1.420  1.380  4.928
11  1.516  1.503  1.503  1.523  1.489  1.590  1.473  1.452  1.511  1.507  2.543
12  1.741  1.732  1.735  1.770  1.731  1.764  1.625  1.615  1.740  1.717  3.299
13  1.893  1.846  1.848  1.865  1.836  1.883  1.734  1.725  1.879  1.834  3.399
14  2.145  2.160  2.164  2.186  2.156  2.272  2.092  2.081  2.288  2.172  3.238
15  2.396  2.422  2.425  2.452  2.408  2.555  2.374  2.361  2.588  2.442  3.218
16  3.203  3.158  3.181  3.241  3.166  3.302  3.038  3.076  3.379  3.194  3.292
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表3 9批万年蒿指纹图谱中共有指纹峰的峰面积比值


各样品相对峰面积比值
1  2  3  4  5  6  7  8  9
平均 RSD/%
1  0.055  0.051  0.052  0.057  0.056  0.049  0.051  0.052  0.053  0.053  4.706
2  0.218  0.235  0.236  0.245  0.236  0.237  0.259  0.236  0.244  0.238  4.583
3  0.551  0.553  0.591  0.629  0.571  0.570  0.597  0.599  0.581  0.582  4.250
4  0.155  0.163  0.156  0.170  0.160  0.153  0.168  0.155  0.168  0.161  4.035
5  0.425  0.425  0.420  0.434  0.407  0.414  0.422  0.413  0.431  0.421  2.086
6  1.725  1.738  1.739  1.689  1.682  1.627  1.691  1.730  1.689  1.701  2.123
7  0.216  0.211  0.224  0.230  0.228  0.207  0.228  0.214  0.204  0.218  4.538
8  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  1.000  0.000
9  0.965  0.978  0.919  0.984  0.957  0.880  0.972  0.949  0.973  0.953  3.532
10  0.374  0.380  0.393  0.380  0.366  0.370  0.384  0.376  0.371  0.377  2.184
11  3.381  3.464  3.330  3.403  3.323  3.390  3.390  3.294  3.591  3.396  2.611
12  0.269  0.277  0.288  0.289  0.277  0.294  0.305  0.299  0.303  0.289  4.341
13  0.629  0.644  0.633  0.636  0.623  0.649  0.631  0.621  0.640  0.634  1.472
14  0.183  0.200  0.180  0.176  0.189  0.179  0.187  0.197  0.193  0.187  4.472
15  0.523  0.511  0.532  0.507  0.490  0.487  0.503  0.498  0.497  0.505  2.947
16  0.167  0.170  0.179  0.167  0.162  0.162  0.165  0.167  0.167  0.167  2.995
S1~S9分别代表表1中的9批样品;R为共有指纹图
谱.S1:安图县永庆乡;S2:和龙县土山子;S3:敦化市官
地镇;S4:珲春市密江镇;S5:延吉市台岩乡:S6:龙井市
铜佛寺镇;S7:图们市苇子沟镇;S8:汪清县依兰镇.
图2 延边不同产地万年蒿高效液相色谱图与共有指
纹图谱R比较
3 讨论
在色谱条件的优化过程中,测定波长的选择上
利用PDA检测器对190~400nm进行全波段扫描,
综合考虑了峰的数目、峰形、面积和分离度,提取不
同波长下的色谱图.在波长为360nm时峰数目较
多,且分离度良好,故采用在360nm下的色谱图建
立指纹图谱.流动相的选择中比较了不同比例的甲
醇-水、乙腈-水及甲醇-4mL/L磷酸水溶液3种流动
相体系,以甲醇-4mL/L磷酸水溶液作为流动相时
可使各色谱峰达到较好的分离,峰线较好且基线平
稳,以流动速度为1.0mL/min最为理想.本研究根
据延边不同产地的9批万年蒿药材检测结果,选择
各保留时间和峰面积稳定的16个共有峰标定万年
蒿化学成分的指纹图谱,共有峰峰面积大于总峰面
积的90%,非共有峰峰面积小于总峰面积的10%,
具有良好的系统性、特征性和重复性.经过相似度评
价,所选择的延边8个县市万年蒿指纹图谱相似度
大于0.900,具有良好的相关性.总之,高效液相色
谱法可靠、简便,可作为万年蒿的鉴定与质量控制
方法.
[参 考 文 献]
[1] 延边民族医药研究所.朝药志[M].延吉:延边人民出
版社,1995:8-9.
[2] 朴光春,吕惠子,元海丹,等.中药万年蒿中微量元素和
维生素含量的测定[J].微量元素与健康研究,2003,20
(1):31.
[3] 张德志.万年蒿中两个新贝壳杉烷型二萜的分离与结
构测定[J].天然产物研究与开发,1998,10(4):34-37.
[4] 张德志,李铣,吴立军,等.万年蒿中香豆素类成分研究
[J].中草药,1989,20(11):89-90.
[5] 张德志,吴榜华,李铣,等.万年蒿中芳香类成分研究
[J].中草药,1989,20(11):7-8.
[6] 国家药典委员会.《中国药典》(2010年版一部)[M].北
京:化学工业出版社,2010:1.?
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