全 文 ：Bt 毒蛋白 Cry1Ac 在人造土壤中对赤子爱胜蚓
毒理及生化影响 3
肖能文　戈　峰 3 3 　刘向辉
(中国科学院动物研究所 农业虫鼠害综合治理研究国家重点实验室 ,北京 100080)
【摘要】　Bt 毒素能通过转基因作物的花粉、根和残株进入土壤. 为评估转基因作物对土壤动物的影响 ,本
文模拟转基因棉的 Bt 毒素进入土壤的发生程度 ,用含不同浓度 Bt 毒蛋白 Cry1Ac 的人造土壤处理蚯蚓 ,
测定蚯蚓存活率、重量变化及体内总蛋白含量和过氧化氢酶 (CA T) 、乙酰胆碱酯酶 (AchE) 、谷胱甘肽2S2转
移酶 ( GST)和纤维素酶活性. 结果表明 ,Bt 毒蛋白对蚯蚓的生物量和生理水平影响均不明显 ,不存在急毒
性和亚致死毒性影响 ,对蚯蚓比较安全.
关键词 　赤子爱胜蚓 　Bt 毒蛋白 　总蛋白含量 　过氧化氢酶 　乙酰胆碱酯酶 　纤维素酶 　谷胱甘肽2S2
转移酶
文章编号 　1001 - 9332 (2005) 08 - 1523 - 04 　中图分类号 　Q958. 11 ,X17115 　文献标识码 　A
Effects of Bt toxin Cry1Ac on biochemical responses of Eisenia fetida in an artif icial soil. XIAO Nengwen , GE
Feng ,L IU Xianghui ( S tate Key L aboratory of Integrated M anagement of Pest Insects and Rodents , Institute of
Zoology , Chinese Academy of Sciences , Beijing 100080 , China) . 2Chin. J . A ppl . Ecol . ,2005 ,16 (8) : 1523～
1526.
Bt toxin Cry1Ac could be introduced into soil by pollen ,root exudates ,and plant residues. To investigate its toxic
effects ,the Bt toxin was added into an earthworm2cultured artificial soil ,and the survival ,growth rate , sperm
count ,protein content ,and activities of acetylcholinesterase (AchE) ,catalase ( CA T) , glutathione2S2transferase
( GST) and cellulase in Eisenia f etida were determined. The results suggested that Bt toxin Cry1Ac had little ef2
fects on the biomass and physiological characteristics of E. f etida ,with no acute and subchronic toxicity ,and was
safe for earthworm at field dose level.
Key words 　Eisenia f etida , Bt toxin Cry1Ac , Protein content , CA T , AchE , Cellulase , GST.
3 中国科学院知识创新工程资助项目 ( KSCX2032IOZ24) .3 3 通讯联系人. E2mail :gef @ioz1ac1cn
2004 - 09 - 02 收稿 ,2005 - 03 - 15 接受.
1 　引 　　言
20 世纪 90 年代以来 ,转基因生物的田间释放
规模逐渐扩大 ,转基因生物生态安全性引起各国政
府的高度重视. 转基因棉是我国种植面积最大的转
基因 作 物 之 一. 转 基 因 棉 通 过 从 B acill us
thuri ngiensis (Bt)中修饰和表达 Cry1Ac 基因产生δ2
内毒素来杀死鳞翅目害虫 ,尤其是棉铃虫种群[20 ] ,
成为防治抗性棉铃虫的重要手段. 其作用机理主要
是δ2内毒素进入靶标害虫棉铃虫体内后 ,被活化成
毒性多肽 ,与肠道受体结合 ,使细胞膜形成孔道 ,引
起细胞裂解 ,导致幼虫死亡[6 ,21 ] . 常引起体内的解
毒酶乙酰胆碱酯酶 (AchE) 和谷胱甘肽2S2转移酶
( GST)的变化 [10 ] . 转基因棉在防治害虫的同时 ,也
存在着一系列的生态风险 ,如害虫对转基因作物产
生抗性 ,非目标害虫 (尤其是刺吸式昆虫) 为害有可
能加重[12 ] .
转基因作物中的 Bt 毒素能通过植物根系、花
粉、收割后的残株分解进入土壤[16 ,17 ] . 土壤具有胶
体性质 ,吸附作用很强 ,Bt 毒蛋白在土壤中降解很
慢.研究表明 ,从转 Bt 玉米 ( Zea m ays) 根部释放的
和通过植株残体进入土壤的毒蛋白在 180 d 后仍具
有杀虫活性[16 ] , 将从苏云金芽孢杆菌 ( B acill us
thuri ngiensis subsp . Kurstaki (Bt K) ) 中提纯的毒蛋
白添加到土壤中 , 234 d 后仍对烟青虫 ( M anduca
sex ta)具有活性[22 ] . Bt 毒蛋白及含有 Bt 毒蛋白的
转基因作物对土壤生物的安全性如何有待进一步研
究.
蚯蚓广泛存在于土壤中 ,约占土壤生物总量的
60 %～80 % ,它们在有机质的降解、氮循环和土壤形
成具有重要作用[4 ] ,适合用于土壤生态风险评价 ,
而赤子爱胜蚓 ( Eisenia f eti da)由于具有标准的急毒
性和亚毒性测定方法[14 ] ,是土壤生态安全评估中最
普遍使用的物种[7 ,9 ,19 ] . Smirnoff 等[18 ]曾报道陆正
蚓 ( L um bricus terrest ris) 暴露在不同浓度的含苏云
金芽孢杆菌孢子的 Bt 试剂中 ,2 个月后蚯蚓全部死
应 用 生 态 学 报 　2005 年 8 月 　第 16 卷 　第 8 期 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
CHIN ESE JOURNAL OF APPL IED ECOLO GY , Aug. 2005 ,16 (8)∶1523～1526
亡 ,病理研究发现 ,孢子已经侵入蚯蚓各组织中. 而
Benz 等[1 ]则认为 Bt 对蚯蚓种群密度无任何影响.
本试验模拟转基因棉中 Bt 毒素进入土壤的发
生程度 ,通过将不同浓度的 Bt 毒蛋白 Cry1Ac 加入
试验土壤处理蚯蚓 ,观察 Bt 毒蛋白 Cry1Ac 对蚯蚓
存活率和重量变化的影响 ,测定蚯蚓体内总蛋白含
量和过氧化氢酶 (CA T) 、乙酰胆碱酯酶 (AchE) 、谷
胱甘肽2S2转移酶 ( GST) 和纤维素酶活性 ,分析 Bt
毒蛋白 Cry1Ac 对蚯蚓生理水平的影响 ,并评价 Bt
蛋白对非靶标生物蚯蚓的生态风险.
2 　材料与方法
211 　材料
21111 Bt 毒蛋白 　Cry1Ac 从苏云金芽孢杆菌提取 , 16000
IU·mg - 1 ,武汉 Bt 中心提供.
21112 供试蚯蚓 　赤子爱胜蚓为本实验室室内饲养 ,选择性
成熟有生殖环的成蚓 ,平均体重为 300～400 mg ,实验前于
人工气候箱驯服 7 d.
21113 供试土壤 　以人造土壤与晒干牛粪 1∶1 混和. 人造土
壤按 OECD 规则第 207 号制备[14 ] ,牛粪发酵后晒干、粉碎并
过筛.
21114 试剂 　Tris2HCl (p H 718)缓冲液 ,磷酸缓冲液 ,柠檬酸
缓冲液 (p H 510) ,羧甲基纤维素钠溶液 (CMC2Na) ,3 ,52二硝
基显色液 (DNS) ,碘化硫代乙酰胆碱 (A TCh) ,DTNB 显色
液 ,1 ,22二氯242硝基苯 (CDNB) ,谷胱甘肽 ( GSH) , EDTA ,考
马斯亮蓝 G2250 ,牛血清蛋白.
212 　蚯蚓存活率和重量变化
据王保民等 [23 ]和张俊等[24 ]报道的在转基因棉中能检
测到的最高 Bt 蛋白含量 ,设置 4 个 Bt 蛋白浓度梯度 :10 ,1 ,
011 ,0 mg·kg - 1 . 称取不同重量的 Bt 毒蛋白分别混入少量石
英沙中 ,再与试验土壤均匀混合 ,加入蒸馏水到土壤最大持
水量的 50 % ,倒入测试容器内 ,每个处理加入 10 条已知重
量的蚯蚓 ,每处理 6 个重复 ,置于人工气候箱 20 ±1 ℃、12D/
12L 培养 ,每周加水保持土壤湿度. 试验连续进行 45 d ,每周
检查和记录各处理蚯蚓死亡率和重量.
213 　酶液提取
在试验第 2、7、14 d ,随机取不同处理蚯蚓 2 条 ,3 个重
复 ,每处理 6 条 ,用于酶活性测定. 取出的蚯蚓 ,用清水冲洗
干净 ,在无菌水中静置 4 h ,吐净内含物后 ,按体重 1∶10 比例
加入 Tris2HCl (p H 718) 缓冲液 ,玻璃匀浆器匀浆 ,10 000 r·
min - 1 4 ℃离心 30 min ,取上清液于 - 70 ℃冷冻 ,用于酶活
性测定.
214 　酶活测定
乙酰胆碱酯酶 (AchE) 活力采用 Ellman[5 ]和 Gorun 等[8 ]
的方法测定 ;纤维素酶活力采用羧甲基纤维素法测定 [13 ] ;过
氧化氢酶 (CA T) 活性和谷胱甘肽2S2转移酶 ( GST) 活性参照
Saint2Denis 的方法测定[15 ] . 总蛋白质含量用考马斯亮蓝 ( G2
250)法测定[3 ] .
215 　数据处理
重量变化用重量变化率表示 :重量变化率 = ( W t -
W 0) / W 0 3 100 % 其中 , W 0 为开始时蚯蚓重量 ,而 W t 为处
理 t 天后蚯蚓重量. 用 Excell 对数据进行处理 ,用 SPSS 进行
方差分析.
3 　结果与分析
311 　Bt 毒蛋白 Cry1Ac 对蚯蚓存活率和重量变化
的影响
由图 1 可见 ,在 45 d 测试期中 ,不同浓度 Bt 毒
蛋白处理蚯蚓存活率随处理时间延长而下降. 方差
分析表明 ,各处理存活率与对照差异不显著. 在不同
浓度 Bt 蛋白处理中 ,以 10 mg·kg - 1处理存活率略
大 ,但 Bt 蛋白浓度与蚯蚓死亡率无显著相关关系 ,
说明 Bt 毒蛋白对蚯蚓存活率影响不大.
图 1 　不同浓度 Bt 毒蛋白下的蚯蚓存活率
Fig. 1 Survival rates of E. f eti da exposed to different concentration Bt
toxin.
　　从图 2 可以看出 ,蚯蚓重量在处理期间均有一
定增长 ,说明 Bt 蛋白对蚯蚓不存在亚致死毒性. 方
差分析表明 ,各处理重量变化率与对照差异均不显
图 2 　不同浓度 Bt 毒蛋白下蚯蚓重量变化率
Fig. 2 Weight change rates of E. f eti da exposed to different concentra2
tion Bt toxin.3 由相同字母标记的数值之间差异不显著 ( P > 0105) Values marked
by the same letter were not significantly different ( P > 0105) .
4251 应 　用 　生 　态 　学 　报 　　　　　　　　　　　　　　　　　　16 卷
著. 前 28 d ,以 011 mg·kg - 1处理重量增加率略大 ,
到 45 d 时以 1 mg·kg - 1处理重量增加略大 ,但Bt 蛋
白浓度与蚯蚓重量增加率无显著相关关系 ,说明 Bt
毒蛋白对蚯蚓重量变化影响不大.
312 　Bt 毒蛋白 Cry1Ac 对蚯蚓酶活影响
从表 1 可以看出 ,不同浓度的 Bt 毒蛋白处理蚯
蚓后第 2、7 和 14 天体内总蛋白含量以处理后 14 天
略高. 方差分析表明 (表 2) ,各浓度处理蚯蚓总蛋白
含量差异不显著 ( P > 0105) ;总蛋白含量随处理时
间稍有增加 ,但不同时间差异也不显著.
蚯蚓体内 AchE、CA T 和纤维素酶活性也以对
照稍高 ,但差异不显著 ( P > 0105) ;随着处理时间的
延长 ,CA T 酶活力随时间变化不显著 ,而 AchE 和纤
维素酶活性随处理时间延长而延长 ( P < 0105) .
表 1 　不同浓度 Bt 毒蛋白下蚯蚓体内的总蛋白含量和 AchE、CAT和纤维素酶活性
Table 1 Protein content and AchE,CAT and cellulose activity of E. fetida exposed to different concentration Bt toxin
Bt 蛋白浓度
Concentrations
(mg·kg - 1)
处理时间
Duration
(d)
总蛋白
Protein
content (mg·g - 1)
AchE 酶活
AchE activity
(nmol·mg - 1·min - 1)
CAT 酶活
CAT activity
(μmol·mg - 1·min - 1)
纤维素酶活
Cellulose activity
(nmol·mg - 1·min - 1)
GST 酶活
GST activity
(nmol·mg - 1·min - 1)
10 2 13148 ±0135a 5192 ±0163a 63122 ±5105a 47180 ±3188a 166159 ±41161a
7 14100 ±2121a 3157 ±0136a 69135 ±3147a 56185 ±0193a 348136 ±4182a
14 15102 ±2119a 4101 ±1101a 85180 ±3110a 55123 ±1175a 153134 ±20180a
1 2 13162 ±1104a 6130 ±0194a 76138 ±5113a 55122 ±7104a 246103 ±73118a
7 13129 ±2106a 4198 ±0167a 80141 ±5129a 54190 ±11129a 172113 ±52167a
14 14161 ±2153a 3150 ±0176a 83102 ±3178a 66193 ±0191a 225121 ±42127a
011 2 13100 ±2140a 6115 ±1121a 88175 ±3179a 58119 ±7168a 265182 ±101187a
7 13185 ±0184a 3156 ±0107a 89138 ±6106a 54146 ±5102a 262184 ±25181a
14 14102 ±0147a 3160 ±0146a 80155 ±1192a 68170 ±6151a 323180 ±72180a
0 2 13164 ±2124a 5196 ±0144a 89169 ±4190a 62181 ±6196a 287117 ±196182a
7 16102 ±0150a 5123 ±3128a 91145 ±4101a 64133 ±3172a 248191 ±4168a
14 15111 ±1120a 4177 ±1109a 86126 ±2196a 73179 ±1192a 159154 ±13189a
同列数值后字母相同表示差异不显著 ( P ≥0105) Values in the same column followed by the same letter were not significantly different ( P ≥0105) .
表 2 　Bt 毒蛋白处理下蚯蚓体内总蛋白含量和酶活力的方差分析
Table 2 AVONA results on the biochemical activity of E. fetida ex2
posed to Bt toxin
项目
Items
Bt 浓度
Concentration
df F P
处理时间
Duration
df F P
浓度×时间
Concentration×Duration
df F P
总蛋白含量
Proteincontent 3 21180 01117 2 41674 01051 6 11416 01249
纤维素酶活
Cellulaseactivity 3 11155 01347 2 101831 01000 3 6 41201 01005 3
CAT酶
Catalase activity 3 11583 01219 2 11779 01190 6 01924 01595
AchE酶
AchE activity 3 11939 01150 2 51656 01010 3 6 41086 01006 3
GST酶
GST activity 3 01924 01452 2 01503 01614 6 11659 011953 P < 0105.
4 　讨 　　论
根据王保民等[23 ]和张俊等[24 ]报道 ,在 Bt 棉植
株中检测到 Bt 蛋白的最高浓度为 5 mg·kg - 1 ,其在
土壤中的残留期长达 234 d. 本实验最高浓度为植株
中检测到的最高浓度的 2 倍 ,即 10 mg·kg - 1 ,最低
浓度为 011 mg·kg - 1 . 研究表明 ,45 d 内各浓度 Bt
毒蛋白处理与对照存活率及重量变化率差异不显
著 ,推测转基因棉在田间应用水平的 Bt 蛋白含量对
蚯蚓没有急毒性和亚致死毒性影响.
Smirnoff 等[18 ]报道陆正蚓在 Bt 试剂中暴露 2
个月后全部死亡 ,且孢子已经侵入蚯蚓的各个组织
中形成孢子和晶体 ,产生β2内毒素. 其可能原因是蚯
蚓饲料中含有硅藻 ,其对内脏有摩擦作用而破坏内
脏表层 ,使细菌能够侵入到体腔而使蚯蚓死亡[16 ] .
Zwahlen 等[25 ,26 ]和 Saxena 等 [17 ]测试转基因玉米 Bt
毒蛋白对土壤线虫、陆正蚓和细菌等的影响 ,其结果
和本实验一致. 本实验进一步证明 Bt 毒蛋白不影响
蚯蚓种群的存活率和重量.
转 Bt 作物主要通过 Bt 毒蛋白对靶标害虫起直
接杀伤作用. 梁革梅等 [10 ] 发现棉铃虫敏感种群
AchE 酶活力比抗性种群低. 本实验测定了处理后
2、7 和 14 d 蚯蚓体内的总蛋白含量和 AchE 酶活
力 ,结果表明 ,Bt 毒蛋白不影响蚯蚓 AchE 酶活力.
GST 是动物体内一种重要的解毒酶 ,它能催化谷胱
甘肽 ( GSH)经半胱氨酸的硫原子与多种疏水性化合
物的亲电子基团的连接作用 ,常由环境污染诱导产
生. Lukkari 等[11 ]和 Booth 等[2 ]分别将其作为土壤
重金属和杀虫剂污染监测的生物标示物. 用不同浓
度Bt 毒蛋白处理蚯蚓后 , GST 活性在 14 d 没有显
著变化. CA T 能清除体内的氢氧自由基 (·OH) ,保
护细胞免受损伤 ,其活性大小说明细胞受到的氧化
压力. 本实验表明 Bt 毒蛋白处理未对蚯蚓造成氧化
压力. 纤维素酶活性代表蚯蚓对植物残株和其他纤
52518 期 　　　　　　　　肖能文等 :Bt 毒蛋白 Cry1Ac 在人造土壤中对赤子爱胜蚓毒理及生化影响 　　　　　　　　　　　
维素物质的消化和降解能力 ,Bt 毒蛋白对蚯蚓纤维
素酶活性影响不显著. 酶活力变化进一步说明 ,田间
应用水平的 Bt 蛋白对蚯蚓生理水平影响不大.
我们还应该从其他生活史和适应性参数角度考
虑转基因作物对蚯蚓的影响 ,如寿命、从孵化到性成
熟时间、成蚓产茧数量和后代的存活等 ;同时 ,由于
Bt 蛋白在土壤中降解速度慢 ,需要对蚯蚓作更长时
间的处理 ;另外 ,新孵化的蚯蚓对 Bt 毒蛋白的敏感
性也需要进一步研究.
参考文献
1 Benz G , Altwegg A. 1975. Safety of Bacill us thuringiensis for
earthworms. J Invertebr Pathol ,26 :125～126
2 　Booth L H , Hodge S , O’Halloran K. 2001. Use of biomarkers in
earthworms to detect use and abuse of field applications of a model
organophosphate pesticide. B ull Envi ron Contam Toxicol ,67 (5) :
633～640
3 　Bradford MM. 1976. A rapid and sensitive method for the quantifi2
cation of microgram quantities of protein using the principle of pro2
tein2dye binding. A nal Biochem ,72 :248～254
4 　Edwards CA ,Bohlen PJ . 1996. Biology and Ecology of Earthworm.
London :Chapmam Hall.
5 　Ellman GL ,Courtney KD ,Andres V , et al . 1961. A new and rapid
colorimetric determination of acetylcholinesterase activity. Biochem
Pharmacol ,7 :88～95
6 　Englisha L , Slatinb SL , 1992. Mode of action of delta2endotoxins
from Bacill us thuringiensis :A comparison with other bacterial tox2
ins. Insect Biochem Molec Biol ,22 (1) :1～7
7 　Ge F (戈 　峰) ,Liu X2H (刘向辉) , Pan W2D (潘卫东) , et al .
2001. The role of earthworm in the ecological restoration of mining
wasteland of Dexing Copper Mine in China. Acta Ecol S in (生态学
报) ,21 (11) :1790～1795 (in Chinese)
8 　Gorun V ,Proinov I ,Baltescu V , et al . 1978. Modified Ellman pro2
cedure for assay of cholinesterases in crude enzymatic preparations.
A nal Biochem ,86 (1) :324～326
9 　Guo Y2C (郭永灿) , Wang Z2Z(王振中) ,Lai Q (赖 　勤) , et al .
1995. Soil heavy metal pollution and isozyme. Chin J A ppl Ecol (应
用生态学报) ,6 (3) :317～322 (in Chinese)
10 　Liang G2M (梁革梅) , Tan W2J (谭维嘉) , Guo Y2Y (郭予元) .
2001. Comparison of some detoxification enzyme and midgut pro2
tease activities between resistant and susceptible cotton bollworm
population to Bt . Acta Phytophyl S in (植物保护学报) ,28 (2) :133
～138 (in Chinese)
11 　Lukkari T , Taavitsainen M , Soimasuo M , et al . 2004. Biomarker
responses of the earthworm A porrectodea t uberculata to copper
and zinc exposure :Differences between populations with and with2
out earlier metal exposure. Envi ron Pollut ,129 (3) :377～386
12 　Men XY , Ge F ,Liu XH , Yardim EN. 2003. Diversity of arthropod
communities in transgenic Bt cotton and nontransgenic cotton. En2
vi ron Ent ,32 (2) :270～275
13 　Mishra PC , Dash MC. 1980. Digestive enzymes of some earth2
worms. Ex perientia ,36 :1156～1157
14 　OECD. 1984. Earthworm , acute toxicity tests. OECD Guideline
207.
15 　Saint2Denis M ,Labrot F , Narbonne J F , et al . 1998. Glutathione ,
glutathione related enzymes and catalase activities in the worm
Eisenia f eti da. A rch Envi ron Contam Toxicol ,35 :594～606
16 　Saxena D ,Flores S ,Stotzky G. 1999 Insecticidal toxin in root exu2
dates from Bt corn. Nat ure ,402 (6761) :480
17 　Saxena D , Stotzky G. 2001. Bacill us thuringiensis (Bt ) toxin re2
leased from root exudates and biomass of Bt corn has no apparent
effect on earthworms , nematodes , protozoa , bacteria , and fungi in
soil. Soil Biol Biochem ,33 :1225～1230
18 　Smirnoff WA , Heimpel AM. 1961. Notes on the pathogenicity of
Bacill us thuringiensis var. thuringiensis Berliner for the earth2
worm , L umbricus terrest ris Linnaeus. J Insect Pathol ,3 :403～408
19 　Song Y2F(宋玉芳) ,Zhou Q2X(周启星) ,Xu H2X(许华夏) ,et al .
2002. Acute toxicological effects of heavy metal pollution in soils on
earthworms. Chin J A ppl Ecol (应用生态学报) ,13 (2) :187～190
(in Chinese)
20 　Tan S2J (谭声江) ,Chen X2F (陈晓峰) ,Li D2M (李典谟) . 2002.
Progress in the studies on Helicoverpa spp . resistance to transgenic
Bt cotton and its management strategy. Acta Ent S in (昆虫学报) ,
45 (1) :138～144 (in Chinese)
21 　Tang M2J (汤慕瑾) , Yu J2X (余健秀) ,Li J2H (李建华) , et al .
2001. Advances in studies on Bacill us thuringiensis insecticide
crystal protein by mutagenesis. Progr Biotechnol (生物工程进展) ,
21 (4) :54～56 (in Chinese)
22 　Tapp H ,Stotzky G. 1998. Persistence of the insecticidal toxin from
Bacill us thuringiensis subsp . kurstaki in soil. Soil Biol Biochem ,
30 :471～476
23 　Wang B2M (王保民) ,Li S2H(李绍虎) ,Li B(李　斌) . 2002. Con2
tent and express of Bacill us thuringiensis insecticidal protein in
transgenic cotton. J A gric Biotechnol (农业生物技术学报) , 10
(3) :215～219 (in Chinese)
24 　Zhang J (张　俊) , Guo X2M (郭香墨) ,Ma L2H (马丽华) . 2002.
Study on effects of different foreign Bt and Bt + Cp TI insect2resis2
tant genes on bollworm resistance in upland cotton ( G. hi rsut um
L . ) . Cotton Sci (棉花学报) ,14 (3) :158～161 (in Chinese)
25 　Zwahlen C , Hilbeck A , Gugerli P , et al . 2003. Degradation of the
Cry1Ab protein within transgenic Bacill us thuringiensis corn tissue
in the field. Mol Ecol ,3 :765～775
26 　Zwahlen C ,Hilbeck A ,Howald R , et al . 2003. Effects of transgenic
Bt corn litter on the earthworm L umbricus terrest ris . Mol Ecol ,12
(4) :1077～1086
作者简介 　肖能文 ,男 ,1973 年生 ,博士研究生. 主要从事动
物生态、生态毒理学研究 ,发表论文 6 篇. Tel :010282617294 ;
E2mail :xiaonw @ioz. ac. cn
6251 应 　用 　生 　态 　学 　报 　　　　　　　　　　　　　　　　　　16 卷