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第 34 卷第 3 期 凯里学院学报 Vol． 34 No． 3
2016 年 6 月 Journal of Kaili University Jun． 2016
八角金盘果实原花青素抗氧化能力测定
＊
杨锦兰，孟立霞，杨晓燕，唐士金，蔡凌云*
(凯里学院，贵州 凯里 556011)
摘 要:采用微波辅助提取，分别用不同提取剂提取原花青素，通过紫外分光光度计，采用铁盐催
化法测定原花青素的含量，再用 DPPH自由基法测定八角金盘果实原花青素的抗氧化能力。实
验结果显示，提取剂为 50%和 90%甲醇时原花青素含量分别为 8. 11 和 3. 31 mg /g，丙酮时含量
分别为 5. 80 和 4. 13 mg /g;对 DPPH自由基的清除率，40 μg /mL时，50%和 90%甲醇提取液分别
达 74%和 89%，丙酮提取液分别达 79%和 96%。由此可知，八角金盘果实原花青素含量和抗氧
化能力都较高，开发价值大，但不同提取液提取率和抗氧化能力不同，可根据不同利用方向选择
提取剂。
关键词:八角金盘;原花青素;提取剂;抗氧化能力
论文编码:Doi:10． 3969 / j． issn． 1673 -9329． 2016． 03． 17
八角金盘 Fatsia japonica 为五加科 Araliaceae
八角金盘属植物，别名八角盘、八手、手树，为常绿
灌木或小乔木，是优美的观叶树种，适宜种植于院
门旁、墙边及建筑物背阴处。原产于琉球群岛，现
全世界温暖地区已广泛栽培。八角金盘的叶、根和
皮均具有一定药价值:根皮具有散风除湿，化淤止
痛，化痰止咳、活血化淤等功效，可用于治疗跌打损
伤、化痰止咳、咳嗽痰多、风湿痹痛和痛风等［1］，还
有一定的抗癌作用［2］。目前关于八角金盘的研究
多为栽培和植物生理方面［3 -5］，化学成分方面梁志
远等分析了八角金盘茎、叶、花(果实)中精油的化
学成分，共鉴定出 97 种化合物［6］，但对八角金盘果
实原花青素的提取和含量测定及其抗氧化性能还
未见报道。
原花青素是目前公认的清除人体内自由基最
有效的天然抗氧化剂，据报告显示原花青素对自由
基的清除率是 VE(脂溶性维生素)的 50 倍、VC(水
溶性维生素)的 20 倍。原花青素的主要功能有:
促进血液循环、保护视力(尤其是糖尿病引发的的
视力衰退)、滋润皮肤、与维生素 C 协同降低胆固
醇、保护心脏等［7 -9］。因原花青素作用效果高、毒
副作用低及生物利用率高的特点，被广泛用于食品
的生产、饮料的制作、化妆品及保健用品等领域，具
有广泛的应用前景。
为了充分开发原花青素，本文选用八角金盘果
实为原料，对其中的原花青素进行提取和抗氧化能
力测定等分析，为八角金盘原花青素的综合利用提
供理论依据。
1 实验仪器、试药与材料
1. 1 实验材料
采集于凯里学院校园绿化带的八角金盘果实，
经凯里学院蔡凌云教授鉴定为五加科八角金盘属
八角金盘 Fatsia japonica。
1. 2 实验试剂
原花青素标准品(合肥博美生物科技有限责
任公司，含量≥95%)，丙酮、甲醇、冰醋酸、香草
* 收稿日期:2016 -03 -12
基金项目:贵州省科技厅项目(编号:黔科合 J字［2013］2258 号;KJT201101);凯里学院重点项目(编号:ZX201201);国家自然科学基金委
(编号:31201160);贵州省普通高等学校黔东南民族药用植物研究创新团队(编号:黔教合人才团队字［2015］70)
作者简介:杨锦兰(1993 -)，女，贵州独山人，凯里学院化学与材料学院制药工程专业 12 级本科生．
* 通讯作者:蔡凌云，E -mail:125906640@ qq． com．
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醛、浓盐酸、硫酸亚铁铵、正丁醇、甲醇等均为分析
纯，蒸馏水为化学与材料工程学院实验室自制。
1. 3 实验仪器
GAS -800 型常用微波合成仪，上海新仪微波
化学科技有限公司;ＲE -2000E 型旋转蒸发仪，河
南爱博特科技发展有限公司;UV -1240 紫外分光
光度计，岛津公司;GT SONIC - L3 超声清洗仪，广
东固特超声股份有限公司;SHZ -D(Ⅲ)型循环水
真空泵，长沙科怡仪器设备有限公司;ML204 分析
天平，上海振仙贸易有限公司;雷麦 FS -30C 打粉
机，广州雷迈机械设备有限公司;80 号目筛，广州
市元达制药设备有限公司;德国 eppendorf Ｒesearch
移液器，上海臣尔仪器有限公司。
2 实验方法
2. 1 样品处理与提取液制备
八角金盘果实经阳光自然干燥，用打粉机打成
粉末，粉末过 80 目筛，封存于干燥器中备用。
用分析天平精密称取样品 3. 0 g，加 60. 0 mL
40%甲醇，避光浸泡 20 min，在 600 w 条件下微波
3 min，浸提液减压过滤，残渣重复提取一次，合并
滤液，35 ℃ 减压浓缩至无有机溶剂，水相再经
6. 0 mL乙醚萃取 4 次。合并萃取液甲醇定容至
100. 0 mL，备用。再用 90%的丙酮水溶液 50%和
90%甲醇水溶液重复上述实验。
2. 2 标准品溶液的制备
精密称取原花青素标准品 10. 0 mg，用甲醇溶
解后，定容于 50. 0 mL的容量瓶中，得 0. 20 mg /mL
的原花青素标准溶液，备用。
2. 3 最大吸收波长的确定
2. 3. 1 甲醇提取的样品
精密吸取一定量的原花青素标准溶液和样品
溶液分别放入试管中，加甲醇补足体积至 1. 2 mL，
加 6. 0 mL 正丁醇 －浓盐酸(95:5)，加 0. 2 mL 硫
酸铁铵，充分振荡 60 ℃热水浴避光反应 60 min，冰
水冷却至室温，在 400 ～ 700 nm 处进行扫描，结果
得到标准品溶液与样品溶液的最大吸收值均在
542 nm。
2. 3. 2 丙酮提取的样品
精密吸取一定量的原花青素标准溶液和样品
溶液分别放入试管中，加丙酮补足体积至 1. 2 mL，
加 6. 0 mL正丁醇 －浓盐酸(95∶ 5)，加 0. 2mL硫酸
铁铵，充分振荡 60 ℃热水浴避光反应 60 min，冰水
冷却至室温，在 400 ～ 800 nm 处进行扫描，结果得
到标准品溶液与样品溶液的最大吸收值均在
542 nm。
2. 4 标准曲线的绘制
精密吸取原花青素标准溶液 0. 0，0. 2，0. 4，
0. 6，0. 8，1. 0，1. 2 mL 分别放入 7 个试管中(编号
为 1 ～ 7)，加甲醇补足体积至 1. 2 mL，加 6. 0 mL正
丁醇 －浓盐酸(95:5)，加 0. 2 mL 硫酸铁铵，充分
振荡 60 ℃热水浴避光反应 60 min，冰水冷却至室
温，在 542 nm波长处进行吸光值的测定，每个浓度
平行测定 3 次，以吸光度值(A)3 次的平均值为纵
坐标，原花青素浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，
计算其回归方程为 A = 0. 103 9C － 0. 002 2，Ｒ =
0. 999 1，表明原花青素在 0. 005 8 ～ 0. 032 7 mg /
mL范围内呈良好的线性关系。同法测定丙酮，计
算其回归方程为 A =0. 148C +0. 013 4，Ｒ =0. 999 9，
表明原花青素在 0. 005 4 ～ 0. 027 mg /mL范围内呈
良好的线性关系。
2. 5 稳定性试验
取标准品溶液和样品，按照 2. 3. 1 方法，在
542 nm波长处进行吸光值的测定，每隔 5 min测定
1 次，记录在 60 min 内的吸光值，A = 0. 391，
0. 410，0. 414，0. 400，0. 407，0. 408，0. 404，0. 407，
0. 408，0. 417，0. 414(标准品)和 0. 542，0. 541，
0. 541，0. 549，0. 554，0. 550，0. 549，0. 550，0. 549，
0. 550，0. 551(样品)。标准品与样品的 ＲSD 分别
为 1. 77%和 0. 80%，这表明测定方法稳定。同法
测定丙酮提取的标准品溶液和样品得:A = 0. 204，
0. 205，0. 205，0. 205，0. 205，0. 204，0. 204，0. 204，
0. 205，0. 205，0. 205，0. 205(标准品)和 A = 0. 712，
0. 715，0. 701，0. 706，0. 696，0. 692，0. 687，0. 685，
0. 684，0. 684，0. 681，0. 681(样品)，ＲSD 标准品和
样品分别为 0. 24%和 1. 76%，表明测定方法稳定。
2. 6 加样回收试验
精密吸取 2. 2 项下制备的供试样品溶液
10. 0 mL稀释到 100. 0 mL，取 0. 2 mL，置于 10. 0 mL
试管，共 6 份，再分别加入原花青素对照品溶液
1. 0 mL，加甲醇补足体积至 1. 2 mL，加 6. 0 mL 正
丁醇 －浓盐酸(95:5)，加 0. 2 mL 硫酸铁铵，充分
振荡 60 ℃热水浴避光反应 60 min，冰水冷却至室
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温，在 542 nm波长处进行吸光值的测定计算回收
率，结果见表 1。
表 1 加样回收率
样品量
/mg
标准品
量 /mg
加样后
的量 /mg
回收
率 /%
平均回
收 /%
ＲSD /%
0． 200 0． 181 0． 388 104
0． 200 0． 181 0． 388 104
0． 200 0． 181 0． 375 97． 1 99 4． 23
0． 200 0． 181 0． 371 95． 4
0． 200 0． 181 0． 382 101
0． 200 0． 181 0． 370 94． 7
实验结果表明该测定方法的准确度好。
2. 7 精密度试验
吸取甲醇标准品溶液置于 10. 0 mL试管中，共
6 份，按照 2. 3. 1 的方法在 542 nm 波长处进行吸
光值的测定，吸光值为 0. 838，0. 757，0. 786，
0. 788，0. 763，0. 810，计算得 ＲSD 为 3. 81%，说明
精密度良好。
同样吸取丙酮标准品溶液置于 10. 0 mL 试管
中，共 6 份，按照 2. 3. 2 方法在 542 nm波长处进行
吸光值的测定，得吸光值 0. 838，0. 757，0. 781，
0. 788，0. 763 和 0. 810，计算得 ＲSD 为 3. 844%，说
明精密度良好。
2. 8 样品中原花青素提取剂选择
取 2. 1制备的各样液加甲醇补足体积至 1. 2 mL，
按照 2. 3. 1 方法进行吸光度的测定，取 3 次的平均
值代入回归方程计算出八角金盘果实粉末中原花
青素的含量，同法测定丙酮提取的样品，实验结果
见表 2。
表 2 不同提取剂对原花青素含量和提取率的影响
提取剂
甲醇
(50%)
甲醇
(90%)
丙酮
(50%)
丙酮
(90%)
含量 /(mg /g) 8. 11 3. 31 5. 80 4. 13
提取率 /% 0. 81 0. 33 0. 58 0. 41
结果表明低浓度溶剂(50%)提取率高于高浓
度(90%)，这种差异在甲醇做提取剂时更大;用浓
度较低(50%)提取剂时甲醇的提取率高于丙酮，
用高浓度(90%)提取剂时提取率丙酮高于甲醇。
2. 9 样品中原花青素对 DPPH 自由基清除率的
测定
取 2. 1项下制备的各提取液，配制成 40. 0 μg /
mL的溶液，取样液 2. 0 mL加入 2. 0 mmol /L的 DP-
PH溶液 2. 0 mL，加塞，摇匀，在 25 ℃避光反应
30 min，取出，测定 517 nm 波长处的吸光度。再用
蒸馏水代替 DPPH 溶液测定吸光度。八角金盘果
实原花青素对 DPPH 自由基的清除率实验结果见
表 3。
表 3 不同提取剂对 DPPH清除率的影响
提取剂
甲醇
(50%)
甲醇
(90%)
丙酮
(50%)
丙酮
(90%)
清除率 /% 74． 0 89． 0 79． 0 96． 0
从表 3 可知八角金盘果实原花青素对 DPPH
自由基的清除率受提取剂类型及其浓度的影响，丙
酮提取的原花青素对 DPPH 自由基的清除率高于
甲醇，且高浓度提取剂提取的原花青素对 DPPH自
由基的清除率高于低浓度提取剂。
3 结论
本研究选用了有机溶剂提取和微波辅助提取
法，以甲醇和丙酮为提取剂，选用铁盐催化法进行
测定。八角金盘果实原花青素对 DPPH 自由基的
清除率受提取剂类型和浓度的影响，丙酮提取的原
花青素对 DPPH 自由基的清除率高于甲醇。且高
浓度提取剂提取的原花青素对 DPPH 自由基的清
除率高于低浓度提取剂。
原花青素清除自由基的能力是 VE 的 50 倍，
VC 的 20 倍，具有广泛的应用前景且得到了普遍认
可，我们实验结果可为八角金盘综合利用提供理论
依据。后续研究中可以开展不同提取剂提取原花
青素结构差异及其抗氧化能力差异研究。在
40. 0 μg /mL时，八角金盘果实原花青素对 DPPH
自由基的清除率即高达 96%，是良好的抗氧化剂。
八角金盘果实是一种极有潜力的天然抗氧化剂中
药和天然药用植物资源。
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［责任编辑:刘红霞］