全 文 ：收稿日期:2012-10-29 接受日期:2013-02-27
基金项目:安徽省杰出青年基金项目(1108085J04) ;安徽农业大学
校人才基金项目(YJ2011-06)
* 通讯作者 Tel:86-551-5786765;E-mail:baoguanhu@ ahau． edu． cn
天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2013，25:1519-1521，1586
文章编号:1001-6880(2013)11-1519-04
冻绿茎部化学成分的研究
李 丽，鲍官虎*
安徽农业大学教育部农业部茶叶生物化学与生物技术重点实验室，合肥 230036
摘 要:本文研究冻绿茎部的化学成分。主要采用各种柱色谱进行分离纯化冻绿茎中的化学成分，根据理化性
质、光谱数据进行结构鉴定。从冻绿茎 95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离得到 8 个化合物:山萘酚(1) ，7-羟
基-5-甲氧基苯酞(2) ，山奈素(3) ，墨沙酮(4) ，山萘酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(5) ，4，5，7-三羟基-黄烷-4-醇(6) ，槲
皮素(7) ，木犀草素 (8)。化合物 1 ～ 8 均为首次从该植物中分离得到。
关键词:冻绿;抑菌活性;化学成分;黄酮
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A
Study on the Chemical Constituents from the Stem of Ｒhamnus utilis
LI Li，BAO Guan-hu*
Anhui Agriculture University，Key Laboratory of Tea Biochemistry and Biotechnology，
Ministry of Education and Ministry of Agriculture，Hefei 230036，China
Abstract:This paper studied the constituents from the stem of Ｒhamnus utilis． Isolation and purification of the constitu-
ents was carried out by repeated column chromatography，and their structures were elucidated on the basis of spectro-
scopic data analysis． Eight compounds (1-8)were isolated and their structures were identified as following:kaempferol
(1) ，7-hydroxy-5-methoxyphthalide(2) ，kaempferide(3) ，maesopsin(4) ，kaempferol-3-O-α-L-Ｒha(5) ，4，5，7-Trihy-
droxy-flananol-4-ol(6) ，quercetin(7) ，luteolin(8)． Compounds 1-8 were isolated from this species for the first time．
Key words:Ｒhamnus utilis;antibacterial;chemical constituents;flavones
冻绿(Ｒhamnus utilis) ，在植物分类中属鼠李科
鼠李属。鼠李属(Ｒhamnus L．)是鼠李科中的一个
大属，有 200 多种，分布于温带和亚热带地区。我国
有 57 种 14 变种，全国各地均有分布，资源十分丰
富［3］，其中以西南和华南的种类最多。在古代，染
绿的染料多用蓝、黄两色进行复染，而冻绿是一种可
以单独染绿的染料植物，因而其被称为“中国绿”。
药用价值目前看来不大。20 世纪中后期，国内外学
者对鼠李属中多种植物的化学成分及药理作用进行
了深入研究［1］。文献报道该属植物中主要含蒽醌、
蒽醌甙、黄酮等化学成分［2，3］。但冻绿这个种的化
学成分尚未见报道。
为了开发我国的植物资源，寻找新的有效药物，
笔者对冻绿不同极性部位进行了体外抑菌实验，结
果表明乙酸乙酯部位对四种致病菌(大肠杆菌、伤
寒杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌)的抑制作用较
明显，因此本文选取乙酸乙酯部位的化学成分进行
研究。
1 仪器和试剂
1． 1 材料
选用 2011 年在安徽铜陵地区采集的冻绿，植物
经过安徽农业大学鲍官虎教授鉴定(标本保存于安
徽农业大学生物科技楼 253 室)。
1． 2 主要仪器设备
旋转蒸发仪(瑞士 Buchi 公司) ;电热恒温鼓风
干燥箱(上海精宏实验设备有限公司) ;电热恒温水
槽(上海精宏实验设备有限公司) ;真空干燥箱(德
国 MMM 公司) ;电子天平(上海天平仪器厂 T6328B
型) ;核磁共振仪(Varian400 MHz 核磁共振分析仪
器) ;HQLl50C 恒温摇床:武汉中科科仪技术发展有
限责任公司;KQ3200E 医用超声波清洗器:昆山超
声仪器有限公司;WZM-1 型智能超净工作台:上海
三发科学仪器有限公司;电热手提压力蒸汽灭菌器:
上海申安医疗器械厂。
1． 3 试剂和药品
三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、甲
酸、二甲基亚砜为国产分析醇;氘代 DMSO(美国牛
津公司) ;细菌用营养培养基(西陇化工股份有限公
司) ;氨苄青霉素(北京奥博星生物技术有限责任公
司) ;Sephadex LH-20(Pharmacia 公司) ;硅胶 H(青
岛海洋硅胶厂) ;200 ～ 300 目硅胶(青岛海洋硅胶
厂) ;100 ～ 200 目硅胶(青岛海洋硅胶厂) ;硅胶板
(青岛海洋化工分厂)。
2 不同极性部位粗提物的抑菌活性测
试
2． 1 菌种和对照组选择
选取大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡
萄球菌作为供试菌;选取 5 μg /mL 氨苄青霉素
(AMP)作为阳性对照;
2． 2 抑菌活性测试实验设计［12］
采用打孔法进行抑菌活性实验测定。用二倍稀
释法分别将三种样品用 DMSO 稀释配制成由高浓
度到低浓度的浓度梯度(400 μg /mL ～ 200 μg /mL ～
100 μg /mL ～ 50 μg /mL ～ 25 μg /mL)共 5(C1-C5)个
梯度。每组实验设置 5 个梯度的平板，每个梯度设
计相同的三组平行对照，共 60 个平板。每个平板上
钻五孔，选取其中两个孔分别加入 DMSO 溶液作为
阴性对照和 5 μg /mL的氨苄青霉素作为阳性对照，
剩下三个孔分别加入相同浓度但不同极性部位的粗
提物。37 ℃恒温培养 18 ～ 24 h，观察实验结果，记
录下来不同极性部位粗提物的不同浓度所产生的抑
菌圈直径。
2． 3 实验结果
表 1 冻绿不同溶剂提取物的抑菌效果(n = 3，x ± s)
Table 1 Inhibition zone diameters of different extracts from Ｒhamnus utilis on four common food born pathogenic bacteria (n = 3，x ± s)
浸提液
Leach liquor
抑菌圈直径(mm)Diameter of antibacterial circle
大肠杆菌
Escherichia coli
金黄色葡萄球菌
Staphyloccocus aureus
痢疾杆菌
Shigella dysenteriae
伤寒杆菌
Salmonella typhi
石油醚
C1 6． 16 ± 0． 23 10． 57 ± 0． 88 10． 02 ± 0． 85 10． 89 ± 0． 24
C2 6． 07 ± 0． 10 10． 15 ± 0． 28 6． 33 ± 0． 14 10． 19 ± 0． 29
C3 6． 00 ± 0． 00 7． 66 ± 0． 41 6． 24 ± 0． 15 6． 13 ± 0． 09
C4 6． 00 ± 0． 00 6． 30 ± 0． 23 6． 00 ± 0． 00 6． 00 ± 0． 00
C5 6． 00 ± 0． 00 6． 00 ± 0． 00 6． 00 ± 0． 00 6． 00 ± 0． 00
乙酸乙酯
C1 16． 51 ± 0． 67 16． 54 ± 0． 72 15． 76 ± 0． 56 17． 86 ± 0． 41
C2 15． 48 ± 0． 14 15． 53 ± 0． 82 15． 38 ± 0． 91 17． 12 ± 0． 71
C3 13． 79 ± 0． 41 14． 79 ± 0． 41 14． 38 ± 0． 23 15． 34 ± 0． 60
C4 13． 65 ± 0． 33 14． 00 ± 0． 51 13． 04 ± 0． 37 13． 35 ± 0． 77
C5 11． 98 ± 0． 62 11． 53 ± 0． 27 10． 47 ± 0． 43 12． 49 ± 0． 45
正丁醇
C1 14． 91 ± 0． 41 19． 12 ± 0． 48 15． 52 ± 0． 51 17． 85 ± 0． 70
C2 14． 37 ± 0． 68 16． 56 ± 0． 56 14． 02 ± 0． 42 17． 27 ± 0． 78
C3 13． 18 ± 0． 39 14． 69 ± 0． 05 13． 49 ± 0． 37 15． 91 ± 0． 86
C4 12． 20 ± 0． 10 14． 42 ± 0． 21 12． 24 ± 0． 72 14． 60 ± 0． 91
C5 11． 97 ± 0． 36 12． 95 ± 0． 97 11． 27 ± 0． 80 11． 97 ± 0． 45
注:直径 ＞ 6． 00 mm表示有抑菌活性活性，抑菌直径均为三组平行试验的平均值
由表 1 可知 3 种不同溶剂提取物在相同浓度
下，对各种供试菌的抑菌活性不同。相对而言，在相
同浓度下由抑菌圈直径可得出乙酸乙酯部位的抑菌
活性最好。
3 提取分离
将干燥粉碎的冻绿茎 6 kg，用 95 ℅乙醇超声辅
0251 天然产物研究与开发 Vol. 25
助提取得 145． 6 g浸膏，然后依次以石油醚、乙酸乙
酯、正丁醇进行萃取。得乙酸乙酯部位浸膏 55． 8 g，
取 40 g 干法过硅胶柱，CH2Cl2-MeOH(20∶ 1 ～ 5∶ 1)
梯度洗脱得组分 S1、S2、S3。S1 经 Sephadex LH-20
凝胶柱层析，100% MeOH 洗脱得出 Fr1-Fr3 三个组
分，Fr3 用硅胶柱层析分离，CH2Cl2-MeOH(20∶ 1)洗
脱得化合物 1 (264 mg)。S2 经 Sephadex LH-20 凝
胶柱层析，100%MeOH洗脱得 Fr4-Fr11，其中 Fr8 用
硅胶柱层析分离，CH2Cl2-MeOH(20 ∶ 1)洗脱得出
Fr12-Fr15，Fr12、Fr14 分别经 Sephadex LH-20 凝胶
柱层析，100%MeOH洗脱得出化合物 2 (36 mg)、化
合物 3 (15 mg) ;Fr9 经 Sephadex LH-20 凝胶柱层
析，100%MeOH 洗脱得出化合物 5 (12mg)、化合物
6 (9 mg)、化合物 7 (445 mg) ;Fr13 经硅胶柱层析
分离，CH2Cl2-MeOH(10 ∶ 1)洗脱得化合物 4 (29
mg)。13 C NMＲS3 经硅胶柱层析分离，洗脱液为
CH2Cl2-MeOH(10∶ 1) ，得出 Fr16-Fr21，Fr20 经 Seph-
adex LH-20 凝胶柱层析，100% MeOH 洗脱得出化合
物 8 (18 mg)。
4 结构鉴定
化合物 1 黄色粉末，1H NMＲ (400 MHz，DM-
SO-d6)δ:6． 19 (1H，J = 2． 0 Hz，H-6) ，6． 44 (1H，
d，J = 2． 0 Hz，H-8) ，6． 92 (2H，d，J = 8． 0 Hz，H-
3，5) ，8． 04 (2H，d，J = 8． 0，H-2，6) ，12． 49
(1H，brs，5-OH) ，10． 80 (1H，s，4-OH，10． 12(1H，s，
OH-7) ，9． 43 (1H，s，3-OH) ，1H NMＲ的数据与文献
［4］报道基本一致，鉴定该化合物为山奈酚。
化合物 2 浅黄色粉末，1H NMＲ (400 MHz，
DMSO-d6)δ:10． 66 (1H，s，OH-7) ，6． 59 (1H，s，H-
8) ，6． 39 (1H，s，H-6) ，5． 18 (2H，s，H-2) ，3． 79
(1H，s，OCH3-5)．
13C NMＲ (DMSO-d6)δ:68． 79 (C-
1) ，168． 85 (C-3) ，151． 97 (C-4) ，158． 40 (C-5) ，
98． 81 (C-6) ，166． 23 (C-7) ，101． 83 (C-8) ，104． 83
(C-9) ，56． 17 (CH3) ，根据
1H NMＲ、13 C NMＲ 数据
鉴定该化合物为 7-羟基-5-甲氧基苯酞。
化合物 3 黄色针晶，1H NMＲ (400 MHz，DM-
SO-d6)δ:3． 87 (3H，s，OCH3-4) ，6． 35(1H，d，J =
2． 0 Hz，H-6) ，6． 74 (1H，d，J = 2． 0 Hz，H-8) ，6． 93
(2H，d，J = 12 Hz，H-3，5) ，8． 08 (2H，d，J = 9． 0
Hz，H-2，6) ，9． 54 (1H，s，OH-3) ，12，48 (1H，s，
OH-5) ，10． 14 (1H，s，OH-7) ，1H NMＲ 的数据与文
献［6］报道基本一致，鉴定该化合物为山奈素。
化合物 4 黄色粉末，1H NMＲ (400 MHz，DM-
SO-d6)δ:10． 52 (1H，s，OH-4) ，10． 50 (1H，s，OH-
6) ，7． 42 (1H，s，OH-2) ，6． 55 (2H，d，J = 8 Hz，H-
3，5) ，6． 92 (2H，d，J = 8 Hz，H-2，6) ，5． 73
(1H，d，J = 4 Hz，H-5) ，5． 76 (1H，d，J = 4 Hz，H-
6) ，2． 90 (1H，d，J = 8 Hz，H-α) ，2． 88 (1H，d，J = 8
Hz，H-α) ，1H NMＲ的数据与文献［6］报道基本一致，
鉴定该化合物为墨沙酮。
化合物 5 黄色粉末，1H NMＲ (400 MHz，DM-
SO-d6)δ:12． 63 (1H，s，OH-4) ，9． 56 (1H，s，OH-
3) ，7． 30 (1H，d，J = 2 Hz，H-2) ，7． 27 (1H，d，J
= 8． 0 Hz，H-6) ，6． 78 (1H，d，J = 2 Hz，H-5) ，
6. 42 (1H，d，J = 2 Hz，H-8) ，4． 93，4． 70，4． 60，3． 96
(m，糖上氢质子) ，0． 78 (3H，d，J = 5． 6 Hz，CH3，
糖上氢质子) ，1H NMＲ的数据与文献［7］报道基本一
致，鉴定该化合物为山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。
化合物 6 微黄色针状结晶，溶于甲醇，10%浓
硫酸乙醇溶液喷洒加热显粉红色。1H NMＲ (400
MHz，DMSO-Ｒ波谱数据与文献报道一致［8］鉴定该
化合物为 4，5，7-三羟基-黄烷-4-醇。
化合物 7 棕黄色粉末， 1H NMＲ (400 MHz，
DMSO-d6)δ:6． 19 (1H，s，H-6) ，6． 40 (1H，s，H-8) ，
6． 88 (1H，d，J = 8． 0 Hz，H-5) ，7． 54 (1H，d，J =
8． 0 Hz，H-6) ，7． 67 (1H，s，H-2) ，9． 60 (1H，s，OH-
4) ，9． 31 (1H，s，OH-3) ，10． 78 (1H，s，OH-7) ，
12. 60 (1H，s，OH-5) ，1H NMＲ波谱数据与文献报道
基本一致［9］鉴定该化合物为槲皮素。
化合物 8 浅黄色粉末，1H NMＲ (400 MHz，
DMSO-d6)δ:12． 97 (1H，s，OH-5) ，7． 42 (1H，d，J
= 8． 4 Hz，H-6) ，7． 39 (1H，d，J = 2． 4 Hz，H-2) ，
6． 98 (1H，d，J = 8． 4 Hz，H-5) ，6． 66 (1H，s，H-
3) ，6． 44 (1H，d，J = 2． 4 Hz，H-8) ，6． 18 (1H，d，J
= 2． 4 Hz，H-6) ，1H NMＲ 的数据与文献［10］报道基
本一致，鉴定该化合物为木犀草素。
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(下转第 1586 页)
1251Vol. 25 李 丽等:冻绿茎部化学成分的研究
3 结论
乙醇分级沉淀得到的翘鳞肉齿菌多糖各个组分
均表现出较好的抗氧化活性，SAP-4 的抗氧化能力
最强。在测定的质量浓度范围，各个组分对 DPPH
自由基的清除能力均随质量浓度增大而增大，SAP-4
清除 DPPH自由基的能力最强，EC50值为 0． 029 g /
L，与阳性对照 Vc 基本相当。在 0． 01 ～ 0． 1 g /L 的
质量浓度范围内，翘鳞肉齿菌各多糖组分的还原力
随着浓度的增加而增加，其中 SAP-4 的还原力最强，
浓度为 0． 1 g /L时，吸光度为 1． 108。各组分清除羟
基自由基的能力均较低，在质量浓度为 10 g /L 时，
各个组分的清除率均未达到 50%。5 个多糖组分具
有较高的螯合铁离子能力，SAP-4 对铁离子的螯合
能力最强，EC50值为 1． 208 g /L。
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