全 文 ：宁夏医科大学学报
Journal of Ningxia Medical University
第 35 卷 4 期
2013 年 4 月
疗。有文献报道［6］，养血清脑颗粒与百忧解在抗
抑郁方面疗效相当，尤在改善躯体症状方面，养血
清脑颗粒优于百忧解。近些年，养血清脑颗粒临
床普遍用于治疗头痛、头晕、眩晕、失眠、脑供血不
足、高血压等疾病，疗效显著，安全可靠。随着对
该药的深入研究，其在临床上的用途越来越广
泛［7］。通过本文观察结果显示，养血清脑颗粒与
多塞平在抗抑郁改善睡眠等方面疗效确切，养血
清脑颗粒在治疗抑郁症状的同时改善脑卒中症
状，安全性高，作用时间较快，可见其治疗卒中后
抑郁疗效较为可靠，值得临床推广。
参考文献:
［1］ 陈娟，刘红霞，赵雷．脑卒中后抑郁状态与神经功能
缺损程度的相关性研究［J］． 中国误诊学杂志，
2006，6(15) :2905 － 2906．
［2］ Williams LS，Ghose SS，Swindle RW． Depression and
othermental health diagnoses increase mortality risk af-
ter ischemicstroke ［J］． Am J Psychiatry，2004，161
(6) :1090 － 1095．
［3］ 中华神经科学会，中华神经外科学会． 各类脑血管
疾病诊断要点［J］． 中华神经科杂志，1996，29
(6) :379．
［4］ Angelelli P，Paolucei S，Biovona U，et al． Development
of neuropsychiatric Symptoms in poststroke:a cross －
sectional study［J］． Acta Psychiatr Scand，2004;110:
55 － 63．
［5］ Kem PG，Kronenb erg G． Depressed new neurons a-
dult hippocampal neur ogenesis and a cel － lular plas-
ticity hypothesis of major depression［J］． Biol Psychiat
ry，2003，54(5) :499 － 503．
［6］ 赵铎．养血清脑颗粒治疗脑卒中后抑郁疗效观察
［J］．中国实用神经疾病杂志，2011，14(13) :2154．
［7］ 唐卡毅． 养血清脑颗粒临床应用进展［J］． 中国药
房，2009，20(27) :2154．
(责任编辑:路锦绣)
文章编号:1674 － 6309(2013)04 － 0472 － 04
·技术与方法·
鹅绒藤中总生物碱富集工艺的研究
芦 婷1， 郭 雯2， 刘芷含2， 耿 青1， 王 妍3
(1．宁夏医科大学临床医学院，银川 750004; 2．宁夏医科大学检验学院，银川 750004;
3．宁夏医科大学基础医学院化学系，银川 750004)
摘要:目的 对鹅绒藤中总生物碱的富集工艺条件进行优化。方法 以鹅绒藤提取物的量为考察指标，通过
三因素三水平正交设计实验对鹅绒藤提取条件进行研究，确定最佳提取条件;在此基础上，以生物碱的摩尔
数为考察指标，通过酸碱滴定法测定生物碱的含量，通过静态吸附法确定备用大孔树脂型号，通过生物碱沉
淀反应确定总生物碱富集部位的乙醇洗脱剂浓度，最后通过三因素三水平正交设计实验确定鹅绒藤中的总
生物碱富集工艺的最佳条件。结果 (1)鹅绒藤提取工艺的最佳提取条件为:70%的乙醇，70℃的提取温度，
3h的提取时间;(2)鹅绒藤中总生物碱富集工艺的最佳条件为:用 D －101 大孔树脂，6 倍柱体积的洗脱剂，1∶
8的径高比，1mL·min －1的洗脱剂流速。结论 通过验证性实验证明以上工艺有较好的重复性，方法可行。
关键词:鹅绒藤;总生物碱;正交设计;富集工艺
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B
收稿日期:2012 －05 －18
作者简介:芦婷(1989 －) ，女，临床医学大学本科四年级学生。
通信作者:王妍(1958 －) ，女，教授，主要从事天然药物化学研究。
鹅绒藤(Cynanchum Chinense R． Br．)为萝摩
科鹅绒藤属(Cynanchum)植物，异名羊奶角或牛
皮消。资源极为丰富，夏、秋间随用随采［1］。味
苦、性寒，有祛风解毒、健胃止痛之功效，全株具白
色乳汁，民间常用鹅绒藤乳汁治疗寻常性疣
赘［2］，也有用于治疗耳乳突状瘤［3］和甲癣的报
道［4］。迄今为止，在鹅绒藤属的很多植物中发现
生物碱类化合物，如老瓜头［5］中的(13aR，14R)－
14 －羟基 － 7 －脱甲氧娃儿藤碱和(13aR，14R)－
14 －羟基 － 7 －脱甲氧娃儿藤碱氮氧化物，催吐白
薇［6］中的(－ )－ R － 13α － 6 － O － desmethy
lsecoanto － fine 等等;徐文友等［7］已由理化分析
·274·
DOI:10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2013.04.004
第 35 卷 4 期
2013 年 4 月
宁夏医科大学学报
Journal of Ningxia Medical University
发现鹅绒藤主含甾体皂苷和生物碱，为祛风解毒、
健骨止痛及外用治疗寻常性疵赘的主要成分。截
至目前仍未有从植物鹅绒藤中分离得到生物碱类
单体化合物的报道，而总生物碱的富集是进行单
体分离的前提。鉴于鹅绒藤中含有生物碱类物质
的事实，本文主要进行了生物碱富集工艺研究，为
鹅绒藤总生物碱未来的药理活性研究提供基础。
1 仪器与材料
1． 1 材料 宁夏鹅绒藤，于 2008 年 8 月采自宁
夏银川贺兰山，经鉴定为 Cynanchum chinense R．
Br．;大孔树脂 D － 101、AB － 8、DA － 201 购于北
京易慧得公司;碘化铋钾购于上海华壹生物科技
有限公司;氢氧化钠、盐酸、乙醇等均为市售分
析纯。
1． 2 仪器 电子恒温水浴锅(上海精宏实验设
备有限公司) ，旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器
厂) ，碱式滴定管，电子天平(梅特勒 －托利多仪
器有限公司)。
2 实验方法及结果
2． 1 鹅绒藤的提取工艺的研究
2． 1． 1 正交实验设计 设计三因素三水平的正
交试验表，对影响鹅绒藤提取的因素(提取时间、
料液比、乙醇浓度)进行综合考察，以鹅绒藤提取
物的量为考察指标，选用 L9(3
4)正交表对工艺进
行研究。因素水平表设置见表 1。
表 1 因素水平
水平
A
乙醇浓度 /%
B
提取温度 /℃
C
提取时间 /h
1 70 70 1
2 80 80 2
3 90 90 3
2． 1． 2 供试品制备与正交实验结果 称取鹅绒
藤粉末(鹅绒藤地上部分粉碎)10g，共 9 份，按照
L9(3
4)正交设计实验表头设计和安排实施试验，
进行回流提取，提取 3 次，合并提取液，过滤，浓缩
后置于玻璃皿中，自然晾干，称量。实验结果见
表 2。
经方差分析得，A 的显著性水平为 0. 816，B
的显著性水平为 0． 427，C 的显著性水平为
0. 332。三个因素差异均无统计学意义(P ＞
0. 05) ，但影响次序依次为 C ＞ B ＞ A，即提取
时间 ＞提取温度 ＞乙醇浓度;由表 2 可知，A应选
1，B选 1，C选 3，即最佳条件为 A1B1C3，即 70%
的乙醇，提取温度为 70℃，提取时间为 3h。
表 2 鹅绒藤提取工艺 L9(3
4)正交试验及结果
实验号 A B C 提取物量 /g
1 1 1 1 1 1． 730
2 1 2 2 2 1． 853
3 1 3 3 3 2． 230
4 2 1 2 3 2． 226
5 2 2 3 1 1． 945
6 2 3 1 2 1． 590
7 3 1 3 2 2． 524
8 3 2 1 3 1． 566
9 3 3 2 1 1． 145
K1 5． 813 6． 480 4． 465
K2 5． 761 5． 364 5． 224
K3 5． 235 4． 965 6． 669
2． 1． 3 最佳提取工艺的验证实验 取鹅绒藤地
上部分粉末 10g，共 3 份，在 70℃下用 70%乙醇进
行回流，提取 3 次，每次 3h。滤过，合并滤液，浓
缩后置于玻璃皿中，自然晾干，称量。
表 3 验证实验结果
样品 提取物量 /g 平均值 相对标准偏差(RSD)/%
1 2． 605
2 2． 613 2． 609 0． 15
3 2． 609
从表 3 的验证实验结果可以看出，RSD =
0. 15% ＜5%，说明此方法有较好的重复性，方法
可行。
2． 2 鹅绒藤总生物碱富集工艺的研究
2． 2． 1 鹅绒藤中生物碱的鉴别 碘化铋钾试剂
(Dragendorff试剂，BiI3·KI)在酸性溶液中与生
物碱反应生成桔红色沉淀。可以利用这一沉淀反
应对鹅绒藤所含的生物碱进行鉴别。
2． 2． 2 鹅绒藤中生物碱含量的测定 由于目前
还未有研究人员从鹅绒藤中分离得到单体生物碱
化合物，也不清楚鹅绒藤中含有哪种生物碱，只是
通过定性实验确认鹅绒藤中含有生物碱，因此本
文采用常用的反式酸碱滴定法来测定鹅绒藤中生
物碱的含量。
首先将过量的盐酸(1mol·L －1)加入所测药
液中，滴加甲基红 －亚甲蓝指示剂，溶液显橙红
色，用 0． 1mol·L －1的氢氧化钠进行滴定，使颜色
转变为黄绿色，记录消耗氢氧化钠的体积。
2． 2． 3 静态吸附量的考察 分别取处理好的大
孔吸附树脂 AB － 8、D － 101、DA － 201 各 10g(湿
重) ，置于 150mL具塞锥形瓶中;取鹅绒藤提取工
艺表 2 中实验 7 所得的 2． 524g 浸膏用 150mL 的
水充分溶解，平均分成 3 份，分别加入 3 种大孔树
·374·
宁夏医科大学学报
Journal of Ningxia Medical University
第 35 卷 4 期
2013 年 4 月
脂中，放置 24h，使之充分吸附，过滤，向每份滤液
中加入 1mol·L －1盐酸，滴加 1 滴甲基红 －亚甲
蓝指示剂，溶液显橙红色，使生物碱完全被中和，
用 0． 1mol·L －1的氢氧化钠进行滴定，使颜色转
变为黄绿色，记录消耗氢氧化钠的体积(见表 4)。
表 4 不同树脂对鹅绒藤中生物碱的
吸附情况(氢氧化钠消耗量)
大孔树脂型号 氢氧化钠消耗量 /mL
AB － 8 8． 0
D － 101 8． 4
DA － 201 7． 6
以上对生物碱的测定采用的是反滴定法，因
此所消耗的氢氧化钠越多，说明滤液中生物碱的
含量越少，反而被大孔树脂吸附的越多，说明大孔
树脂对鹅绒藤生物碱的吸附作用越强。因此，由
表 4 可得出结论:通过对 3 种大孔树脂静态吸附
的考察发现，D －101 大孔树脂对鹅绒藤生物碱吸
附效果最好，所以选用 D － 101 大孔树脂对鹅绒
藤总生物碱富集工艺进行研究。
2． 2． 4 鹅绒藤总生物碱洗脱剂比例的确定 采
用湿法上样法，将样品以适量蒸馏水，超声使其溶
解完全，倒入装有活化好的 D101 大孔树脂的柱
中，依次用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙
醇、100%乙醇进行洗脱，收集各洗脱液，并使用旋
转蒸发仪浓缩至一定的体积，然后利用碘化铋钾
试剂对各洗脱组分进行生物碱沉淀试验。
通过生物碱沉淀试验发现只有 20%乙醇洗
脱部分呈阳性，有桔红色沉淀生成，其他各组分均
呈阴性;实验结果表明大孔树脂对鹅绒藤的生物
碱具有较好的富集作用，生物碱集中在 20%乙醇
洗脱部分。
2． 2． 5 正交实验设计 设计三因素三水平的正
交试验表，对影响鹅绒藤总生物碱富集的影响因
素(洗脱剂用量、洗脱剂流速、径高比)进行综合
考察，以消耗氢氧化钠的量为考察指标，选用 L9
(34)正交表对工艺进行研究。因素水平表设置
见表 5。
表 5 因素水平
水平
A
洗脱剂用量 /
BV
B
洗脱剂流速 /
(mL·min －1)
C
径高比
1 2 1 1∶ 4
2 4 3 1∶ 6
3 6 5 1∶ 8
称取鹅绒藤粉末(鹅绒藤地上部分粉碎)
210g，按鹅绒藤提取的最佳工艺进行提取，浓缩，
自然晾干成浸膏，取浸膏共 9 份，每份 1g，充分溶
解，上样于已装好的大孔树脂柱，首先用蒸馏水洗
脱，直至洗脱液无色为止;然后换用 20%乙醇进
行洗脱，收集洗脱液，向洗脱液中加入过量1mol·
L －1盐酸，滴加 1 滴甲基红 －亚甲蓝指示剂，溶液
显橙红色，使生物碱完全被中和，用 0． 1mol·L －1
的氢氧化钠进行滴定，使颜色转变为黄绿色，记录
消耗氢氧化钠的体积，计算生物碱的摩尔数，公式
如下。按 L9(3
4)正交设计实验表设计安排实施
试验。实验结果见表 6。生物碱的摩尔数 =盐酸
的摩尔数 － 0． 1mol·L －1 ×消耗氢氧化钠体积数
(mL)。
表 6 鹅绒藤总生物碱富集工艺 L9(3
4)正交试验及结果
实验号 A B C
生物碱的摩尔数 /
(mol·10 －3)
1 1 1 1 1 0． 32
2 1 2 2 2 0． 57
3 1 3 3 3 0． 74
4 2 1 2 3 0． 95
5 2 2 3 1 1． 03
6 2 3 1 2 0． 76
7 3 1 3 2 2． 44
8 3 2 1 3 1． 35
9 3 3 2 1 1． 14
K1 1． 63 3． 71 2． 43
K2 2． 74 2． 95 2． 66
K3 4． 93 2． 64 4． 21
经方差分析得，A 的显著性水平为 0． 128，B
的显著性水平为 0． 576，C 的显著性水平为
0. 305。三个因素差异均无统计学意义(P ＞
0. 05) ，但影响次序依次为 A ＞ C ＞ B，即洗脱
剂用量 ＞径高比 ＞洗脱剂流速;由表 6 单因素统
计量表分析可知，A应选 3，B选 1，C 选 3，即最佳
条件为 A3B1C3，即 6 倍柱体积的洗脱剂，1 ∶ 8的
径高比，1mL·min －1的洗脱剂流速。
2． 2． 6 最佳富集工艺的验证实验 取鹅绒藤地
上部分取浸膏 1g，共 3 份，充分溶解，上样于已装
好的径高比为 1 ∶ 8的大孔树脂柱，首先用蒸馏水
洗脱，直至洗脱液无色为止;换用 6 倍柱体积的
20%乙醇进行洗脱，洗脱剂流速为 1mL·min －1，
收集洗脱液，向洗脱液中加入过量 1mol·L －1盐
酸，滴加 1 滴甲基红 －亚甲蓝指示剂，溶液显橙红
色，使生物碱完全被中和，用 0. 1mol·L －1的氢氧
化钠进行滴定，使颜色转变为黄绿色，记录消耗氢
氧化钠的体积，计算生物碱的摩尔数，公式如下:
·474·
第 35 卷 4 期
2013 年 4 月
宁夏医科大学学报
Journal of Ningxia Medical University
生物碱的摩尔数 = 盐酸的摩尔数 － 0． 1mol·
L －1 ×消耗氢氧化钠体积数(mL)
表 7 验证实验结果
样品
生物碱的摩尔数 /
(mol·10 －3)
平均值
相对标准偏差
(RSD)/%
1 2． 43
2 2． 41 2． 4267 0． 63
3 2． 44
由表 7 验证实验结果可以看出，RSD =
0. 63% ＜5%，说明此方法有较好的重复性，方法
可行。
3 讨论
通过正交实验对鹅绒藤的提取工艺进行了研
究，确定最佳工艺为:在 70℃下用 70%乙醇对鹅
绒藤进行回流提取 3 次，每次 3h;最佳提取工艺
的验证实验说明提取工艺有较好的重复性，方法
可行。通过正交实验对鹅绒藤总生物碱的富集工
艺进行了研究，确定的最佳工艺条件为:取鹅绒藤
地上部分取浸膏，充分溶解，上样于已装好的径高
比为 1∶ 8的大孔树脂柱，首先用蒸馏水洗脱，直至
洗脱液无色为止;换用 6 倍柱体积的 20%乙醇进
行洗脱，洗脱剂流速为 1mL·min －1，收集洗脱液;
验证实验说明最佳提取工艺的重现性好，方法
可行。
目前为止还没有研究者从鹅绒藤中分离得到
生物碱单体，也无法对生物碱含量进行准确测定。
本文采用常用的酸碱滴定法对鹅绒藤中的生物碱
含量进行测量，根据消耗的氢氧化钠的量转化为
鹅绒藤中生物碱的摩尔量，并根据鹅绒藤中生物
碱的摩尔量的大小来确定大孔树脂富集鹅绒藤总
生物碱的最佳工艺，得到生物碱纯度较高的总生
物碱，为其药理学活性的研究和进一步分离提纯
提供了方法学基础。
参考文献:
［1］ 刑世瑞．宁夏中药志(下) ［M］．银川:宁夏人民出版
社，2006:173．
［2］ 刑世瑞． 宁夏中药资源［M］． 银川:宁夏人民出版
社，1987:165．
［3］ 李红苹．鹅绒藤乳汁治疗耳乳突状瘤 1 例报告［J］．
湖南医学高等专科学校学报，1999，1(2) :18．
［4］ 王淑珍． 鹅绒藤治疗甲癣的疗效观察［J］． 天津药
学，1996，8(3) :49．
［5］ 吴振洁，丁林生，赵守训．鹅绒藤属植物的化学成分
和药理作用［J］． 国外医药:植物药分册，1991，6
(4) :147 － 154．
［6］ Staerk D，Lykkeberg AK，Christensen J，et al． In vitro
cytotoxic activity of phenanthroindolizidine alkaloids
from Cynanchum vincetnxicum and Tylophora tanakae
against drug － sensitive and multidrug － resistant canc-
er cells［J］． J Nat Prod，2002，65(9) :1299 － 1302．
［7］ 徐文友．鹅绒藤的鉴定学研究［J］．中国野生植物资
源，1995，2:23 － 26．
(责任编辑:任义芳)
文章编号:1674 － 6309(2013)04 － 0475 － 05
·综述·
中药有效成分诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞株凋亡机制研究
申淑珍， 白晓川
(宁夏医科大学总医院血液科，银川 750004)
关键词:NB4 细胞;凋亡机制;中药有效成分
中图分类号:R733． 71 文献标识码:B
收稿日期:2012 －09 －14
基金项目:宁夏医科大学重点孵育项目(XZ201010)
作者简介:申淑珍(1969 －) ，女，宁夏人，副主任医师，从事临床血
液工作及恶性血液病研究。
通信作者:白晓川，男，主任医师，教授，从事临床血液工作及恶性血
液病研究。E －mail:xiaochuan －5501@163． com
白血病严重危害人类的健康，其发生、发展和
转归与细胞分化及凋亡失控密切相关。凋亡失控
是白血病发生、发展的主要因素之一。细胞凋亡
(apoptosis)是多细胞生物为了清除异常细胞、维
持内环境稳定、防止癌变，而发生的有序的、主动
的自然死亡过程。在正常情况下细胞的增殖与凋
·574·