全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
为了使穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯能够达到
更高纯度，本研究先用 20% 的乙醇进行除杂，研究
发现除杂效果较佳，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯
无损失。通过对乙醇体积分数进行考察，确定 35%
乙醇，55%乙醇分别洗脱穿心莲内酯和脱水穿心莲
内酯效果较好，提取物中 2 种内酯的质量分数分别
达到 48. 59%，19. 87%，总内酯 68. 46%。
［参考文献］
［1］ Hidalgo M A， Romem A， Figueroa J， et
al. Andrographolide interferes with binding of nuclear
factor kappa B to DNA in HL-60 derived neutrophilic cell
［J］. Br J Pharmacol，2005，144(5) :680.
［2］ 洪涛，覃慧敏，王卫华 . 穿心莲内酯对铜绿假单胞菌
QS 毒力因子的影响［J］. 中国中药杂志，2006，31
(12) :46.
［3］ 周锋，秦健，朱建中 . 莲必治注射液(穿心莲内酯)对
免疫功能的调节作用［J］. 南京医科大学学报:英文
版，2004(1) :40.
［4］ 戴桂馥 . 穿心莲内酯对人食管癌 Ec9706 细胞增殖和
凋亡的影响［J］. 中国新药杂志，2006，15(16) :1363.
［5］ Jiang C G， Andrographolide inhibitis the adhesion of
gastric cancer to endothelial cells by blocking E-selecting
expressing［J］. Anticancer Res，2007，27(4B) :2439.
［6］ 中国药典 . 一部［S］. 2010:251.
［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20111026(008)
［基金项目］ 中国中医科学院自主选题项目(Z02063)
［第一作者］ 李姝蓓，硕士研究生，Tel:010-64014347，E-mail:zzyblsb@ sina． com
［通讯作者］ * 杨岚，硕士，研究员，从事中药有效成分和质量标准研究，Tel:010-64014347，E-mail:ylan_66@ 163． com
正交设计法优选荚果蕨贯众提取工艺
李姝蓓，张东，杨岚 * ，杨洪军
(中国中医科学院中药研究所，北京 100700)
［摘要］ 目的:对荚果蕨贯众提取工艺进行优化。方法:采用 L9(3
4)正交设计，以总黄酮得率为考察指标，紫外比色法测
定含量，考察乙醇体积分数、料液比、提取时间和提取次数 4 个因素对提取率的影响。结果:最佳提取工艺为 12 倍量 70%乙
醇提取 1. 0 h，2 次。结论:优选的荚果蕨贯众提取工艺稳定、可靠。
［关键词］ 荚果蕨贯众;正交设计;提取工艺
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)08-0025-03
Optimization of Extraction Technology for
Matteuccia struthiopteris by Orthogonal Design Method
LI Shu-bei，ZHANG Dong，YANG Lan* ，YANG Hong-jun
(Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China )
［Abstract］ Objective:To optimize extraction process of Matteuccia struthiopteris. Method:Orthogonal
test was carried out to investigate influences of the concentration of ethanol，material-liquid ratio，extraction time
and extraction times on extraction with yield of total flavonoids as index. Result:Optimum extraction technology
was as follows:the concentration of ethanol was 70%，ratio of material-solvent was 1∶ 12 (g·mL － 1) ，extracted 2
times with 1 h per time. Conclusion:Optimized extraction process was stable and reasonable.
［Key words］ Matteuccia struthiopteris;orthogonal design;extraction technology
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第 18 卷第 8 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 8
Apr．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.08.005
荚果蕨贯众为球子蕨科荚果蕨属植物带叶柄基
的干燥根茎，具有清热解毒、杀虫止血的功效。据
《中药志》记载，荚果蕨贯众是商品贯众的一种，主
产于我国东北三省、河北、四川、陕西及西藏，收载于
北京市、湖南省、内蒙古自治区等地方药材标准中。
荚果蕨贯众水提液具有抗病毒、抗虫、抗凝血、抗菌
等药理活性［1-2］，化学成分有黄酮类、甾萜类、酚类
和有机酸等［3-6］，其中黄酮类成分为其主要的活性
物质群。目前有关荚果蕨贯众总黄酮提取工艺和含
量测定的研究未见报道。本文首次建立了荚果蕨贯
众总黄酮的含量测定方法，并以总黄酮得率为考察
指标，对荚果蕨贯众的提取工艺进行优化。
1 材料
1200 型 高 效 液 相 色 谱 仪 (美 国 Agilent) ，
Sartorius BP 211D 型分析天平(德国赛多利斯) ，UV-
1700 型紫外-可见分光光度计(日本岛津) ，98-1-B
型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)。
药材采集自重庆南川金佛山，由重庆市药物种
植研 究 所 易 思 荣 副 研 究 员 鉴 定 为 Matteuccia
struthiopteris(L. )Todaro 的根茎。荚果蕨素对照品
(自制，经 HPLC 检测纯度 ＞ 98%) ，乙腈为色谱纯，
水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 提取物中总黄酮含量测定
2. 1. 1 对照品溶液制备 精密称取荚果蕨素对照
品 10. 94 mg，置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释
至刻度，摇匀，从中精密量取 5 mL，置 50 mL 量瓶
中，甲醇稀释至刻度，即得 21. 88 mg·L － 1的荚果蕨
素对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液制备 取荚果蕨贯众提取物粉
末约 20 mg，精密称定，置 100 mL 量瓶中，甲醇溶解
并稀释至刻度，摇匀，从中精密量取 1 mL，置 10 mL
量瓶中，甲醇稀释至刻度，即得。
2. 1. 3 标准曲线绘制 分别精密量取 21. 88 mg·
L － 1的荚果蕨素对照品溶液 1，2，3，4，5，6 mL，用甲
醇分别定容于 10 mL 量瓶中，以甲醇为空白，用紫
外-可见分光光度计在 289 nm 波长下测定吸光度
(A)。以荚果蕨素对照品质量浓度(C)为横坐标，A
为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程 A = 0. 060
65C + 0. 006 19(R2 = 0. 998 76) ，表明荚果蕨素在
2. 188 ～ 13. 128 mg·L － 1与吸光度呈良好线性关系。
2. 1. 4 精密度试验 精密称取同一样品粉末
0. 019 61 g，按 2. 1. 2 项下方法配制溶液。于289 nm
波长处连续 6 次测定 A，RSD 0. 19%，表明仪器精密
度良好。
2. 1. 5 稳定性试验 精密称取同一样品粉末
0. 021 35 g，甲醇溶解并定容于 100 mL 量瓶中，从中
精密量取 5 mL，置 50 mL 量瓶中，甲醇稀释至刻度。
分别于 1，2，5，6，8，12，24 h 时在 289 nm 处测定 A，
结果 RSD 2. 12%，表明该溶液在 24 h 内稳定性
良好。
2. 1. 6 重复性试验 精密称取同一样品粉末 6 份，
按 2. 1. 2 项下方法制备溶液，测定 A，计算总黄酮均
值质量分数为 21. 54%，RSD 2. 14%。
2. 1. 7 加样回收率试验 精密称取同一样品(含
量 21. 54%)粉末 6 份，置 100 mL 量瓶中，分别加入
1 mL 1. 951 g·L － 1荚果蕨素对照品溶液，甲醇稀释
至刻度，从每份溶液中分别精密吸取 1 mL，置 10
mL 量瓶中，甲醇稀释至刻度。以甲醇为空白，在
289 nm 波长处测定 A，计算总黄酮含量，结果见
表 1。
表 1 荚果蕨素加样回收率试验
取样量
/ g
样品
含量
/mg
实测量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
0. 011 33 2. 441 4. 368 98. 77
0. 011 46 2. 469 4. 371 97. 49
0. 011 05 2. 380 4. 252 95. 95
98. 10 1. 37
0. 011 53 2. 484 4. 427 99. 59
0. 011 18 2. 408 4. 343 99. 18
0. 011 12 2. 395 4. 299 97. 59
注:加入量均为 1. 951 mg。
2. 1. 8 样品含量测定 精密称取荚果蕨贯众提取
物样品，按 2. 1. 2 项下方法制备供试品溶液。以甲
醇为空白，在 289 nm 波长处测定 A，计算样品中总
黄酮质量分数。
2. 2 正交设计法优选提取工艺 在预试验的基础
上，选取乙醇体积分数(A)、料液比 (B)、提取时间
(C)、提取次数(D)作为试验考察因素，每个因素设
定 3 个水平，以总黄酮得率为评价指标，采用L9(3
4)
表安排试验，各因素水平的设计见表 2。
表 2 荚果蕨贯众提取工艺因素水平
水平
A 乙醇体积
分数 /%
B 料液比
C 提取时间
/ h
D 提取次数
/次
1 50 1∶ 4 1. 0 1
2 70 1∶ 8 1. 5 2
3 90 1∶ 12 2. 0 3
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第 18 卷第 8 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 8
Apr．，2012
称取荚果蕨贯众粗粉 100 g，按表 3 安排试验，
进行回流提取、浓缩、减压干燥，得干膏，测定其吸光
度，计算总黄酮含量及总黄酮得率，结果见表 3，方
差分析见表 4。
表 3 荚果蕨贯众提取工艺正交试验安排
No. A B C D
总黄酮 /%
质量分数 得率
1 1 1 1 1 20． 54 3. 98
2 1 2 2 2 20． 48 6. 85
3 1 3 3 3 19． 10 7. 22
4 2 1 2 3 22． 46 7. 21
5 2 2 3 1 23． 23 6. 06
6 2 3 1 2 23． 17 7. 99
7 3 1 3 2 27． 31 6. 50
8 3 2 1 3 23． 80 6. 97
9 3 3 2 1 26． 63 6. 19
得 K1 6. 02 5. 90 6. 31 5. 41
率 K2 7. 09 6. 63 6. 75 7. 11
K3 6. 55 7. 13 6. 59 7. 13
R 1. 07 1. 24 0. 44 1. 72
表 4 荚果蕨贯众提取工艺总黄酮得率方差分析
变异来源 SS f MS F P
A 1. 717 2 0. 859 0. 673
B 2. 319 2 1. 160 0. 909
＞ 0. 05
C(误差) 0. 294 2 0. 147 0. 115
D 5. 872 2 2. 936 2. 302
由表 3 结果可知，4 个因素对荚果蕨贯众总黄
酮得率的影响次序为 D ＞ B ＞ A ＞ C，最佳提取工艺
为 A2B3C2D3。以极差最小的 C 因素为误差项进行
方差分析表明，A，B，D 因素对总黄酮得率的影响均
无显著差异。因此，综合试验结果及生产成本考虑，
确定最佳提取工艺为 A2B3C1D2，即 12 倍量 70% 乙
醇提取 2 次，每次 1. 0 h。
为考察上述优化后最佳提取工艺的合理性，按
该提取工艺条件进行 3 批验证试验，分别测定荚果
蕨提取物中总黄酮的含量，计算总黄酮得率，结果平
均得率为 7. 66%，RSD 1. 29%。说明该工艺可行。
3 讨论
由于黄酮类化合物具有广泛的药理活性，目前
已成为国内外天然药物开发利用研究的热点，且其
资源来源广泛，在大多天然药物中均含有黄酮类化
合物。本试验采用分光光度法测定荚果蕨贯众中总
黄酮的含量，采用正交实验优化提取工艺，结果通过
3 批试验验证，证明该工艺提取得率高、重复性好。
［参考文献］
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究(Ⅱ) ［J］. 中国中药杂志，2004，29(7) :647.
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［责任编辑 仝燕］
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李姝蓓，等:正交设计法优选荚果蕨贯众提取工艺