全 文 ：野生毛葡萄籽原花青素抗氧化活性的研究
郑燕升 , 莫倩 　(广西工学院轻化系 ,广西柳州 545006)
摘要　[目的] 为进一步开发利用野生毛葡萄籽原花青素提供依据。[方法] 选择清除超氧阴离子自由基(O2-·)和羟基自由基(·OH)2
个方面 ,对野生毛葡萄籽原花青素的抗氧化活性进行测定。[结果] 野生毛葡萄籽原花青素对O2-·和·OH均具有较强的清除能力 ,对
O2
-·、·OH野生毛葡萄籽原花青素的 IC50分别为 0.37、0.33 mg/ml。[结论] 野生毛葡萄籽原花青素具有较强的抗氧化活性。
关键词　野生毛葡萄;原花青素;抗氧化活性
中图分类号　S58　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2008)18-07512-02
Antioxidation Effect of Proanthocyandins from Seeds of Wild Vitis quinquangularis
ZHENG Yan-sheng et al　(Department of Biological and Chemical Engineering , Guangxi University of Technology , Liuzhou , Guangxi 545006)
Abstract　[Objective] The research aimed to provide scientific basis for developing proanthocyandins fromwild Vitis quinquangularis.[Method] The rad-
ical scavenging effect of proanthocyandins from wild Vitis quinquangularis was studied at different systems(O-·and·OH)[ Result] Proanthocyandins from
wild Vitis quinquangularis had strong scavenging effect on free radicals generated by diferent systems.For O2-· and·OH , the IC50 of proanthocyandins
from wild Vitis quinquangularis was 0.37 and 0.33mg/ml.[ Conclusion] Proanthocyandins from wild Vitis quinquangularis had strong antioxidant activity.
Key words　Wild Vitis quinquangularis;Proanthocyandins;Antioxidant activity
基金项目　广西教育厅资助项目(200708LX198);广西工学院基金项目
(院科自 0704104)。
作者简介　郑燕升(1964-),男 ,广西贵港人 ,硕士 ,副教授 , 从事天然
有机化学方面的研究。
收稿日期　2008-04-16
　　在自然界中 ,多酚类物质广泛存在 ,并作为天然的抗氧
化剂而广泛应用。对于葡萄籽原花青素抗氧化性的研究报
道很多[ 1-4] ,既包括动物体内抗氧化试验 ,又包括体外细胞
培养及用化学方法测定 。研究表明 ,葡萄籽原花青素是迄今
为止所发现的最有效的自由基清除剂之一 ,特别是低聚花青
素可以清除体内的自由基和活性氧 ,能预防因人体血液中低
密度脂蛋白氧化而引起的动脉硬化[ 5] 。许多研究表明 ,原花
青素抗氧化 、清除自由基的能力远远强于VE和 Vc ,能防治
80多种因自由基引起的疾病 ,包括心脏病 、关节炎等 ,还具有
改善人体微循环的功能[ 6-7] 。笔者研究了自制的野生毛葡
萄籽原花青素产品在 2种体系中清除自由基的活性 ,为进一
步开发利用野生毛葡萄原花青素提供一定的科学依据 。
1　材料与方法
1.1　主要仪器与试剂　AL104电子分析天平(梅特勒—托利
多仪器有限公司);WFZUV-2000紫外/可见分光光度计(尤
尼柯仪器有限公司);PHS-25型精密酸度计(上海伟业仪器
厂);ZFD—5250全自动新型鼓风干燥箱(上海智城分析仪器
制造有限公司);2003型恒温磁力加热搅拌器(上海闵行虹浦
仪器厂)。三羟甲基氨基甲烷(Tris)、邻二氮菲 、邻苯三酚 、Fe-
SO4 、H2O2 、乙醇 、丙酮等为国产分析纯试剂。
1.2　试验材料　供试材料为野生毛葡萄籽原花青素 ,自
制[ 8](>95.0%)。
1.3　试验方法
1.3.1　野生毛葡萄原花青素清除超氧阴离子自由基(O2 -·)
的活性。采用邻苯三酚自氧化法[ 9] 。在试管中加入 4.5 ml
Tris-HCl缓冲液(pH值 8.2)和 0.1 ml不同浓度的样品溶液 ,
置于 25 ℃恒温水浴中 20 min ,用微量注射器注入 0.4 ml 经
25 ℃预热的邻苯三酚 ,混合均匀后置于 25 ℃恒温水浴中反
应 4 min ,立即加入 2滴 8 mol/L HCl中止反应。用去离子水
调零 ,420 nm处测定吸光度 ,同时以 0.1 ml 去离子水代替样
品做空白试验 ,则原花青素对 O2-·自由基的清除率按如下
公式计算。
清除率(%)=A空白-A样品
A空白 ×100 (1)
1.3.2　野生毛葡萄原花青素清除羟基自由基(·OH)的活性 。
采用邻二氮菲 -Fe2+氧化法[ 10] 。在试管中依次加入 5
mmol/L邻二氮菲溶液 0.6 ml、磷酸盐缓冲液(pH 值 7.4)0.4
ml和 5 mmol/L Fe2+-EDTA 溶液 0.6 ml;其中 ,加入体积分数
为 0.1%H2O2 0.8 ml作为损伤管 ,加入体积分数为 0.1%H2O2
0.8ml和 1 ml不同浓度的样品溶液作为样品管 ,不加 H2O2
和样品的作为空白管;将各管用无水乙醇定容到 4 ml , 37 ℃
下反应 1 h ,535 nm 处测定吸光度。野生毛葡萄原花青素对
羟基自由基(·OH)的清除率按如下公式计算 。
清除率(%)=A样品-A损伤
A空白-A损伤×100 (2)
2　结果与分析
野生毛葡萄原花青素在邻苯三酚自氧化体系和 Fe2+/
H2O2 氧化体系中清除超氧阴离子自由基(O2 -·)和羟基自由
基(·OH)的试验结果分别见图 1、2 。
图 1　野生毛葡萄原花青素对O2-·的清除效果
Fig.1　Scavenging effect of proanthocyandins from wild Vitis quin-
quangularis on O2
-·
　　由图 1可知 ,邻苯三酚自氧化体系中 ,随着原花青素浓
度的升高 ,清除率也随之升高 。将上述数据进行回归 ,得到
回归方程:
y =11.636x3-151.66 x2+227.4x -13.46(R2=0.964 4) (3)
根据回归方程可求得在该试验条件下野生毛葡萄籽原
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2008 , 36(18):7512-7513　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　刘月娟　责任校对　况玲玲
花青素的 IC50为 0.37 mg/ml。当原花青素质量浓度达 1.0
mg/ml时 ,对超氧阴离子自由基(O2-·)的清除率达 76.1%。
　　由图 2可知 ,在Fe2+/H2O2氧化体系中 ,随着原花青素浓
度的升高 ,清除率也随之升高。将上述数据进行回归 ,得到
回归方程:
y =43.901x3 -186.68x2+235.83x -10.247(R2=0.975 5)(4)
根据回归方程可求得在该试验条件下野生毛葡萄籽原
花青素的 IC50为 0.33 mg/ml 。当原花青素质量浓度达到 1.0
mg/ml时 ,对羟基自由基(·OH)的清除率达到 83.8%。
图 2　野生毛葡萄原花青素对·OH的清除效果
Fig.2　Scavenging effect of proanthocyandins from wild Vitis quin-
quangularis on·OH
3　结论
在邻苯三酚自氧化体系和Fe2+/H2O2 氧化体系中 ,野生
毛葡萄原花青素对超氧阴离子自由基(O2-·)和羟基自由基
　　　　　　　
(·OH)具有较强的清除作用 ,而且存在量效关系 ,质量浓度越
高 ,抗氧化活性越强。当原花青素质量浓度达到 1.0 mg/ml
时 ,对超氧阴离子自由基(O2 -·)、羟基自由基(·OH)清除率
分别达到 76.1%和 83.8%,说明野生毛葡萄籽原花青素为抗
自由基的有效活性成分 。但由于自制的野生毛葡萄原花青
素没有经过精细分离 ,低聚体含量尚未测定 ,低聚体提纯不
够 ,存在聚合度较高的成分 ,对超氧阴离子自由基(O2-·)、羟
基自由基(·OH)清除率的优势还没得到充分体现。
参考文献
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(上接第 7511页)
表 7　续随子油的成分
Table 7 Component of Euphorbia lathyris L.seed oil
序号
No.
化合物
Compound
保留时间∥min Retention time
种子甲酯
Seed methyl ester
油甲酯
Oil methyl ester
相对含量∥%Relative content
种子甲酯
Seed methyl ester
油甲酯
Oil methyl ester
1 豆蔻酸甲酯 11.97 12.48 　　　 0.408 　　　　　　　　0.399
2 十五烷酸甲酯 12.63 12.99 1.142 0.805
3 棕榈油酸甲酯 13.98 13.87 0.113 0.612
4 棕榈酸甲酯 14.21 14.08 5.059 4.591
5 棕榈二烯酸甲酯 14.62 14.95 1.024 0.382
6 十七烷酸甲酯 14.76 15.18 0.211 0.403
7 硬脂酸甲酯 15.08 15.49 0.121 0.413
8 油酸甲酯 15.42 15.85 86.120 85.450
9 亚油酸甲酯 15.54 16.22 1.671 2.219
10 γ-亚麻酸甲酯 16.94 17.87 1.075 1.287
11 花生酸 18.92 19.33 0.413 1.003
12 花生烯酸 19.02 20.09 2.551 2.172
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751336卷 18期　　　　　　　　　　　　　　　　郑燕升等　野生毛葡萄籽原花青素抗氧化活性的研究