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r og 研 究报告
· 研究报告 ·
紫红璋牙菜对ST Z 糖尿病小鼠的降糖作用
文莉 (湖北中医学院药理教研室 武汉 4 30 61 )陈家春 (华中科技大学同济医学院药学院 )
摘 要 目的 :对紫红樟牙菜 4个提取部位的降血糖作用进行筛选 ,并探查其降血糖活性的作用机制是否影响胰岛素的分
泌 、体重 。 方法 : 采用渗渡法提取紫红璋牙菜的 乙醇提取物 , 并将提取物依次萃取分 离出乙醚部位 、 乙酸 乙醋部位 、 正丁 醉部
位及水溶性 4 个部位 。 通过将此 4 个部位对由 ST Z 诱导的 2 型糖尿病小鼠进行抗高血糖作用的药理活性研究 ,根据实验结果
对此 4 个部位进行有效部位筛选 ,设定高低剂量组从而考察其量效关系。 同时观察其对 ST Z 诱导的 2 型糖尿病小鼠给药物 7
d 后对小鼠胰岛素抵抗的影响 。 结果 : 乙酸乙 醋部位及水溶性部位对 ST Z 引起的高血糖小鼠的血糖有较强 的抑制作用 , 而正
丁醇及乙 醚部位则相对较差 。 并且各部位对小鼠胰岛素抵杭有十分显著改善 。 结论 : 乙酸 乙 醋及水溶性部位降血糖作用较
明显 。
关键词 紫红璋牙菜 ; 胰岛素抵抗 ; 高血糖 ; ST z 小鼠
中图分类号 : 2R 85 . 5 文献标识码 : A 文章编号 : 10 8狈g X 《2X() 7 ) 02 一 140 刁3
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a e o l o盯 , Hu b e i C o ll e罗 of Tanr d i t i o n al Ch i n e s e M e d i e i n e , W u h a n 4 3X() 6 1 , Ch i n a ) ; Ch e n J ia e h u n ( H u a -
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th e dur g fo r 7 d即 5 . R es ult : T h e w at e r 一 s ol u b l e a n d i t s e ht e r s o lu b le s e p ar t i o n had th e hy p o gl y e e m ie a c t iv i ty , an d th e e t hy l ac e t a t e fr a e -
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紫红璋牙菜 ( 5 . p un ice a eH m a l ) 是龙胆科璋牙菜属 股份有限公司 ,批号 : 20 06 0 103 。
(孙喇ial L . )[ ’ 〕植物紫红璋牙的干燥全草。 具有清肝利胆 , 1 . 2 仪器与试剂
清热除湿之功效 ,用于肝炎 、 胆囊炎 、 风火牙痛 、 热淋疮痈肿 旋转蒸发器 R5E 2一 8 : 上海亚荣生化仪器厂 ; 真空干燥
毒等症 。 本文采用由链脉佐菌素 ( st er tP oz ot co in , S ZT )诱导 箱 :上海福玛实验设备有限公司 ;怡成超越 JPS 一 型手持式
的 2 型糖尿病小鼠模型 〔’ 〕 , 测定紫红璋牙菜的抗高血糖活 快速全血葡萄糖测试仪 :北京怡成生物电子技术有限公司 ;
性 。 怡成虹吸血糖试条 :北京怡成生物电子技术有限公司 ,生产
1 实验材料 批号 : 20 6 0221 。
1
.
1 药物 链脉佐菌素 : ( s ter p t o z o t o e in s咒 ) C: H 15 N 3 0 7 , 批号 :
对产地湖北的紫红璋牙菜进行鉴定 ,取干燥有效部位粉 5 01 30 ; s zT 试剂配制 (取 s咒溶解刊 . I M 的柠檬酸缓冲液 ,
碎成干燥粉末2 020 9 ,用适量 70 % 乙醇将药材浸湿后装人 2 . or g柠檬酸 , 2 . 94 9 柠檬酸三钠分别溶于 l o ml 蒸馏水 ,
渗麟并压实 _ ,浸泡粉 后 。 再卿0 倍量的 70 % 乙醇进行 两液按 :l · 32 体积混匀 ,n4H · 5,m配现用 o)
而蘸巍乞流蘸企十醇进行少量多汉的萃斌兹 ` · , 动物浓缩液颜色由深到浅至澄清为止 。 将各层萃取液挥干后真 Bab F “ 小鼠 ,雄性 150 只 ,体重 17 一 19 9 。 由湖北省实
空干燥成粉末后称重 ,得率分别为乙醚部位 (l . 巧% ) 、 乙酸 验动物研究中心提供 ,动物合格证号 : CS x (K 鄂 ) 20 3姗5 。乙醋部 位 (3 . 53 % ) 、 正 丁 醇部 位 ( 2 . 亩% ) 、 水 溶 性 2 方法与结果
(l
.
05 % 户 一 , 〕 ,分别将提取物配制成浓度为乙醚部位 5 g’ .2 1 紫红璋牙菜 4 个提取部位及不同剂量对正常小鼠的影响
L
一 ’ , 乙酸乙醋部位 5 g’ L 一 ’ 、正丁醇部位 5 9 · L 一 ’ 、水溶性 5 9 取健康小鼠 50 只 ,随机分成 or 组 ,每组 5 只 。 空白对
·
L
一 ’ 的溶液后避光低温保存备用 。格列美脉片贵州天安药业 照组 19 给予同体积 0 . 9% 氯化钠溶液 ; 阳性对照组 ( 格列美
作者简介 :文莉 ,女 , 讲师 , 本科 , 主要从事中药药理学研究。 E 一m a i l : w e n l ih u l 2 3 12 3@ 16 3 . e o m
/ 么夕
中国药师 20 7年第 r o卷第 2期 Ch i n aPh a n刀 a ei s t2( 0 )7 . V ol .10 N o .2
脉 )按 2m g· kg一 ’ 1 9;乙醚部位 , 乙酸乙醋部位 , 正丁醇部位 ,
水溶性 4 种提取物均按 2 个剂量组 19 10 , 50 m g · kg 一 ’ ,给药
体积 0 . 2 m F l o g , 给药后 l h ,测定尾静脉血糖值 , 各给药组
血糖值与空白组进行 t 检验 ,结果见表 1 。
表 1 紫红璋牙菜 4 个提取部位及不同剂 t
对正常小鼠血糖的影响 《无士 : , n = 5)
组别 剂量
( m g
·
k g
一 ’
血糖 C
,一5479836( m m o l . L一 ,
空白对照组
阳性对照组
乙醚部位
乙酸乙酷部位
正丁醇部位
水溶性
0
.
9% 氯化钠溶液
2
1o
5 0
1o
5 0
1o
5 0
1o
5 O
6
.
9 0 土 0 .
4
.
9 0 士 0 .
6
.
2 8 士 0 .
6
.
2 0 土 0 .
5
.
6 3 士 0
.
6
.
5 0 士 0 .
5
.
9 8 士 0 .
6
.
3 2 土 1 .
6
.
7 0 士 0
.
5
.
7 2 士 0 .
2
.
2 紫红谭牙菜 4 个提取部位及不 同剂量对 SzT 糖尿病小
鼠的影响
按文献圈选健康小鼠进行造模用高脂高糖饲料 (基础
饲料中人 20 % 蔗糖 , 10 % 蛋黄粉 , 10 % 熟猪油 , 1% 胆固醇 ,
0
.
5 %脱氧胆酸钠 )饲喂 4 周 ,然后在禁食 24 h 后 , i p 链脉佐
菌素 10 m g · kg 一 ` , 7 2 h 后测血糖 ,血糖大于7 . 8 m m o l · L 一 ’ 即
为造模成功并用于实验 , 高脂高糖饲料喂养 2 周 。 取 60 只
糖尿病小鼠 ,按空腹血糖水平随机分成 10 组 ,每组 6 只 ,空
白对照组 咭给予同体积 0 . 9% 氯化钠溶液 ; 阳性对照组 ( 格
列美脉 ) 19 2 m g · kg 一 ’ ; 4 种提取物均按 10 , 50 m g · kg 一 ’ 2个
剂量给药 , 给药体积0 2 m l/ 10 g , 2 次 / d (即每天上午 9 : o
和下午 4 : o 各 1 次 ) ,下午 2 : o ,测定尾静脉血糖值 [ ’ ] 。 将
连续给药 7 d 的 S zT 小鼠禁食 6 h( 不禁水即空腹 )后称重 ,
取眼内毗血 ,离心取血清保存 ,做进一步的胰岛素测试并计
算胰岛素抵抗指数 ;采用 t 检验评价显著性差异。 结果见
表 2 。
注 : 与空白对照组比较 , * 尸 < 0 . 05 ; . * 尸 < 0 . 01
表 2 紫红捧牙菜 4 个提取部位及不同荆 t 对空腹 S TZ 糖尿病小鼠血糖 、胰岛素抵抗的影响 《无士 , . n = 6)
组别 剂量
( m g
·
k g
一 l 给药前
胰岛素
( Ml
u
)
抵抗指数
模型对照组 10 . 2 2 土 1 . 17 19 5 . X() 士 1 12 . 9 7 巧 4 3 . 3 士 6 80 . 9
阳性对照组 ] 1 . 0 6 士 1 . 8 6 18 5 . 49 士 7 2 . 2 0 8 84 . 3 士刁刁4 . 0
乙醚部位 10 . 2 5 土 0 . 6 3 19 1 . 80 士 1 17 . 2 2 79 3 . 2 士 6 5 3 . 6
10
.
5 8 士 1
.
4 1 1 18
.
2 7 士 8 5 . 6 6 75 4
.
1 士 5 9 1 . 9
乙酸乙醋部位 11 . 17 士 2 . 2 8 1 5 5 . 4 5 士 7 2 . 0 5 1 0 8 1 . 5 士 5 9 1 . 9
11
.
2 8 士 1
.
2 70
.
0 3 士 3 2
.
11 朔0 . 7 士 2 2 7 . 0
正丁醇部位 10 . 0 土 1 . 1 1
血糖 C/ m m ol · L 一 ’
给药( ) d 后0/ d差值
8
.
4 0 士 1 . 3 8
( 2
.
1 8 士 0 . 9 2 )
6
.
7 8 士 0
.
5 6
.
( 4
.
2 8 土 1 . 4 7 )
. ’
9
.
30 士 0 . 6 8
( 0
.
9 3 士 0 . 15 )
8
.
2 8 士 1 . 2 3
( 2
.
3 0 士 0
.
4 0 )
8
.
4 2 士 0 . 8 7
( 2
.
7 0 士 1
.
6 0 )
7
.
2 3 士 1
.
0
( 4
.
0 5 土 0
.
60 )
’
7
.
2 5 土 0 . 85 9 1 . 4() 士 5 4
.
3 7 6 2 9
.
3 士 4 3 2
.
0
10
. 闷4 士 1 . 2 0
水溶性 10 . 0 5 士 0 . 5 9
10
.
7 土 1
. 闷4
( 2
.
7 5 士 0 . 4 )
7
.
7 2 士 1 . 04
( 2
.
7 2 士 0 . 4 8 )
7
.
2 0 土 0 . 4
( 2
.
8 5 士 0 . 2 1 )
8
.
6 2 土 0 . 9 3
( 2
.
10 土 0 . 6 4 )
7 d/ 7 d差值
6
.
7 5 士 0
.
37
( 3
.
15 土 1
.
0 5 )
4
.
6 3 士 0 . 5 6 .
( 6
.
3 2 土 1 . 3 6 )
. ’
6
.
0 8 士 0
.
6 8
( 3
.
4 8 士 0
.
6 7 )
6
.
3 8 士 0 . 5 7
( 4
.
2 0 士 0 . 8 5 )
6
.
7 2 士 0 . 6 6
( 4
.
4 3 士 1 . 6 7 )
6
.
2 3 士 0 . 7 8
( 5
.
0 5 土 0 . 6 2 )
申
6
.
17 土 0 . 3 5
( 3
.
3 8 士 0
.
7 6 )
6
.
0 3 士 0
.
5 9
.
( 4
.
3 7 士 0
.
7 1 )
6
.
2 8 士 1 . 19
( 3
.
7 7 土 0
.
7 5 )
5
.
5 7 土 0 . 19
( 5
.
3 2 土 1 . 60 )
巾
12 0
.
17 士 6 3 . 9 5 7 2 1 . 3 土 4 2 2
.
8
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.
5 5 土 4 7
.
1 1 6 3 1
.
0 士 3 6 7 . 9
13 7
.
6 2 土 2 9
.
9 6 7 2 6
.
0 士 1 36 . 2
注 : 与模型对照组 比较 , ’ 尸 < 。 . 05 ; ” p < 0 . 01 ; ’ 2尸 < 0 . 0 1 ;括号内为血糖降低值。
2
.
3 紫红樟牙菜 4 个提取部位及不 同剂量对 STZ 糖尿病 小 表 3 紫红璋牙菜 4 个提取部位及不同荆工
对 S咒 糖尿病小鼠糖耐 t 的影响《无士 ` , n = 6)
剂量
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kg 一 l )
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气`门J4-l氏,j弓2内士土2568931240
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l咤,了6ù2气OC内、`U`子1, .卫,ù.1主l754236D咒991,一飞气`2104凡、l门」土士60258793124211608973
1050
2
鼠糖耐量的影响
选造模成功的小鼠分组为 10 组 ,分组与剂量同上 ,每组
腹腔注射葡萄糖 50 m m o l · kg 一 ’ , 给予葡萄糖 30 , 60 , 1 20 m in
后用怡成超越血糖仪侧血糖 ,各给药组血糖值与空白组进行
t 检验 ,结果见表 3 。
实验 2 . 1 结果表明 : 紫红璋牙菜 4 个提取部位及各个剂
量组均对正常小 鼠空腹血糖有所降低 , 其中乙 酸乙醋部位
10 m g
·
kg
一 ’组有较显著降低血糖作用 , 其它组与空白对照
组比较无显著性差异 。
实验 2 . 2 结果表明 :紫红璋牙菜四个提取部位及各个剂
乙酸乙醋
正丁醇
水溶组
格列苯脉
模型组
士 1
.
士 2
.
士 6
-
士 4
.
土 2 -
士 3
.
注 : 与模型时照组比较二 尸 < 0 . 05
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·
og r研究报告
量组均有抑制S T z引起的高血糖小鼠的血糖 。 效果由高到
低依次为乙酸乙醋部位 、水溶性部位 、正丁醇及乙醚部位 。
其中乙酸乙醋5 0 mg· kg一 ’ 的剂量组在给药 d o的差值与
模型对照组进行 t检验 ,结果有显著差异 ;乙酸乙醋 50 m g’
k g
一 ’和水溶性50 m g · k g 一 ’ 的剂量组在给药 7 d 的降低血糖差
值较为显著差异 。
对胰岛素抵抗指数影响 ,各组对糖尿病小鼠的胰岛素抵
抗均有非常显著作用 ,其中乙酸 乙醋 50 m g · kg 一 ’ 的作用最
强 。
实验 2 . 3 结果表明 :紫红璋牙菜四个提取部位对小鼠给
葡萄糖后 30 m in 血糖有较为显著降低作用 ,但对 60 , 120 m in
时影响不大 。
3 讨论
2 型糖尿病的重要发病机制之一是周围组织对胰岛素敏
感性降低 , 即存在胰岛素抵抗汇8 〕即胰岛素抵抗伴高血糖 , 常
伴高胰岛素血症 。 本实验建立一种接近于人类普通 n 型糖
尿病小鼠的模型 ,轻微地破坏部分胰岛 p 细胞 , 配合高脂高
糖喂食逐渐形成胰岛素抵抗的 2 型糖尿病小鼠模型 ,具有外
周胰岛素抵抗和功能仅轻微受损等特征 ,具有类似人类 n 型
糖尿病的临床表现 ,并且有助于该病及其慢性并发症发病机
理的研究 ) 。 紫红璋牙菜 4 个提取部位能降低 SZT 引起的高
血糖小鼠的血糖 ,血糖水平下降幅度由高到低依次为乙酸乙
醋部位 、正丁醇部位 、 水溶性 、 乙醚部位 ,但无量效关系 。 其
中乙酸乙酚部位和水溶性部位降血糖效果显著 。 但对正常
小鼠的血糖水平无影响 。 紫红璋牙菜最突出的是对胰岛素
抵抗的改善 ,对 2 型糖尿病有较强针对性 9[] 。
近年来 ,紫红璋牙菜在降低血糖方面发现具有较强的生
理活性 ,本实验仅对 4 种提取物降糖作用进行初步评价 ,有
必要进一步研究有效成份中的单体化合物的降糖作用 。
参 考 文 献
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12 75
一
1277
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( 2 X() 6一 8一 18 收稿 2X() 6 -()9 一5 修回 )
正 清 风 痛 宁 片含 量 测 定 方 法 改 进
黄海萍 李文莉 (湖南省药品检验所 长沙 4 10 00 1)
摘 要 目的 : 采用 H P L C 法测定正清风痛宁片中青藤碱含量 。 方法 : 色谱条件为 :采用 K r o m as il 一C l: 柱 , 以 乙睛 一 0 . 78 % 磷
酸二氢钠溶液 ( 12 : 8 ) 为流动相 ;检测波长 : 26 5 。 m ;流速 1 m l · m in 一 ’ ;柱温 : 30 ℃ 。 结果 : 青藤碱在0 . 38 一 1 . 咒 眺 范围内具
有良好的线性关系 , ; = 0 . 9 9 9 。 平均回收率为 98 . 3% , RsD = 0 . 8 % 。 结论 : 本法操作简单 , 重复性好 , 准确 , 可用来控制本制
剂质量 。
关键词 正清风痛宁片 ; 盐酸青藤碱 ; 含量测定 ; 高效液相色谱法
中图分类号 : 9R 27 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 08 -() 4 9 X ( 20 07 )02 一 142 刁3
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正清风痛宁片为湖南正清制药集团股份有限公司的产
品 ,质量标准川 中含量测定是采用 H P L c 法测定盐酸青藤碱
含量 ,流动相为甲醇一乙二胺 ( 1(X幻 : 0 . 1 ) ,但青藤碱保留时间
太短 ,易造成测定误差 ,故在原方法的基础上修改了流动相组
厂尤夕