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龙须藤提取物的镇痛抗炎作用



全 文 :龙须藤提取物的镇痛抗炎作用
易荆丽,张嘉家,周毅生,王嵩,赵永恒
(广东药学院 中药学院,广东 广州 510006)
摘要:目的 研究龙须藤乙醇提取物的镇痛抗炎作用,筛选出龙须藤镇痛抗炎作用的有效部位。方法 采
用热板法和冰乙酸扭体法观察镇痛作用,采用二甲苯致小鼠耳郭肿胀法观察抗炎作用。结果 龙须藤醇
提物具有较好的镇痛抗炎作用;龙须藤醇提物的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物具有显著的镇痛作用,
并能较好抑制炎症的组织液渗出。结论 龙须藤醇提物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位可能是龙须藤镇
痛抗炎作用的有效部位。
关键词:龙须藤;镇痛;抗炎;乙酸乙酯萃取物;正丁醇萃取物
中图分类号:R285 文献标志码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1006-8783. 2012. 06. 016
文章编号:1006-8783(2012)06-0647-05
Study on the anti-inflammatory and analgesic effects of Bauhinia championii Benth
extract in mice
YI Jingli,ZHANG Jiajia,ZHOU Yisheng,WANG Song,ZHAO Yongheng
(School of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical College,Guangzhou 510006,China)
Abstract:Objective To study the anti-inflammatory and analgesic effects of Bauhinia championii Benth
extract in mice,and screen out its effective fractions. Methods Two models that hot plate and writhing test
caused by glacial acetic acid in mice were used to observe the anti-inflammatory effect. The model that ear
swelling caused by dimethyl benzene in mice was adopted to observe the analgesic effect. Results The
ethanol extract from Bauhinia championii Benth obviously showed anti-inflammatory and analgesic effects.
Ethyl acetate extract and n-butanol extract exhibited anti-inflammatory effect,and inhibited effusion of
tissue fluid caused by inflammation. Conclusion Ethyl acetate extract and n-butanol extract may be the
effective parts of Bauhinia championii Benth for the anti-inflammatory and analgesic effects.
Key words:Bauhinia championii Benth;anti-inflammatory;analgesic;ethyl acetate extract;n-butanol
extract
收稿日期:2012-10-24
作者简介:易荆丽(1986 -) ,女,硕士研究生,Email:yijingli2008@ 163. com;通信作者:周毅生(1957 -) ,男,教授,主要从事药
物新剂型与新技术研究,电话:020-39352168,Email:yishzhou@ yahoo. com. cn。
网络出版时间:2012-12-10 15:46 网络出版地址:http:/ /www. cnki. net /kcms /detail /44. 1413. R. 20121210. 1546. 009. html
龙须藤为豆科苏木亚科羊蹄甲属植物龙须藤
Bauhinia championii (Benth.)Benth. 的干燥藤茎。
别名又称为:过岗圆龙、九龙藤、羊蹄藤、梅花入骨丹
等,性味甘、微苦、温,具有祛风除湿、行气活血的功
效[1]。该药在我国多个少数民族中广泛用于治疗
风湿性关节炎、跌打损伤,疗效显著[2]。民间该药
常作为豆科含羞草亚科榼藤属植物过岗龙[1]使用。
龙须藤药材中主要含有黄酮、氰苷、没食子酸[3 - 4]。
目前对龙须藤的药效基础研究还不够深入,其抗风
湿性关节炎的有效成分不清,极大限制了该药材在
临床上的应用。本实验为考察龙须藤药材的镇痛抗
炎作用,筛选出龙须藤的镇痛抗炎作用的有效部位,
采用热板法、冰乙酸扭体法作为观察镇痛作用的药
理模型,采用二甲苯致小鼠耳郭肿胀法作为观察抗
炎作用的药理模型。
1 材料
1. 1 实验动物
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Dec. 2012,28(6)
SPF级 KM小鼠,体质量 18 ~ 22 g,购自广州中
医药大学实验动物中心,生产许可证号:SCXK(粤)
2008-0020。
1. 2 药品与试剂
龙须藤药材由广东罗浮山制药有限公司提供,
经广东药学院中药鉴定教研室李书渊教授鉴别为豆
科苏 木 亚 科 羊 蹄 甲 属 植 物 龙 须 藤 Bauhinia
championii (Benth.)Benth.的干燥藤茎。取龙须藤
药材 100 g,打粉,过 2 号筛得粗粉,用 75%(φ)乙醇
回流提取 3 次,每次 2 h,合并 3 次的提取液,回收溶
剂,得到乙醇提取物浸膏(出膏率约 28. 05%) ;取部
分乙醇提取物浸膏加水分散后,用石油醚、氯仿、乙
酸乙酯、正丁醇依次按极性大小萃取,得到石油醚萃
取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、
水层。罗通定片(四川康福来药业集团有限公司,
批号 110501) ;吲哚美辛(江苏亚邦爱普森药业有限
公司,批号 110901) ;石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁
醇、冰乙酸、二甲苯、乙醇等化学试剂均为分析纯。
1. 3 仪器
日本岛津 SHIMADZU系列电子天平(深圳市同
奥科技有限公司) ;501 超级恒温水浴(金坛市宏华
仪器厂制造) ;RE-52A 旋转蒸发仪(上海亚荣生化
仪器厂)。
2 方法
2. 1 龙须藤乙醇提取物镇痛抗炎作用的研究
2. 1. 1 对小鼠热板致痛的影响 取预选合格[(55
± 0. 5)℃,5 ~ 30 s内舔后足][5]的 KM雌性小鼠 50
只,随机分为 5 组,即空白对照组(给予蒸馏水)、龙
须藤乙醇提取物低、中、高剂量组(剂量分别为 3、6、
12 g /kg)、阳性对照罗通定组(剂量 0. 04 g /kg)。实
验前小鼠禁食不禁水 12 h,连续灌胃给药 4 d,每天
1 次,给药容量 20 mL /kg,第 4 天给药后在第 30、
60、90、120 分钟测量小鼠的痛阈值。
2. 1. 2 对冰乙酸致小鼠扭体反应的影响 取 KM
小鼠 50 只,体质量 18 ~ 22 g,雌雄各半,随机分为 5
组,每组 10 只,分组情况及给药方法同“2. 1. 1”项。
第 4 天末次给药 30 min 后,腹腔注射 0. 6%(φ)冰
乙酸 10 mL /kg,记录 20 min内小鼠扭体次数[5]。各
给药组与空白对照组比较。按下式计算各组的镇痛
抑制百分率,结果见表 2。
抑制率 =
空白对照组
平均扭体次数
-给药组平均
扭体次数
空白对照组平均扭体次数
× 100%
2. 1. 3 对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响 取 KM
小鼠 50 只,体质量 18 ~ 22 g,雌雄各半,随机分为 5
组,每组 10 只,分组情况及给药方法同“2. 1. 1”项,
但阳性对照药为吲哚美辛(剂量 0. 007 5 g /kg) ,只
灌第 4 天,1 次。各组末次给药 60 min 后将二甲苯
(0. 02 mL /只)均匀涂在每只小鼠右耳正反两面致
炎,左耳不涂作对照,致炎后 30 min 脱颈椎处死小
鼠,沿耳郭基线剪下双耳,用直径 9 mm 的打孔器在
相同位置取左右两耳片于分析天平上称质量,按下
式计算肿胀度及抑制率[5]。
肿胀度(mg)=右耳片质量 -左耳片质量
抑制率 =
对照组平均
肿胀度
-给药组平均
肿胀度
对照组平均肿胀度
× 100%
2. 1. 4 统计学处理 采用 SPSS18. 0 软件,实验结
果用珋x ± s表示,样本自身前后比较采用配对 t检验,
满足方差齐性检验条件者两样本比较采用 t检验,P
< 0. 05 为差异有统计学意义。
2. 2 龙须藤镇痛抗炎有效部位的筛选
2. 2. 1 对小鼠热板致痛的影响 取预选合格[(55
±0. 5)℃,5 ~ 30 s 内舔后足]的 KM 雌性小鼠 70
只,随机分成 7 组,每组 10 只,分别为空白对照组
(给予蒸馏水) ,龙须藤乙醇提取液的石油醚萃取物
组(剂量为含生药量 15 g /kg)、氯仿萃取物组(剂量
为含生药量 15 g /kg)、乙酸乙酯萃取物组(剂量为
含生药量 15 g /kg)、正丁醇萃取物组(剂量为含生
药量 15 g /kg)、水层萃取物组(剂量为含生药量 15
g /kg)[5]、罗通定为阳性对照组(剂量为 0. 04 g /
kg)。实验方法同“2. 1. 1”项。
2. 2. 2 对冰乙酸致小鼠扭体反应的影响 取 KM
小鼠 70 只,雌雄各半,随机分为 7 组,每组 10 只,分
组参照“2. 2. 1”项下内容分为相同的 7 组,实验方
法同“2. 1. 2”项。
2. 2. 3 对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响 取 KM
小鼠 70 只,雌雄各半,随机分为 7 组,每组 10 只,分
组参照“2. 2. 1”项下内容分成相同的 7 组。阳性对
照药为吲哚美辛(剂量为 0. 0075 g /kg,给药容量 20
mL /kg) ,实验方法同“2. 1. 3”项。
2. 2. 4 统计学处理 方法同“2. 1. 4”项。
846 广东药学院学报 第 28 卷
3 结果
3. 1 龙须藤乙醇提取物镇痛抗炎作用的研究结果
3. 1. 1 对小鼠热板致痛的影响 从表 1 结果可看
出,龙须藤乙醇提取物的中、高剂量组及阳性对照组
与空白对照组比较,各组均能明显提高小鼠痛阈值,
差异有统计学意义(P < 0. 05 或 P < 0. 01) ,说明中、
高剂量组对热刺激所致小鼠疼痛均有一定的抑制
作用。其中,中剂量组在 60 min、90 min 时,与空
白对照组及自身给药前痛阈值比较,差异有统计
学意义(P < 0. 01) ,镇痛作用较强。并且受试药物
组随着剂量的增大,发挥镇痛作用的时间越快。
表明龙须藤乙醇提取液对热刺激小鼠致痛反应有
镇痛作用。
表 1 龙须藤乙醇提取物对小鼠热板法致痛的影响
Table 1 Effect of the ethanol extract of Bauhinia championii Benth on analgesic test in mice induced by hot plate(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量 /
(g·kg -1)
给药前
痛阈值 / s
给药后不同时间痛阈值 / s
30 min 60 min 90 min 120 min
空白对照组 - 16. 42 ± 3. 99 14. 01 ± 4. 75 14. 65 ± 6. 00 13. 53 ± 5. 86 13. 69 ± 5. 39
提取物 低剂量组 3 15. 43 ± 3. 79 17. 40 ± 3. 58 19. 84 ± 3. 87 19. 91 ± 4. 60 19. 02 ± 6. 01
中剂量组 6 17. 10 ± 4. 09 23. 79 ± 3. 34 26. 94 ± 5. 38**△△ 25. 23 ± 5. 86**△△ 21. 30 ± 5. 43△
高剂量组 12 18. 08 ± 2. 96 29. 29 ± 3. 61**△ 32. 90 ± 5. 19**△△ 20. 81 ± 4. 78** 20. 04 ± 6. 31*
阳性对照组 0. 04 17. 62 ± 4. 74 34. 96 ± 5. 02**△ 52. 12 ± 6. 75**△△ 42. 84 ± 6. 64**△△ 29. 86 ± 7. 52**△△
与空白对照组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01;与给药前痛阈值比较:△P < 0. 05,△△P < 0. 01。
3. 1. 2 对冰乙酸致小鼠扭体反应的影响 从表 2
结果可看出,龙须藤乙醇提取物各剂量组及阳性对
照组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P <
0. 05 或 P < 0. 01) ,各组均能对抗冰乙酸刺激所致
的疼痛反应,对小鼠的抑制率分别为 48. 20%、
53. 00%、56. 97%,有较好的剂量相关性,以龙须藤
高剂量组作用最明显。表明龙须藤提取物对冰乙酸
所致小鼠疼痛反应有抑制作用。
表 2 龙须藤乙醇提取物对冰乙酸致小鼠疼痛的影响
Table 2 Effect of the ethanol extract of Bauhinia championii
Benth on writhing test in mice induced by glacial acetic
acid(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量 /
(g·kg -1)
扭体次数 抑制率 /%
空白对照组 - 41. 02 ± 3. 25 -
提取物 低剂量组 3 21. 25 ± 5. 17 48. 20
中剂量组 6 19. 28 ± 4. 26* 53. 00
高剂量组 12 17. 65 ± 5. 82* 56. 97
阳性对照组 0. 04 13. 10 ± 4. 37** 68. 06
与空白对照组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01。
3. 1. 3 对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响 从表 3
结果可看出,低、中、高剂量组均能使小鼠耳郭肿胀
度明显降低,抗炎效果随着给药剂量的增加而增强,
抑制率分别为 34. 71%、52. 52%、58. 16%。其中龙
须藤高剂量组作用最明显(P < 0. 01) ,其抗炎效果
最为接近阳性对照组(吲哚美辛) ,表明龙须藤提取
物可对抗二甲苯所致的炎症反应,具有抗炎作用。
表 3 龙须藤乙醇提取物对二甲苯所致小鼠耳郭肿胀的影响
Table 3 Effect of the ethanol extract of Bauhinia championii
Benth on ear-swelling in mice induced by dimethyl
benzene(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量 /
(g·kg -1)
肿胀度 /mg 抑制率 /%
空白对照组 - 22. 01 ± 2. 93 -
提取物 低剂量组 3 14. 37 ± 5. 02* 34. 71
中剂量组 6 10. 45 ± 4. 21** 52. 52
高剂量组 12 9. 21 ± 5. 22** 58. 16
阳性对照组 0. 0075 7. 63 ± 4. 33** 65. 33
与空白对照组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01。
3. 2 龙须藤镇痛抗炎有效部位的筛选结果
3. 2. 1 对小鼠热板致痛的影响 从表 4 结果可看
出,乙酸乙酯组、正丁醇组及阳性对照组与空白对照
组比较,各组均能提高小鼠痛阈值,差异具有统计学
意义(P < 0. 05 或 P < 0. 01)。表明乙酸乙酯萃取物
和正丁醇萃取物对热刺激致小鼠疼痛具有一定的抑
制作用,且正丁醇萃取物组作用快且持久。
946第 6 期 易荆丽,等.龙须藤提取物的镇痛抗炎作用
表 4 龙须藤不同极性部位对小鼠热板法致痛的影响
Table 4 Effect of the different fractions of Bauhinia championii Benth on analgesic test in mice induced by hot plate(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量 /
(g·kg -1)
药前痛
阈值 / s
给药后痛阈值 / s
30 min 60 min 90 min 120 min
空白对照组 - 18. 2 ± 2. 37 16. 6 ± 2. 10 20. 5 ± 2. 85 17. 9 ± 1. 88 18. 6 ± 1. 60
石油醚组 15 15. 5 ± 2. 20 17. 4 ± 1. 99 19. 7 ± 2. 72 16. 7 ± 2. 25 18. 9 ± 3. 27
氯仿组 15 16. 6 ± 2. 57 21. 6 ± 1. 98* 17. 7 ± 2. 01 16. 1 ± 1. 47 16. 5 ± 2. 29
乙酸乙酯组 15 15. 8 ± 1. 77 22. 7 ± 4. 51 28. 5 ± 4. 21*△ 30. 6 ± 6. 16*△ 33. 4 ± 5. 26**△△
正丁醇组 15 15. 6 ± 1. 43 26. 0 ± 4. 13* 29. 4 ± 4. 99*△ 30. 4 ± 4. 24*△ 31. 9 ± 5. 83*△
水组 15 14. 9 ± 1. 44 17. 1 ± 2. 15 12. 9 ± 1. 35 12. 9 ± 1. 15 18. 2 ± 1. 92
阳性对照组 0. 04 17. 6 ± 1. 50 35. 0 ± 4. 75*△ 52. 1 ± 4. 35**△△ 42. 8 ± 5. 26**△△ 29. 9 ± 3. 33*△
与空白组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01;与给药前痛阈值比较:△P < 0. 05,△△P < 0. 01。
3. 2. 2 对冰乙酸致小鼠扭体反应的影响 从表 5
结果可看出,乙酸乙酯组和正丁醇组与空白组比较
差异均有统计学意义(P < 0. 01) ,抑制率均超过
50%,表明这两个部位均能对抗冰乙酸刺激小鼠所
致的疼痛反应,使小鼠扭体次数明显减少,尤其是乙
酸乙酯组更为明显;石油醚组、氯仿组、水组与空白
组比较差异虽有统计学意义(P < 0. 05) ,但其抑制
率没有达到 50%,表明这几组对冰乙酸导致的小鼠
扭体的抑制作用不够强。
表 5 龙须藤不同极性部位对冰乙酸致小鼠疼痛的影响
Table 5 Effect of the different fractions of Bauhinia championii
Benth on writhing test in mice induced by glacial acetic
acid(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量 /
(g·kg -1)
扭体次数 抑制率 /%
空白对照组 - 33. 20 ± 2. 89 -
石油醚组 15 18. 78 ± 4. 02* 43. 43
氯仿组 15 23. 30 ± 1. 90* 29. 82
乙酸乙酯组 15 11. 80 ± 2. 14** 64. 46
正丁醇组 15 16. 10 ± 3. 14** 51. 51
水组 15 18. 00 ± 2. 96** 45. 78
阳性对照组 0. 04 10. 20 ± 2. 74** 69. 28
与空白对照组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01。
3. 2. 3 对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响 从表 6
结果可看出,乙酸乙酯组、正丁醇组和阳性对照组对
二甲苯所引起的小鼠耳郭肿胀均有一定的抑制作
用,与空白对照组比较差异有统计学意义。抑制率
分别为 62. 38%、64. 24%、72. 45%。其中乙酸乙酯
组和正丁醇组其抗炎效果最为接近阳性对照组(吲
哚美辛) ,表明乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物可明
显对抗二甲苯所致的炎症反应。
表 6 龙须藤不同极性部位对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的影响
Table 6 Effect of the different fractions of Bauhinia champoinii
Benth on ear swelling in mice induced by dimethyl
benzene(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量 /
(g·kg -1)
肿胀度 /mg 抑制率 /%
空白对照组 - 8. 64 ± 1. 45 -
石油醚组 15 5. 55 ± 1. 43* 35. 76
氯仿组 15 6. 64 ± 1. 50 23. 15
乙酸乙酯组 15 3. 25 ± 1. 15** 62. 38
正丁醇组 15 3. 09 ± 1. 10** 64. 24
水组 15 10. 08 ± 1. 52 - 16. 67
阳性对照组 0. 0075 2. 38 ± 0. 54** 72. 45
与空白对照组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01。
4 讨论
本实验前曾采用热板法、冰乙酸扭体法及二甲
苯致小鼠耳郭肿胀法 3 种模型对龙须藤药材的
50%乙醇提取浸膏(出膏率约 30. 12%)、75%乙醇
提取浸膏(出膏率约 28. 05%)、95%乙醇提取浸膏
(出膏率约 13. 21%)以及水提取浸膏(出膏率约
32. 26%)的镇痛抗炎作用进行对比,结果显示龙须
藤 50%、75%乙醇提取浸膏、水提取浸膏均有较好
的镇痛抗炎作用,考虑到后面要筛选龙须藤有效部
位,水提取液的成分复杂萃取过程较麻烦,50%乙醇
056 广东药学院学报 第 28 卷
提取液的石油醚萃取物、氯仿萃取物得率低,所以确
定提取溶剂乙醇的浓度为 75%。
目前龙须藤已发现的化学成分中,主要是多甲
氧基黄酮类化合物、没食子酸等鞣质类、槲皮苷等黄
酮苷类[7 - 8]。这几类化合物的活性研究报道中,有
指出多甲氧基黄酮[9]脂溶性好,易吸收,现代药理
研究表明其在抗炎、抗氧化、抗动脉粥样、抗诱变等
方面具有显著的生物活性,它通过抑制诱生型-氧化
氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2(COX-2)的活性产生的
抗炎作用可能与抗风湿性关节炎密切相关。
本实验结果表明龙须藤具有较好的镇痛作用,
并对炎症中出现的变质渗出有较好的抑制作用;通
过 3 种药理模型也初步筛选出龙须藤乙醇提取液的
乙酸乙酯部位和正丁醇部位可能为龙须藤镇痛抗炎
的有效部位。但有关龙须藤镇痛抗炎作用的有效成
分及作用机制还有待进一步研究。
参考文献:
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(责任编辑:幸建华
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本刊评出 2012 年度优秀作者和优秀审稿人
为表彰对本刊工作做出贡献的作者和审稿人,本刊编委会根据学报 2011 年第 6 期 - 2012 年第 5 期发表
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人,根据其审稿的数量和质量,评选出优秀审稿人 26 名(其中外单位 8 名)。对获奖者颁发了奖状和奖金。
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江 涛 蒋新国 李浩明 李 明 李明亚 吕竹芬 王 晖 王 岩 魏 刚 文海涛 肖贵南
尹 辉 张翠仙 张 蜀 周毅生
优秀作者(30 人,按姓名拼音排序) :
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林 励 刘春平 吕华冲 吕俊华 吕小迅 吕竹芬 芮 雯 王 晖 王素军 王小平 王玉平
王振月 吴新荣 杨 帆 杨 红 杨家庆 袁旭江 曾令杰 张纪兴
(本刊编辑部)
156第 6 期 易荆丽,等.龙须藤提取物的镇痛抗炎作用