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70份毛葡萄种质资源遗传多样性的SSR分析



全 文 :收稿日期:2013-06-20
基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻0992011-5,桂科转1222017-18)
作者简介:*为通讯作者,杨柳(1983-),博士,副研究员,主要从事植物组培培养研究工作,E-mail:yangliu@gxaas.net。邹瑜(1965-),
研究员,主要从事果树育种及栽培研究工作,E-mail:zy@gxaas.net
70份毛葡萄种质资源遗传多样性的SSR分析
邹 瑜1,杨 柳2*,黄大辉2,吴代东1,张进忠1,赵 明1,
林 茜3,潘永杰3,林贵美3,韦绍龙1,欧昆鹏1
(1广西农业科学院 生物技术研究所;2广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室;3广西植物组培苗有限公司:南宁 530007)
摘要:【目的】利用SSR标记进行毛葡萄遗传多样性的分析,阐明毛葡萄种质的亲缘关系,为有效利用野生毛葡萄
种质及挖掘优良基因提供参考。【方法】利用筛选的多态性SSR引物对70份毛葡萄进行SSR扩增,评价不同种质遗传多
样性,并分析亲缘关系。【结果】从40对SSR引物中筛选出16对多态性引物,共扩增出123条带,每对引物可检测到等位
位点数3~15个,多态率26.7%~100.0%。PopGene分析结果表明,毛葡萄种群Nei’s基因多样性平均指数为0.4412,多样
性信息平均指数为0.6308,具有较高的遗传多样性。Nei’s相似性系数分析结果表明,70份毛葡萄种质的遗传相似系数
在0.60~0.89。UPGMA聚类分析结果表明,在遗传相似系数0.61处,70份毛葡萄材料可分为3大类群:第一类包含两份
毛葡萄材料,编号为70和91,均来自广西罗城县;第二类包含5份材料,编号为28、1、129、3和131,除131外,其余4份来
自广西罗城县;其他63份归为第三类,其中50份为广西罗城县毛葡萄。【结论】广西罗城县毛葡萄具有丰富的遗传多样
性,可为毛葡萄种质资源的利用和品种选育提供参考。
关键词:毛葡萄;种质资源;SSR分析;聚类分析;遗传多样性
中图分类号:S663.1 文献标志码:A 文章编号:2095-1191(2013)12-1943-06
0 引言
【研究意义】毛葡萄(Vitis quinquangularis Rehd)原
产于我国,是葡萄种(Vitis Linn)东亚种群分布较广的
野生种类(刘三军和孔庆山,1995;贺普超,1999),主要
Genetic diversity of 70 Vitis heyneana germplasms revealed
by SSR markers
ZOUYu1,YANGLiu2*,HUANGDa-hui2,WUDai-dong1,ZHANGJin-zhong1,
ZHAOMing1,LINQian3,PANYong-jie3,LINGui-mei3,WEIShao-long1,OUKun-peng1
(1Bio-technology Research Institute,Guangxi Academy of Agricultural Sciences,Nanning 530007,China;2 Guangxi Crop
Improvement and Biotechnology Laboratory,Guangxi Academy of Agricultural Sciences,Nanning 530007,China;3Guangxi
Plant Tissue Culture Company Limited,Nanning 530007,China)
Abstract:【Objective】The genetic diversity of Vitis heyneana was studied using SSR markers in order to understand the
interrelationship and provide references on effective utilization of those germplasms and screening better genes. 【Method】By
using the selected polymorphism SSR primers to amplify 70 accessions of Vitis heyneana germplasms, the genetic diversity
and interrelationship were analyzed. 【Result】The results showed that 123 bands were amplified using 16 pairs of polymor-
phic primers screened from 40 pairs, and 3 to 15 allelic loci were detected by each pair of primers, with the polymorphic
rate of 26.7%-100.0%. The average population Nei’s genetic diversity index was 0.4412 and the average Shannon index of
diversity was 0.6308 as indicated by the PopGene analysis. The results indicated that this Vitis heyneana group had higher
genetic diversity. Jaccard similarity coefficient analysis by NTSYSpc2.10e software based on SSR amplification results
demonstrated that the genetic similarity coefficient was 0.60-0.89. The UPGMA cluster analysis showed that the 70 acces-
sions of Vitis heyneana germplasms could be divided into three major groups on similarity coefficient level of 0.61. Two
wild varieties from Luocheng (No.70, No.91) were clustered in the same group. The second group included five wild
varieties (No.28, No.129 , No.1, No.3 from Luocheng and one wild variety No.131 from Du’an), and the rest 63 varieties
were the third group (50 varieties from Luocheng). 【Conclusion】Vitis heyneana has abundant diversity in Luocheng, which
provides basic data for protection and utilization of Vitis heyneana germplasms.
Key words: Vitis heyneana;germplasm resources; SSR analysis; cluster analysis; genetic diversity
DOI:10.3969/j:issn.2095-1191.2013.12.1943
南方农业学报 JOURNAL OF SOUTHERN AGRICULTURE 2013,44(12):1943-1948
ISSN 2095-1191;CODEN NNXAAB http://www.nfnyxb.cn
南 方 农 业 学 报
分布于湖南、江西、广西、广东、云南和贵州等省(区)。
在广西,毛葡萄较集中分布在桂中、桂北、桂西的喀斯
特地貌地区,野生资源蕴藏量十分丰富(彭宏祥等,
1999)。毛葡萄果实糖低、酸高、色深,单宁含量较高,富
含多种营养元素,具有良好的酿造加工性状(王西锐等,
2000)。广西产区用毛葡萄为原料酿造加工的野生葡萄
酒,因具有独特的山野味和果香浓郁醇厚的酒质而深
受消费者的青睐。葡萄属植物不同种间及栽培种内不
同品种间在形态解剖、经济性状和抗逆性方面具有极
其丰富的多样性变异,致使葡萄的分类鉴定极为困难
(贺普超,1999)。因此,研究葡萄种质资源的亲缘关系
及遗传多样性,对葡萄育种、种质资源管理及其保护具
有重要意义。【前人研究进展】SSR标记在葡萄品种鉴
别、揭示和区分同名异物和同物异名、系谱关系确认和
遗传图谱构建等方面已经得到广泛应用(Pellerone et
al.,2001;Lopes et al.,2006)。Thomas and Scoot(1993)、
Thomas 等(1994)的研究结果表明,SSR标记可以正确
鉴定葡萄种、种间杂交品种和纯种品种。Botta等(1995)
和Maletic等(1999)也证明可以利用SSR标记进行葡萄
品种和品系遗传多样性的分析,且具有较高的可靠性
和现实意义。吴子龙等(2008)利用9对SSR引物将8个山
葡萄及山欧杂种葡萄品种区分开。方连玉等(2010)利
用11对多态性引物成功把15个山葡萄品种、欧亚种及
美洲杂种区分开,其中山葡萄与欧亚种、美洲杂种的亲
缘关系较远,欧亚种与美洲种之间亲缘关系较近。温景
辉等(2011)利用SSR标记对20份葡萄材料进行基因组
多态性分析,从245对引物中筛选出19对用于葡萄的
SSR扩增;发现在遗传相似系数0.665处,20份葡萄材料
可分为4大类群;山葡萄与欧亚种、美洲杂种的亲缘关
系较远,欧亚种与美洲种之间亲缘关系较近。【本研究
切入点】广西野生毛葡萄资源丰富,分布面积广,广西
农业科学院生物技术研究所毛葡萄种质资源圃收集了
来自广西桂西北、桂北等石山地区的野生毛葡萄种质
124份,但未对其进行亲缘关系及遗传多样性的相关分
析。【拟解决的关键问题】随机选出70份毛葡萄种质为
材料,采用SSR分子标记技术,研究毛葡萄种质资源遗
传多样性,为我国毛葡萄种质鉴定、保存和利用等提供
参考依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试毛葡萄种质材料采自广西农业科学院生物技
术研究所毛葡萄种质资源圃,共70份种质(表1)。
1.2试验方法
1. 2. 1 基因组DNA提取 利用改良的CTAB法提取:
取0.2 g叶片,在液氮中研磨成粉末状,依次加入500.0 μL
60~65 ℃的2×CTAB、50.0 μL 1%偏重亚硫酸钠,再加
入50.0 μL 1%的Na2S2O5与25.0 μL β-巯基乙醇(至终
浓度1%);加50.0 μL 20%的聚乙烯吡咯烷酮(PVP,至
终浓度1%),于65 ℃水浴中放置30 min,每隔10 min轻
摇使其充分混匀;加入等体积氯仿∶异戊醇(24∶1),10
min内混匀,10000 r/min离心15 min,收集上清液放入
新离心管;加入等体积氯仿∶异戊醇(24∶1),10 min内混
匀,10000 r/min离心15 min;收集上清液,加等体积异
丙醇和1/10体积的3 mol/L NaAc,冰冻30 min。于4 ℃
下以12000 g离心10 min,弃上清液;75%乙醇清洗沉
淀、晾干,用500.0 μL 1× TE溶解;加入5.0 μL 10 mg/mL
Rnase,37 ℃温育30 min;加入等体积氯仿∶异戊醇(24∶
1),10 min内混匀,10000 r/min离心15 min,重复此步一
次;取上清液,加等体积异丙醇和1/10 体积的3 mol/L
NaAc,冰冻30 min。于4 ℃下以12000 g离心10 min,弃
上清液;75%乙醇清洗沉淀两次,晾干,用200.0 μL 1×
TE溶解;取2.0 μL,电泳检测DNA质量,用于下游研究。
1. 2. 2 DNA扩增及电泳检测 所用40对SSR引物依
照http://www.vitisdb.it/variety_search_by_mp/select_loci
所载方法合成。PCR反应体系(20.0 μL)为:含50 ng基因
组DNA,2.0 μL 10×PCR缓冲液,10 mmol/L dNTPs 2.0
μL,10 μmol/L正反 SSR引物各 1.0 μL,0.2 μL Taq
DNA聚合酶(2.5 U/μL)。PCR扩增程序:94 ℃预变性4
min;94 ℃ 30 s,50 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s,进行30个循环;
72 ℃延伸5 min;-16 ℃保存。扩增产物以6%聚丙烯酰
胺变性凝胶电泳进行分离。提取的总DNA经紫外分光
光度计检测,测定OD260/OD280比值,并以1.0%琼脂糖检
测DNA质量。
1. 2. 3 统计分析 用图形处理软件Photoshop使用标
尺工具和参考线工具分析图片中的DNA片段,扩增谱
带均以0或1建立数据库,扩增带存在时记为“1”,不存
在时记为“0”,最后将条带数据转换为基因型数据。根
据Nei遗传一致度,采用UPGMA方法,运行NTSYS 2.10
软件的SHAN程序进行聚类分析。用Popgene软件计算
Nei’s 基因多样性平均指数和Shannon’s 多样性信息
平均指数。
2 结果与分析
2.1 基因组DNA提取
由于毛葡萄属于藤本植物,叶片组织多酚、多糖及
蛋白质,因此利用改良的CTAB法提取叶片总DNA,即
在原有CTAB提取方法基础之上,以聚乙烯吡咯烷酮
(PVP)去除酚类物质对DNA质量的影响,并重复氯
仿—异戊醇蛋白变性步骤,彻底去除蛋白质的污染。从
图1可知,琼脂糖电泳检测结果较好,说明DNA质量
较好,可用于下游研究。
1944· ·
表 1 毛葡萄种质资源信息
Tab.1 List of Vitis quinquangularis germplasms
编号 No. 来源地 Source 类型 Origin 花性 Flow sex
1 广西罗城县 Luochen,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
2 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
3 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
4 广西永福县 Yongfu,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雄株Male
6 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
7 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
8 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
9 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
10 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雄株Male
11 广西罗城县 Luocheng,Guangx 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
12 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
14 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
15 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
16 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
18 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
19 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雄株Male
20 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
21 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
22 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
24 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
25 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
26 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
27 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
28 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
31 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
33 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
34 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
35 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
36 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
37 广西罗城县Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
40 广西扶绥县 Fusui,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
41 广西扶绥县 Fusui,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
42 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雄株Male
48 广西罗城 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 两性花株系(野酿2号)Hermaphroditi
49 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
50 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
51 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雄株Male
55 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
61 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
66 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 两性花株系(野酿2号)Hermaphroditi
70 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 103的组培后代 Tissue culture progeny of No.103 雌株 Female
72 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 87的组培后代 Tissue culture progeny of No.87 雌株 Female
91 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
92 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
99 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 97的组培后代Tissue culture progeny of No.97 雌株 Female
100 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
102 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
104 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
105 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
106 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
107 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
108 广西都安县 Du’an,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
109 广西都安县 Du’an,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
113 广西都安县 Du’an,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
116 广西都安县 Du’an,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
118 广西都安县 Du’an,Guangxi 116的组培后代 Tissue culture progeny of No.116 雄株Male
119 广西扶绥县 Fusui,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
123 广西都安县 Du’an,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
126 广西都安县 Du’an,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雄株Male
129 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
130 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 113的组培后代 Tissue culture progeny of No.113 雌株 Female
131 广西都安县 Du’an,Guangxi 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
132 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 6与66杂交后代 Hybrid progeny of No.6 and No.66 两性花株系 Hermaphroditi
133 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 66自交后代Self-crossed progeny of No.66 两性花株系 Hermaphroditi
134 广西都安县 Du’an,Guangxi 鸟葡萄Wild grape 雌株 Female
201 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 66的组培后代 Tissue culture progeny of No.66 两性花株系 Hermaphroditi
202 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 103的组培后代 Tissue culture progeny of No.103 雌株 Female
203 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 97的组培后代 Tissue culture progeny of No.97 雌株 Female
204 广西罗城县 Luocheng,Guangxi 87的组培后代 Tissue culture progeny of No.87 雌株 Female
205 湖南怀化县 Huaihua,Hunan 野生资源Wild germplasm 雌株 Female
邹瑜等:70份毛葡萄种质资源遗传多样性的SSR分析 1945· ·
南 方 农 业 学 报
M 1
图 1 毛葡萄基因组DNA琼脂糖电泳检测结果
Fig.1 Electrophoresis detection results of total DNA
1-20:14,116,2,92,113,123,3,107,105,70,10,129,15,21,61,25,6,
42,28(编号对应表1 The materials No. corresponded with that of Tab.1)
基因组
TotalDNA
基因组
TotalDNA
表 2 不同SSR引物的碱基序列
Table.2 Sequence of different SSR primers
表 3 SSR扩增结果
Tab.3 Results of SSR amplification
引物 扩增总带数 多态性带数 多态率(%)
Primer Total amp- Polymorphic Percentage of
lified bands bands polymorphic bands
SCU04VV 10 10 100.0
SCU06vv 3 3 100.0
SCU11vv 5 5 100.0
9a21-1 5 5 100.0
ZAG21-1 9 9 100.0
ZAG93-1 13 12 92.3
4A1-1 14 11 78.6
4F3-1 11 9 81.8
ZAG7-1 15 4 26.7
ZAG12-1 10 10 100.0
ZAG14-1 7 7 100.0
ZAG15-1 7 7 100.0
ZAG25-1 6 4 66.7
ZAG30-1 11 11 100.0
ZAG47-1 6 6 100.0
ZAG67-1 15 9 60.0
31
图 2 利用SSR标记(引物ZAG25-1)分析毛葡萄遗传多样性
Fig.2 Genetic diversity analysis of Vitis quinquangularis by
SSR markers(primer ZAG25-1)
M:Marker;1-31:3,107,105,70,10,129,15,21,61,25,6,42,28,14,
116,2,12,91,113,123,7,72,203,132,204,66,48,3,27,12,202
2.2 毛葡萄种质的SSR扩增结果
在合成的40对SSR引物中(表2),经检测有16对
具有较好的扩增多态性(表3)。利用这16对引物对70
份毛葡萄进行遗传多样性分析(图2),在70份葡萄种
质间共扩增出123条清晰多态性条带,每对引物可检
测到等位位点数3~15个,多态率26.7%~100.0%。其中引物
SCU04vv、SCU06vv、SCU11vv、9a21-1、ZAG 12-1、ZAG
14-1、ZAG15-1、ZAG30-1、ZAG47-1多态率为100.0%。
2. 370份毛葡萄种质的遗传多样性分析结果
根据SSR 扩增结果,Popgene分析结果表明,种群
Nei’s 基因多样性平均指数为0.4412,多样性信息平
均指数为0.6308,具有较高的遗传多样性。利用
NTSYSpc 2.10e 软件进行Nei’s相似性系数分析,发现
70份毛葡萄种质的遗传相似系数在0.60~0.89。UPGMA
聚类分析结果表明,在遗传相似系数0.61 处,70份毛
葡萄材料可分为3 大类群(图3):第一类包含两份毛
葡萄资源,编号为70和91,均来自广西罗城县;第二类
包含5 份资源,编号为28、1、129、3和131,除131来自都
安外,另外4份来自广西罗城县;其余的63份材料为第
三类,其中50份为广西罗城县毛葡萄。说明广西毛葡
萄具有丰富的遗传多样性。
引物 Primer 正向引物序列(5-3)Sequence of forward primer 反向引物系列(5-3)Sequence of reverse primer
VRZAG7 GTGGTAGTGGGTGTGAACGGAGTGG AACAGCATGACATCCACCTCAACGG
VRZAG12 CTGCAAATAAATATTAAAAAATTCG AAATCCTCGGTCTCTAGCCAAAAGG
VRZAG14 ATCAAAGGCCTCCTTTATTGCCATC TAGTACCAACTACCAACAACCAAAG
VRZAG15 GGATTTTGGCTGTAGTTTTGTGAAG ATCTCAAGCTGGGCTGTATTACAAT
VRZAG25 CTCCACTTCACATCACATGGCATGC CGGCCAACATTTACTCATCTCTCCC
VRZAG29 ATAACCAGGACAAGTTATTCAAGCC ACCCAATTGACCATCTTTTATGCTG
VRZAG30 TGGTAAACCTAGAAAAATTCATCAA CATATGACCATGTCACTAAATTAAT
VRZAG47 GGTCTGAATACATCCGTAAGTATAT ACGGTGTGCTCTCATTGTCATTGAC
VRZAG62 GGTGAAATGGGCACCGAACACACGC CCATGTCTCTCCTCAGCTTCTCAGC
VRZAG67 ACCTGGCCCGACTCCTCTTGTATGC TCCTGCCGGCGATAACCAAGCTATG
VMC4F3 AAAGCACTATGGTGGGTGTAAA TAACCAATACATGCATCAAGGA
VMC4A1 ATGCGACCTTAATAAATTGGGAA AAGCTAGGCTTGTATGAGGGAGA
VRZAG21 TCATTCACTCACTGCATTCATCGGC GGGGCTACTCCAAAGTCAGTTCTTG
VRZAG93 TATGGAGGGACCGAGGTGGGCTAGG GCACTCTTCGACGTTAAACAAAGCC
SCU16VV CAAAGACAAAGAAGCCACCGAC ACCCTCTAAAGCACACACAGGAAC
VMC9A2.1 AGCTCGGCTAGCTGCAAAATC ACCCTTCCCTCTTCAAAACCC
SCU15VV GCCTATGTGCCAGACCAAAAAC TTGGAAGTAGCCAGCCCAACCTTC
SCU14VV CTGCACTTGAATACGAGCAGGTC TGTTATATGATCCTCCCCCTCCTC
SCU11VV AATTGATAGTGCCACGTTCTCGCC AACGCCGACAAGAATCCCAAGG
SCU06VV CCTAATGCCAGGAAGGTTGC CCCTAGTCTCTCTACCTATCCATG
SCU04VV TGTCCTCTTTCCCTCTCCCAAC CAGTCTGTCATCTGACCATGTAGCC
1946· ·
图 3 基于SSR的70份毛葡萄资源聚类分析结果
Fig.3 UPGMA dendrogram of 70 Vitis quinquangularis germplasms based on SSR results
邹瑜等:70份毛葡萄种质资源遗传多样性的SSR分析 1947· ·
南 方 农 业 学 报
3 讨论
毛葡萄是广西酿造葡萄酒的主要原料之一,开发
利用野生毛葡萄资源成为广西贫困石山地区脱贫致
富的重要途径之一。毛葡萄具有丰富的多样性变异,
不同毛葡萄品种在产量和抗病性方面有较大差异,但
其分类比较混乱,目前有关广西毛葡萄种质遗传多样
性和分类研究鲜见报道。因此,选择适宜的技术手段
对毛葡萄种质资源进行品种鉴定和遗传多样性分析,
为提高种质的利用效率和酿酒品种选育具有重要
意义。
邹瑜等(2012)对广西124份野生毛葡萄种质进行
生育期、果实性状等调查和分析,发现广西野生毛葡
萄资源丰富,性状多样性明显,变异幅度大。本研究采
用SSR标记技术对主要来自我国野生毛葡萄原产地广
西罗城县的毛葡萄资源进行遗传多样性分析,从分子
水平上揭示广西毛葡萄的遗传多样性,结果表明,从
40对SSR引物中筛选出16对引物具有较好的扩增多态
性,在70份葡萄种质间共扩增出123条清晰多态性条
带,每对引物可检测到等位位点数3~15个,多态率
26.7%~100.0%,有9对引物的多态比率为100.0%;Pop-
gene分析结果表明,广西毛葡萄种群Nei’s 基因多样
性平均指数为0.4412,多样性信息平均指数为0.6308,
具有较高的遗传多样性,遗传相似系数在0.60~0.89;
在遗传相似系数0.61处,70份毛葡萄材料可分为3 大
类群:除131号材料外,第一类和第二类中有6份种质
来自广西罗城县;第三类包括63份材料,其中50份来
自广西罗城县,说明广西毛葡萄具有丰富的遗传多样
性,进一步验证了前期研究结果(邹瑜等,2012)。此
外,发现来自广西罗城县以外的毛葡萄种质及毛葡萄
组培后代遗传多样性较低,可能是由于这些地区毛葡
萄种群数和种群内个体少,基因流动小;在选育组培
后代个体时,主要选择品质优异的个体,导致选育品
种的性状相似,降低了遗传多样性。
4 结论
本研究结果表明,广西毛葡萄具有较高的遗传多
样性,可为毛葡萄品种选育提供丰富的种质材料。
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(责任编辑 韦莉萍)
1948· ·