全 文 :收稿日期:2016-01-24
基金项目:广东省中医药管理局资助项目(20111083);广东药科大学“创新强校”医药化工省级实验教学示范中心资助项目(2014076)
作者简介:田素英(1968-),女,硕士,副教授,主要从事中药的应用开发与教学工作;E-mail:zsxqtsy@ 126. com。
* 通讯作者:梅全喜,E-mail:meiquanxi@ 163. com。
锈毛莓根的生药学研究
田素英1,2,何汉链1,梅全喜3*
(1. 广东药科大学医药化工学院,广东 广州 510006;2. 广东省化妆品工程技术研究中心,广东 中山
528458;3. 广州中医药大学附属中山医院,广东 中山 528400)
摘要 目的:通过对锈毛莓根的生药学研究,为该药的开发利用及质量标准的制订提供科学基础。方法:采用
性状、显微鉴别等方法研究锈毛莓根的生药学特征;并用紫外分光光度法测定其中的总黄酮含量。结果:锈毛莓根
性状、显微鉴别特征明显;其总黄酮含量为 102. 63 mg /g。结论:锈毛莓根的生药学特征明显,总黄酮含量可作为锈
毛莓的质量标准之一。
关键词 锈毛莓根;生药学研究;总黄酮测定
中图分类号:R282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2016)07-1507-02
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2016. 07. 015
锈毛莓 Rubus reflexus Ker 为蔷薇科悬钩子属植
物,其根具有活血化瘀、抗菌消炎、收敛、理气止痛、
散毒生肌、补肝肾、袪风湿、强筋骨之效〔1〕。而悬钩
子属植物在我国广泛应用,多具有活血化瘀、祛风祛
湿、清热解毒、止血之痛、固肾涩精等功效,化学成分
主要包括黄酮、萜、鞣质、甾醇等〔2〕。锈毛莓与粗叶
悬钩子亲缘关系较为密切〔3〕,且根与粗叶悬钩子、
茅莓的根极易混淆,因此,本研究对其进行性状、显
微鉴别,区分混淆品,同时对其所含主要成分黄酮进
行含量测定。
1 材料与仪器
1. 1 材料 锈毛莓采自广东省中山市五桂山镇长
命水村,经笔者田素英副教授鉴定为蔷薇科植物锈
毛莓 Rubus reflexus Ker的根。
1. 2 仪器 BK5000 数码摄影光学显微镜(重庆奥
特光学有限公司);UV1102 紫外分光光度计(上海
天美科学仪器有限公司)。
1. 3 试剂 槲皮素(批号:100081-201006)、芦丁
(批号:100080-201007)对照品购自中国食品药品检
定研究院。所用试剂均为分析纯。
2 方法
2. 1 性状鉴别 观察记录其形状、大小、表面特
征、质地、断面特征、气味等。
2. 2 显微鉴别 分别用石蜡制片和临时粉末制
片,在显微镜下观察记录拍照。
2. 3 黄酮含量测定 用紫外分光光度法测定黄酮
的含量。
3 结果
3. 1 性状特征 呈不规则圆柱形,灰棕色。长 3. 5
~ 8. 0 cm,直径 1. 0 ~ 2. 5 cm。有纵皱纹,栓皮剥落
处显露出棕色韧皮部。根头部稍大,近根头部多凹
凸不平或呈结节状。质坚硬,难折断。断面不平坦,
棕黄色,可见放射状“车轮纹”状纹理。气微,味稍
苦涩。
3. 2 显微特征
3. 2. 1 横切面:木栓层较薄,细胞有 7 ~ 9 层,切向
延长,径向排列较紧密整齐。木栓形成层不明显。
栓内层为 2 ~ 3 层薄壁细胞,皮层为 8 ~ 14 层细胞,
略呈切向疏松排列,有较多的分泌细胞。韧皮部较
大,射线多为 1 ~ 2 列细胞,呈放射状排列,韧皮纤维
多 1 ~ 2 个散在,可见草酸钙方晶。形成层成环,多
为 3 ~ 4 层细胞。次生木质部比较发达,占木质部
4 /5 左右;导管众多,多 1 ~ 2 个散在,且大小较均
匀;木射线细胞 1 ~ 2 列,呈放射状排列。韧皮部与
木质部的比例约 1 /4。见图 1。
3. 2. 2 粉末:呈浅棕红色。韧皮纤维壁木化,直径
21 ~ 32 μm,壁厚 3 ~ 7 μm。木薄壁细胞多呈近方
形,壁呈连珠状增厚,微木化,长径 26 ~ 43 μm。木
纤维壁呈连珠状增厚,微木化,纹孔为单纹孔,直径
45 ~ 67(84)μm,壁厚 2 ~ 5 μm,时见斜向隔膜。多
为具缘纹孔导管,少见网纹导管,直径 30 ~ 64 μm,
木化。草酸钙方晶大小悬殊。时见棕色块状物。石
细胞形状不规则,壁厚。木栓细胞呈不规则多角形。
见图 2。
3. 3 黄酮含量测定
3. 3. 1 溶液的制备:精密称取芦丁对照品 20 mg,
置 100 mL量瓶中,用甲醇适量溶解定容,得对照品
溶液(0. 2 mg /mL)。准确称取 2. 599 g药材粉末于
·7051·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 7 期 2016 年 7 月
图 1 锈毛莓根横切面简图(A)与详图(B)(×40)
1. 木栓层 2. 皮层 3. 韧皮部 4. 方晶 5. 分泌细胞
6. 次生木质部 7. 初生木质部 8. 形成层 9. 韧皮纤维
图 2 锈毛莓粉末图(×200)
1. 木薄壁细胞 2. 木纤维 3. 方晶 4. 网纹导管 5. 木
栓细胞 6. 具缘纹孔导管 7. 韧皮纤维 8. 石细胞
100 mL锥形瓶中,加入 80%乙醇 30 mL,浸泡 24 h,
超声提取 10 min,滤液用 80%乙醇定容于 100 mL,
得供试品溶液。
3. 3. 2 标准曲线的制备〔3〕:精密量取“3. 3. 1”项下
对照品溶液 1、2、3、4、5、6 mL,分别置 25 mL 量瓶
中,各加水至 6. 0 mL,加 5%亚硝酸钠溶液 1 mL,混
匀,放置 6 min,加 10%硝酸铝溶液 1 mL,摇匀,放置
6 min,加 4. 3%氢氧化钠试液 10 mL,再加水至刻
度,摇匀,放置 15 min,以相应的试剂为空白,经最大
波长扫描后在 506 nm波长处测定吸光度,以吸光度
为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。得回归方
程为:y = 11. 925x + 0. 0008,r = 0. 9999。结果表明
在 0. 01 ~ 0. 06 mg /mL 范围内浓度与吸光度线性关
系良好。
3. 3. 3 方法学考察:按“3. 3. 2”项下方法于 506 nm
处分别测定不同溶液的吸光度。精密吸取“3. 3. 1”
项下的对照品溶液 3 mL 于 25 mL 量瓶中测定吸光
度,RSD为 1. 1289%(n = 6),表明精密度良好。取
“3. 3. 1”的供试品溶液,在 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、
3. 0 h分别测其吸光度考察其稳定性和可重复性,
稳定性试验的 RSD为 2. 718%(n = 6),说明供试品
溶液在 3 h 内基本稳定;重复性试验的 RSD 为
1. 232%(n = 6),说明本测定法重复性良好。加样
回收率试验的平均加样回收率为 98. 7225%,RSD
为 1. 7606%(n = 6),表明加样回收率良好。
3. 3. 4 黄酮含量测定:按“3. 3. 2”项下方法分别测
定 3 批供试品溶液吸光度,代入回归方程,计算黄酮
类化合物的含量分别为 103. 43、102. 84、101. 62 mg /
g,平均含量为 102. 63 mg /g。
4 小结
本研究通过性状、显微鉴别,发现锈毛莓根的外
观颜色、表面特征与茅莓根有许多相似之处,均“有
纵皱纹,栓皮有时剥落,露出红棕色内皮,质坚硬,断
面有放射状纹理。气微,味微苦涩,根中央有初生木
质部”。而在其显微鉴别特征方面,二者有差异,锈
毛莓多方晶,少簇晶,形成层环明显,有石细胞;茅莓
多簇晶,形成层不明显〔4〕。以上特征都可作为鉴别
区分混淆品的依据。
查阅文献知锈毛莓含有大量黄酮类成分,但其
具体为哪类黄酮成分未见有关报道,因此,本实验采
用简便、成熟的紫外分光光度法以芦丁为指标测定
其总黄酮含量。
参 考 文 献
[1]廖继忠 . 锈毛莓化学成分及药效学研究[D].福州:福
建农林大学,2011.
[2]孟祥娟,刘斌,热增才旦,等 . 悬钩子属植物化学成分及
药理活性研究进展[J].天然产物研究与开发,2011,23
(4):767-775,788.
[3]陈小露,向丽,梅全喜 . 茅莓根及其混伪品的 DNA条形
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[4]任凌燕,李惠芝,邱宗荫,等 . 茅莓的生药学研究[J].
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·8051· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 7 期 2016 年 7 月