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综 合
华南远志DNA提取方法的比较研究
文⊙ 刘小刚 钟远强 (北京理工大学珠海学院化工与材料学院 广东科学技术职业学院计算机学院 广东珠海）
摘要:以华南远志干叶为材料，采用
琼脂糖凝胶电泳的方法，比较研究C T A B
法、高盐低pH法和SDS法3种方法对样品
DNA提取。结果表明：改良的CTAB法所提
取的D N A条带清晰，无明显降解，可供进
一步的分子生物学研究使用。
关键词:华南远志；干叶；总DNA
华南远志为一年生直立草本，为远志
科植物华南远志的干燥全草。目前对华南
远志的深入研究多集中在生物学特性以及
化学成分等方面[1]。摸索方便、快捷、高
质量D N A提取方法是从分子水平上研究
其物种多样性以及不同居群的关系的必要
前提。植物DNA提取方法主要包括C T A B
法、SDS法、高盐低pH法和果胶酶法等[2-
3 ]。由于植物代谢产物不同，提取高质量
D N A的方法也不尽相同。因此，研究不同
植物高质量D N A的提取方法具有重要意
义。
华南远志分布于福建、广东和广西等
省区。为开展华南远志资源分子生物学的
分析工作，针对样品采集时新鲜样品不宜
保存和运输的困难，以及直接采用C T A B
法提取的D N A样品酶切不完全，有时发
生褐变和变粘稠等现象。因此，我们进行
了华南远志干燥叶片D N A的提取方法的
研究，为深入进行华南远志资源保护、遗
传式样等分子生物学方面的研究奠定基
础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1华南远志叶片(硅胶干燥)。
聚乙烯吡咯烷酮( P V P )，上海生工；
十六烷基三乙基溴化铵（CTAB），Tris，乙
二胺四乙酸二钠( E D T A )，十二烷基磺酸
(SDS)，无水乙醇，异丙醇等均为国产分析
纯试剂。
1.1.2 主要仪器
Tocan 240凝胶成像系统；H8数显恒
温水浴锅
1.2 方法
1.2.1 华南远志样品DNA的提取
称取干叶0.03g，研磨成细粉状，移入
2ml 的离心管中，分别采用CTAB法[4]、
SDS法[5]和高盐低pH值法[6]提取总DNA。
另外，对样品的处理方法进行改进，将0 .
03g样品，与PVP(干叶量的10 %)共研磨
成细粉状后，移入2 m L的离心管中，加入
预温至65℃的TNE缓冲液(0.15 mol/L
NaCl、100 mmol/L Tris和20mmol/L
EDTA)，在65 ℃孵育10 min，7000 r/
m i n离心，弃上清，然后分别采用C T A B
法、SDS法和高盐低pH值法提取DNA，琼
脂糖凝胶电泳分析。
1.2.2 琼脂糖凝胶电泳
DNA提取样品利用1.0 %的琼脂糖凝
胶电泳，将5μL DNA样品加入5μL二
次蒸馏水，再加2μL溴酚蓝上样缓冲液
混合上样，80 V恒压电泳1小时，EB 染
色，Tocan 240凝胶成像系统照相分析。
2 结果与讨论
2．1 华南远志干叶 D N A的提取
3种方法均能提出样品 D N A，其中
CTAB法DNA量较大(图1)，而SDS法和
高盐低p H值法D N A条带清晰，但样品颜
色较深，且DNA量较少；结果表明：经过
PVP和TNE预处理,再用CTAB法提取样
品中D N A可以除去华南远志样品中的多
种次生代谢产物。
3 讨论
变色硅胶能有效、快速干燥植物叶
片，为解决野外采样时保存与运输等困难
提供了便利。因此，探索干组织D N A的提
取方法具有重要意义。虽然已有矮牡丹、
泡沙参、升麻和丹参等干叶片D N A的提
取方法的报道[7]，但是，采用CTAB法、
S D S法和高盐低p H值法提取的华南远志
干叶D N A，样品粘稠且易褐变。究其原
因，华南远志叶片中含有多种次生代谢
物，在破碎细胞提取D N A时，可与D N A
结合共沉淀。鉴于P V P能够结合多酚类物
质，同时参考多糖提取工艺［8］，因此，在
样品研磨过程中加入PVP,结合TNE缓冲
液热浸提的方法,可有效去除多酚和多糖
等多种次生代谢产物，且C T A B能与核酸
形成复合物，通过离心就可将C T A B -核
酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开，使
样品获得较高的纯度。
综上所述：PVP和TNE预处理，可有
效去除华南远志干叶中多种次生代谢物
质，经CTAB法提取的DNA条带清晰，粘
度小，无颜色变化，为深入进行华南远志
种植资源、遗传式样等分子生物学方面的
研究奠定基础。
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(上接295页)这非常有助于自然界的生态
保持平衡，保持物种的繁茂。
寒潮是风调雨顺的保障。我国受季风
影响，冬天气候干旱，为枯水期。但每当
寒潮南侵时，常会带来大范围的雨雪天
气，缓解了冬天的旱情，使农作物受益。
“瑞雪兆丰年”这句农谚为什么能在民间
千古流传？这是因为雪水中的氮化物含量
高，是普通水的5倍以上，可使土壤中氮
素大幅度提高。雪水还能加速土壤有机物
质分解，从而增加土中有机肥料。大雪覆
盖在越冬农作物上，就像棉被一样起到抗
寒保温作用。
有道是“寒冬不寒，来年不丰”，这同
样有其科学道理。农作物病虫害防治专家
认为，寒潮带来的低温，是目前最有效的
天然“杀虫剂”，可大量杀死潜伏在土中过
冬的害虫和病菌，或抑制其滋生，减轻来
年的病虫害。据各地农技站调查数据显示，
凡大雪封冬之年，农药可节省6 0％以上。
寒潮还可带来风资源。科学家认为，
风是一种无污染的宝贵动力资源。举世瞩
目的日本宫古岛风能发电站，寒潮期的发
电效率是平时的1.5倍。
寒潮影响范围其东西长度可达几百千
米到几千千米，但其厚度一般只有二三千
米。寒潮的移动速度为每小时几万米，与
火车的速度差不多。影响我国的寒潮大致
有三条路线：一条是西路。这是影响我国
时间最早、次数最多的一条路线。强冷空
气自北极出发，经西伯利亚西部南下，进
入我国新疆，然后沿河西走廊，侵入华北、
中原，直到华南甚至西南地区。第二条是
中路。强冷空气从西伯利亚的贝加尔湖和
蒙古人民共和国一带，经过我国的内蒙古
自治区，进入华北直到东南沿海地区。第
三条是东路。冷空气从西伯利亚东北部南
下，有时经过我国东北，有时经过日本海、
朝鲜半岛，侵入我国东部沿海一带。从这
条路线南下的寒潮主力偏东，势力一般
都不很强，次数也不算多。
6.寒潮的预防
应加强天气预报，提前发布准确的
寒潮消息或警报，当气温发生骤降时，要
注意添衣保暖，特别是要注意手、脸的保
暖；关好门窗，固紧室外搭建物；老弱病
人，特别是心血管病人、哮喘病人等对气
温变化敏感的人群尽量不要外出，外出
当心路滑跌倒；注意休息，不要过度疲
劳；提防煤气中毒，尤其是采用煤炉取暖
的家庭更要提防。
小结：寒潮是我国冬季经常出现的
一种天气现象，它在不同程度上影响着
人们的生产生活，了解寒潮天气的成因、
形成规律及特点，对于准确预报寒潮天
气有一定的指导意义。