全 文 ：紫红樟牙菜提取物对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的影响
赵刚 冯秋珍 陈家春 ,
湖北中医学院生物学教研室 , ’ 湖北中医学院中药鉴定教研室 武汉 43 00 61
摘要 本文以小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率 ( P c E M N R ) 为指标 , 测定了抗病毒性肝炎新药紫红璋牙菜的提
取物对哺乳动物遗传物质的诱变作用 。 结果表明 , 按该药临床人体使用量的 5倍 、 20 倍和 10 倍的剂量灌胃
处理小鼠所诱发的骨髓 cP Eh 1N R 与阴性对照 (生理盐水处理组 ) 相比均无显著性差异 ( 尸> 0 . 05 ) , 初步说明
紫红璋牙菜提取物对哺乳动物的遗传物质可能不具有损伤效应 。
关键词 紫红璋牙菜提取物 ; 小鼠 ; 骨髓嗜多染红细胞微核
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紫红璋牙菜 (S . 洲:卿 H em sl ) 为龙胆科 20 ~ 25 克 , 由湖北医学院实验动物 中心提
璋牙菜属植物 。 该属植物含有璋牙菜苦贰和 供 。
齐墩果酸 , 对病毒性肝炎有显著疗效 。 有报 2 . 紫红璋牙菜提取物制备 ; 将风干的紫
告指出 , 璋牙菜苦贰片能使乙肝表面抗原 红璋牙菜全草切碎成粗粉 , 用 85 %的乙醇提
( H压 A g) 阳性患者的转阴率达到 58 . 8% (” , 取 3次 , 经过滤后浓缩 (水浴法 , g h) 成每
故璋牙菜属植物是很有希望的抗病毒性肝炎 毫升含 6 克生药的流浸膏 。
新药 。 为了探讨璋牙菜提取物对哺乳动物遗 3 . 主要试剂 : 环磷酸胺 (注射用粉剂 , 上
传物质的影响 , 以间接了解该草药是否对人 海第十二制药厂生产 ) 。 小牛血清 (武汉杨子
体遗传物质有致突变效应 , 本文根据国家卫 江生化制药厂生产 ) 。 甲醉 (南京化学试剂厂 ,
生部关于新药审批办法的要求 (2) , 以小鼠骨 A R ) 。 冰 乙酸 (上海试剂三厂 , A R ) 。
髓 P C E MN R 为指标 , 对紫红璋牙菜提取物的 4 . 实验分组 : 将 50 只昆 明种小白鼠随
遗传毒理学效应进行了实验分析 。 机分为 5 组 , 每组 10 只 , 雌雄不拘 。 其中 3
个实验组分别按 2 4 1 5 m g / k s 、 9 6 6 0 m s / k g 和
材料和方法 妞8 3 0 0 m g / k g 的剂量 (分别相当于人体临床
1
. 实验动物 : 昆明种成年小白鼠 , 体重 用量的 5 倍 、 20 倍和 10 0倍 ) 给每只小鼠灌
服紫红璋牙菜提取物 ; 阳性对照组的小鼠按 凉干后用 l :1 0的 Gi e m a s染液 (p H 6. 8的
拍 m / s g k的剂量腹腔注射环磷酸胺 ; 阴性对 PB S 稀释 )染色 1 0而n , 自来水冲洗 , 空气干
照组则灌服生理盐水 。 实验组和阳性对照组 燥 。
共 2 次给药 , 间隔 24 h , 第 2 次给药后 6 h 取 6 . 观察计数 : 先用低倍镜选择细胞分
材 。 阴性对照组灌服 2 次生理盐水 , 每只每 散 、 染色良好的区域转换油镜观察计数 。 每
次灌 0 . 5 m l 。 只小鼠观察计数 2 0 0 0个嗜多染红细胞 , 并记
5
. 取材与制片 : 将经过上述处理后的各 录含有微核的嗜多染红细胞数 (一 个细胞出
组小鼠用颈椎脱臼法处死 , 剥离下肢 , 取出 现一个或一个以上的微核均计数为一个 ) 。 出
两根股骨 ,用卫生纸擦净其上的肌肉和血污 , 现微核的细胞数以千分率 (%。 ) 表示 。 将测
剪掉股骨头 , 用带有 6 号针头的注射器抽取 得的实验组 、 阳性对照组和阴性对照组的微
凌ml 生理盐水 , 将针头插入骨髓腔 , 反复冲洗 核率分别进行比较 , 用 t 检验方法进行差异
骨髓细胞移至刻度离心管中 。 用吸管打碎细 的显著性检验 。
胞团 , 以 15 0 0一 2 0 0 0 r / n 飞i ,、 离心 3一 5 。 、 ; , 、 ,
弃 上清液后按吴鹤龄等 人的方法 ` , 制备骨髓 结 果
细胞悬液 , 血常规涂 片法涂片 . 自然于燥 。 将 各组小鼠的嗜多染红细胞微核检测结果
涂片放入 ca m oy 固定液 中固定 比 半 ,。 . 取出 详见 卜`表 。
附表 紫红摔牙菜提取物对小鼠 P c EM N R 的影响
微核率 (%。 )组 别 剂 肚 油物故 观察代公数 M N 细胞数
: 士 改
阴性对照 价南 ,二 l八畏 1 0 只 2 0 0 0 0 9 4 J . 7 0士 . 1. 3 0
实验 I 组 2 . 49 / kg 1 0 乡廷 2 0 0 0 0 ] 0 9 5 . 4 5士 0 . 9 1
实验 n 组 g ` g / k s 1 0 乡毛 2 0 0 0 0 1一6 5 . 8 0士 r . 4 6
实验 . 组 4 8 . 38 / k s 1 0 只 2 0 0 0 0 1 1 9 5 . 9 5士 1 . 65
阳性对照 4 0 n l g / k g 1 0 只 2 0 0 0 0 62 0 3 1 . 0士 3 . 7 6
结果表 明 , 本实验所用昆明种小 鼠的 自 无着丝粒断片演变而成 。 故微核的多少可以
发微核千分率 (%。 ) 为 4 . 70 土 1. 3 0 , 与石继 反映染色体损伤的程度 `5) 。 由于微核检测具
红等报道的结果一致 〔;) , 但.高于陈少华等 人 有灵敏可靠而又简便易行的特点 , 故被广泛
的结果 `s) 。 各实验组小鼠的微核率分别与阴 应用于化学物质致人和动物染色体损伤效应
性对照组 相 比较 , 均 无显著性 差异 (P > 的分析 。 在我国的新药审批办法中 , 小鼠骨
。. 05 ) ; 而阳性对照组小鼠的微核率极显著地 髓 P C E 微核检测被列为新药致 突变试验 的
高于阴性对照组 ( `= 2 0 . 8 7 , p < 0 . 0 0 1 ) 。 必做项 目 ( 2) 。
本研究结果表明 , 紫红璋牙菜的提取物
讨 论 无论低剂量或高剂量都不显著 地诱发小鼠
小 鼠骨髓 CP E 微核测定是 国际上公认 P C E 微核率的升高 , 提示该药物对哺乳动物
的检 测化学物质致突变性 的标准方法 ( 3) 之 的染色体可能不具有损伤效应 。
一 , 它由呱 t e r 和 cS h m i d 在 7 0 年代初所创 环磷酸胺 ( e y e lo ph o s ph a m i d e )是临床上常
立 ( ,) 。 H de id e 指出测定骨髓嗜多染红细胞微 用的抗肿瘤药物 , 虽疗效明显 , 但对机体细
核率是检测细胞遗传损伤的一个非常有用的 胞的遗传物质具有较强的诱变性 , 能诱发哺
指标`6) , 因为一般认为微核是由染色体或染 乳动物细胞的染色体发生断裂 , 故在国内外
色单体在诱变物质作用下发生断裂所形成的 ` (下转第 37 页 )
5
一侣 M入 体外 c H L细胞染色体畸变试验
结果见表 3。 各试验组畸变率与阴性对照组
相 比均无显著性差异 , p > 0 . 05 ; 而阳性对照
组显示出很 高的暗变率 , 尸 < 0 . 0 1 ; 畸变类型
主要为染色体断裂 、 环状 、 易位和碎片等 。 5 -
表 3 5一招M N 体外 e H L
` MN 对 e H L 细胞 cI s 。为 2 . s m s /m l , 当实验
剂量大于 2 . s m g /m l 时 , 大部分培养细胞生
长被抑制 , 故选择 2 . sm g /m l 为最高试验剂
量是较为合理的 。
细胞染色体畸变试验结果
组别 剂量 S gM议
八U.几`nó,1nùù曰八U
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ù日ō八Unù1ànó曰U甘nO八U曰0nóU八曰nUC甘ǐ,1,
.且...J``二I通l弓且1t卫
十一一+
24双别刽
(啤 /而 )
0
.
5 . 妞
0
.
5 m l
培养时间
(小时 )
观察
细胞数
染色体畸变 判定
类型 %
bhb
尸勺今曰八O
户0山11口尸
一óO`b令口1
.-
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柑料成0魂口匕O`同峨
溶媒对照
导 IS M N
MM C
CP
l
us/ m
l
4 0昭m/ l
本研究结果提示 , 5一 IS MN 对原核生物未
表现出致突变性 , 也未观察到对哺乳动物细
胞的染色体损伤作用 , 故认为其在临床用药
上是较为安全的 。
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助 n诚 t y l铭 t . M u at t R仿 1 9 8 3: 1 1 3 : 17 3
(上接第 39 页 )
的微核检测试验中 , 常将环磷酸胺作为阳性
对照药物 。 在本实验中 , 环磷酸胺处理组的
小鼠 P C E 出 现 了较 高的微 核率 (3 1 . 0 士
3
.
76 编 ) , 与生理盐水组的小鼠相 比差异极为
显著 , 这再次验证了环磷酞胺是一种较强的
阳性诱变剂 。
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