全 文 ：收稿日期:2008-01-27
作者简介:杨爽(1982-), 女 ,实验员。主要研究方向:西藏
当地濒危植物组织培养研究。
离体鸡蛋参不定芽增殖条件筛选
杨 爽 ,李春燕 ,马和平
(西藏农牧学院 ,西藏 林芝 860000)
摘 要 以 MS培养基为基本培养基 ,附加 NAA0.05mg/L和不同浓度的 6-BA、KT、ZT, 并以食用白砂糖代替分
析纯蔗糖 , 以自来水代替蒸馏水对鸡蛋参进行增殖培养 , 比较生长状况。结果表明 , 6-BA、KT、ZT均能促进鸡蛋参
单芽茎段的增殖 , 其中以 ZT的效果最好;最适增殖培养基为 MS+蔗糖 30 mg/L+琼脂 5.5 g/L+ZT1.0 mg/L+
NAA0.05mg/L;可以以食用白砂糖代替分析纯蔗糖 , 以自来水代替蒸馏水对鸡蛋参进行增殖培养。
关键词 鸡蛋参;增殖培养;培养基
中图分类号:Q813.1+2 文献标识码:A 文章编号:1006-9690(2008)05-0060-03
StudyonCultureMediumofCodonopsis
convolvulaceaKurzMultiplicationCulture
YangShuang, LiChunyan, MaHeping
(TibetAgricultureandAnimalHusbandryColege, Linzhi860000, China)
Abstract ToselecttheoptimummultiplicationmediumofCodonopsisconvolvulaceaKurz, NAA、6 -
BA、KTandZTweresupplementedinMSbasalmedium, andsucroseofanalyticalpurewasreplacedby
eatablesugar, distiledwaterwasreplacedbywater.Thestudyshowedthat6-BA、KTandZtcouldpro-
motemultiplicationofstemsegmentwithsinglebud.AndZTwasthebestofal.Theoptimummultipli-
cationmediumwasMS, 30 g/Lsucrose, 5.5 g/Lagar, ZT1.0 mg/L, NAA0.05 mg/L.Inaddition,
sucroseofanalyticalpurecouldbereplacedbyeatablesugarinthemedium.
Keywords CodonopsisconvolvulaceaKurz;multiplicationculture;medium
鸡蛋参(CodonopsisconvolvulaceaKurz)属桔梗
科党参属植物 ,又称牛尾草 、补血草 ,产于西藏南部 、
云南 、四川西部 ,生于海拔 1 200 ～ 3 100 m山地草坡
或灌丛中 ,种子繁殖。其根供药用 ,治肺痨咳嗽 ,疝
气等症 。目前国内有关鸡蛋参组织培养的报道较
少 ,本文以鸡蛋参茎段为实验材料 ,对其不定芽的增
殖作了较为详细的研究 ,为运用生物技术进一步开
发利用这一植物资源提供依据 。
1 材料与方法
1.1 实验材料
鸡蛋参由西藏农牧学院小农场提供 ,选取健壮无
病的鸡蛋参植株 ,取其嫩茎段作为外植体 。接种前先
用流水冲洗约 30 min,同时用小软刷刷去表面尘土 ,
再用吸水纸吸干 ,然后用 0.1%的升汞处理 7 min,最
后用无菌水冲洗 5次 ,并用无菌纸吸干水后接种于
MS培养基。在温度为 22 ～ 25℃、光照为 12 h,光强
为 1 000lx的条件下培养 20d后 ,获取无菌苗。
1.2 实验设计
各实验均以 MS为基本培养基 ,其中实验①附
加蔗糖 30 g/L和琼脂 5.5 g/L,其他成份见表 1;实
验②中的优化实验 1附加琼脂 5.5 g/L,其他成份见
表 2。实验②中的优化实验 2附加蔗糖 30 g/L和琼
脂 5.5 g/L, 并用自来水代替蒸馏水 ,其他成分见
表 3。
1.2.1 实验①:不同激素对鸡蛋参增殖生长的影响
实验
见表 1。
—60—
第 27卷第 5期
2008年 10月 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources Vol.27 No.5Oct.2008
表 1 不同激素对鸡蛋参增殖生长的影响实验
培养基
编号
NAA的质量
浓度 /mg·L-1
6-BA的质量
浓度 /mg·L-1
KT的质量浓
度 /mg·L-1
ZT的质量
浓度 /mg·L-1
A 0.05 1.0 0 0
B 0.05 1.5 0 0
C 0.05 2.0 0 0
D 0.05 0 1.0 0
E 0.05 0 1.5 0
F 0.05 0 2.0 0
G 0.05 0 0 1.0
H 0.05 0 0 1.5
I 0.05 0 0 2.0
1.2.2 实验②:鸡蛋参增殖生长培养基配方优化实验
见表 2、表 3。
表 2 鸡蛋增殖生长培养基配方优化实验 1
培养基
编号
碳源质量
浓度 /30mg·L-1
NAA的质量
浓度 /mg·L-1
ZT的质量浓
度 /mg·L-1
G 蔗糖 0.05 1.0
J 砂糖 0.05 1.0
表 3 鸡蛋参增殖生长培养基配方优化实验 2
培养基
编号 水源
NAA的质量
浓度 /mg·L-1
ZT的质量浓
度 /mg·L-1
G 蒸馏水 0.05 1.0
K 自来水 0.05 1.0
1.3 实验方法
剪取无菌苗茎段 ,将其剪成 0.5 cm左右的小
段 ,接种在不同配方的培养基上 ,每瓶按 5个茎段 ,
每种配方接种 10瓶 。培养物置于温度 22 ～ 25 ℃、
光照为 12h,光强为 1 000lx的条件下培养 ,培养 30
天后 ,记录继代后无根苗数 、增殖系数 、平均苗高 ,并
用目测法观察组培苗生长状态 。筛选出较优培养基
配方后 ,再培养 15天 ,再次通过观察对比组培苗的
生长状态 ,最终确定出最佳培养基配方。
2 结果与分析
2.1 不同种类的细胞分裂素对鸡蛋参增殖生长的
影响
由表 4可以看出 , 6-BA、KT、ZT均能够促进单
芽茎段的腋芽萌发生长 ,其中以 MS+ZT1.0 mg/L
的效果最为明显 。 6 -BA、KT、ZT均能够促进腋芽
增殖 ,但不同激素对腋芽增殖系数不同 ,当 ZT浓度
为 2.0mg/L时 ,增殖系数最高 ,达到 4.86;当 KT浓
度为 1.5 mg/L时 ,增殖系数最高 ,达到 3.04;当 6-
BA浓度为 2.0mg/L时 ,增殖系数最高 ,达到 1.70。
MS+NAA0.05mg/L+ZT2.0mg/L的增殖系数比
MS+NAA0.05 mg/L+6-BA2.0 mg/L和 MS+
NAA0.05 mg/L+KT1.5 mg/L分别高出 185.88%
和 59.87%。同一激素不同浓度对腋芽增殖生长也
不同 ,以 KT为例 , MS+NAA0.05 mg/L+KTmg/L
的增殖系数和平均苗高分别比 MS+NAA0.05mg/
L+KT2.0 mg/L高出 102.67%和 28.27%。结果
表明 , 6-BA、KT、ZT均能够促进鸡蛋参单芽茎段的
腋芽增殖 ,其中以 ZT的效果最好 。
表 4 不同种类的细胞分裂素对
鸡蛋参增殖生长的影响 (30d时)
培养基
编号
继代无根
苗数
继代后
无根苗数
增殖
系数
平均苗
高 /cm
A 50 79 1.58 0.4
B 50 71 1.42 0.8
C 50 85 1.70 0.6
D 50 101 2.02 0.9
E 50 152 3.04 0.7
F 50 75 1.50 0.5
G 50 206 4.12 1.6
H 50 217 4.34 1.3
I 50 243 4.86 1.1
2.2 不同浓度的 ZT对鸡蛋参增殖生长的影响
通过表 4可以看出 ,当 ZT的浓度为 2.0 mg/L
时 ,增殖系数最高 ,达到 4.86,平均苗高为 1.1 cm。
随着 ZT浓度的的降低 ,增殖系数有所下降 ,但平均
苗高呈上升趋势。同时可以观察到随着 ZT浓度的
的降低 ,组培苗基部的愈伤组织块逐渐变小。结果
表明 , ZT的浓度过高或过低均不利于鸡蛋参不定芽
的增殖生长。
2.3 鸡蛋参增殖生长培养基配方的筛选
又培养 15 d后 ,再次对 G、H、I3种培养基上的
组培苗的生长情况进行观察 ,发现继代无根苗数量
都有不同程度的增加 ,其中 G培养基的增殖系数达
到 5.44,平均苗高达到 3.8 cm,叶片舒展 ,茎健壮呈
紫红色 ,基部愈伤组织块仍较大 。 H、I培养基增殖
系数均超过了 7,不定芽的平均高度约为 2.4 cm,但
叶片都有不同程度黄化和皱缩现象 ,茎的紫红色较
G培养基更深 ,愈伤组织块更大 ,直径达 1.2 ～ 1.5
cm。 I培养基上的丛生芽出现了较为严重的玻璃化
现象 。综合腋芽增殖生长的上述表现 , 以 MS+
NAA0.05 +ZT1.0培养基最为合适 ,既能维持一个较高
的增殖水平 ,又能保证植株生长健壮。
2.4 鸡蛋参增殖生长培养基配方优化实验
用食用白砂糖来代替分析纯的蔗糖对鸡蛋参进
—61—
第 5期 杨 爽 , 等:离体鸡蛋参不定芽增殖条件筛选
行增殖培养实验 ,其结果见表 5。不定芽增殖系数
及平均苗高在 2者间均无明显差异。这表明在对鸡
蛋参进行增殖培养时 ,可以用食用白砂糖来代替分
析纯的蔗糖 。
表 5 蔗糖 、砂糖浓度组合对鸡蛋参增殖生长的影响
培养基
编号
碳源
(30mg/L)
继代无
根苗数
继代后
无根苗数
增殖
系数＊
平均苗高＊
/cm
G 蔗糖 50 206 4.12Aa 1.6
J 砂糖 50 201 4.02Aa 1.7
＊同一列不同大写字母表示在 0.01水平上有显著差异;同一列不
同小写字母表示在 0.05水平上有显著差异。
用自来水来代替蒸馏水对鸡蛋参进行增殖培养
实验 ,其结果见表 6。不定芽增殖系数及平均苗高
在 2者间仍均无明显差异。这表明在对鸡蛋参进行
增殖培养时 ,可以用自来水来代替蒸馏水 。
表 6 蒸馏水 、自来水对鸡蛋参增殖生长的影响
培养基
编号 水源
继代无
根苗数
继代后
无根苗数
增殖
系数＊
平均苗高＊
/cm
G 蒸馏水 50 206 4.12Aa 1.6
K 自来水 50 204 4.08Aa 1.9
＊同一列不同大写字母表示在 0.01水平上有显著差异;同一列不
同小写字母表示在 0.05水平上有显著差异。
3 讨 论
本实验结果表明 , 6-BA、KT、ZT均能够促进鸡
蛋参单芽茎段的不定芽增殖 ,其中以 ZT的效果最
好。同一激素不同浓度对不定芽增殖生长的影响也
不同 。从增殖系数看 ,较高浓度的 ZT可以大大提
高每个不定芽的增殖倍数 ,浓度过低则对不定芽增
殖不利。从不定芽生长情况看 , ZT浓度过高不利于
不定芽的生长 ,随着浓度的增加 ,平均苗高呈降低
趋势 。
不定芽的茎呈紫红色估计是对 ZT的一种生理
反应 ,加入 ZT除了影响这一感官指标外 ,对其他生
理指标有何影响还有待进一步研究。在以后的继代
培养中 ,不再加入 ZT,紫红色基本消失。
参考文献:
[ 1] 中科院西北高原生物所 .藏药志 [ M] .西宁:青海人民出版
社 , 1991.
[ 2] 青海省藏医药研究所 .中国藏药 [ M] .上海:科学技术出版
社 , 1997.
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 27卷