全 文 ：龙须藤中黄酮类化合物提取条件的研究
徐　伟 1 ,洪振丰 2 ,王瑞国1(1.福建中医学院 药学系 /中药学福建高等学校重点实验室 ,福建 福州 350108;
2.福建中医学院 中西医结合系 ,福建 福州 350108)
摘要:目的探讨龙须藤中以芦丁为指标的总黄酮最佳提取条件 。方法 正交试验法对龙须藤中黄酮类化合物的提取工艺进行
优选 ,以提取时间 、乙醇浓度 、提取次数 、料液比为因素 ,以总黄酮得率为指标进行试验 。结果 最佳提取工艺条件:60%(体积分
数)乙醇溶液 ,提取时间 3 h,提取次数 3次 ,乙醇用量 10倍 ,提取率为 7.426%。结论 本实验结果可靠 ,方法简便 ,适合于该药
材的批量提取 。
关键词:龙须藤;黄酮类化合物;芦丁;提取条件
中图分类号:R284.2　文献标识码:A　文章编号:1006-8783(2006)05-0596-02
基金项目:福建省教育厅科研项目(JA04211);福建省科技厅
重点项目(2004I005)
作者简介:徐伟(1975-), 男 , 讲师 , 主要从事药物化学方向
的研究 E-mail:xwfjtcm@sina.com。
ExtractionconditionofflavonoidsfromBauhiniachampioniBenth
XUWei1 , HONGZhen-feng2 , WANGRui-guo1
(1.DepartmentofPharmacy, 2.DepartmentofIntegratedMedicine, FujianCollegeofTCM, Fuzhou, Fujian350108 , China)
Abstract:ObjectiveTooptimizetheextractionprocedureofflavonoidsfromBauhiniachampioniBenth.MethodsAnorthogonaltest
wasusedtotestthefactorsofextractiontimes, extractiontimes, alcoholconcentrationandsolventamount.Thecontentofflavonoidswas
determinedbyspectrophotometry.ResultsTheoptimumextractionprocesswasasfolows:10timestheamountof60% ethanol, 3times
ofextractionand3heach.Theyieldofextractedflavonoidsreached7.426%.ConclusionThemethodissimpleandconvenient, which
canbeusedtoextractflavonoidsfromBauhiniachampioniiBenthinlargescale.
Keywords:BauhiniachampioniBenth;flavonoids;extractcondition
　　龙须藤 (BauhiniachampioniBenth.)又称九龙
藤 、梅花入骨丹 ,系双子叶植物豆科羊蹄甲属植物多
年生藤 [ 1] ,具有祛风湿 、行血气之功效 ,主治跌打损
伤 、风湿骨痛 、心胃气痛[ 2] 。主要分布福建 、广东 、
江西等地 ,尤其在福建福州永泰县青云山地区资源
丰富。其主要化学成分为黄酮 、氰苷 、没食子酸
等 [ 1] 。根据闽南名医黄金钢验方 ,以龙须藤为主要
成分的康美肤烧伤膏在临床上具有良好治疗烧烫伤
作用 ,药理研究表明 ,龙须藤中黄酮类成分显示出较
强的镇痛抗炎活性 [ 3] 。本实验就龙须藤中黄酮类
化合物的提取条件进行优选。
1　原料 、试剂和仪器
1.1　原料
龙须藤 ,采集于福建福州永泰县青云山地区。由
福建中医学院药学系中药鉴定教研室鉴定为豆科羊蹄
甲属植物龙须藤(BauhiniachampioniBenth.)的藤。
1.2　试剂
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所;批号:
100080-200306);乙醇 ,石油醚 ,亚硝酸钠 ,硼酸 ,硝
酸铝 ,氢氧化钠等均为 AR。
1.3　仪器
WFZ800-D3B紫外可见分光光度计(北京瑞利
分析仪器公司);PHS-3C酸度计 (上海雷磁仪器
厂);BS-200S电子天平(赛多利斯公司);HH-2数显
恒温水浴锅(江苏国华电器有限公司);RE52-99旋
转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);DL-5低温冷却循
环泵(郑州长城科工贸公司)。
2　方法与结果
2.1　龙须藤总黄酮含量的测定
精密称取干燥至恒重的芦丁对照品 23.0 mg,
置 50 mL量瓶中 ,加 95%(体积分数)乙醇超声溶解
并稀释至刻度 ,摇匀 ,备用 。精密吸取对照品溶液
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL,分别置于 25 mL量
瓶中 ,加水至 6.0 mL;加入 5%(质量分数)亚硝酸
钠溶液 1.0mL,使混匀 ,放置 6min;加入 10%(质量
分数)硝酸铝 1.0 mL,摇匀 ,放置 6 min;再加入 4%
596
第 22卷第 6期 广　东　药　学　院　学　报 Vol.22 No.6
2006年 12月 JOURNALOFGUANGDONGCOLLEGEOFPHARMACY Dec.2006
(质量分数)NaOH溶液 10.0 mL,加水至刻度 ,摇
匀 ,放置 15 min;照分光光度法(中国药典 2005版一
部附录 VB)于 500 nm的波长处测定吸光度 A。
以吸光度(A)对质量浓度(ρ)进行线性回归 ,得
曲线方程:A=0.0055ρ+0.024, r=0.99987,表明芦
丁对照品在 18.40 ～ 110.4 μg范围内线性关系良
好 ,可用于龙须藤总黄酮含量的测定 。
2.2　样品含量测定
将采集的龙须藤洗净 ,晾干 ,置于恒温干燥箱中
于 75 ℃下干燥 8 h,取出粉碎 ,过筛(20目),所得粉
末干燥保存备用 。按下述试验条件回流提取后 ,将
粗提取液过滤 ,浓缩 ,放置冷却后定容于 100 mL量
瓶中。精密吸取样品溶液 1.0mL置 10mL量瓶中 ,
再精密吸取溶液 1.0mL,按标准曲线的制备项下方
法 ,自 “加水至 6.0 mL”起依法测定吸光度 ,代入回
归方程计算出样品溶液中总黄酮的提取率(总黄酮
提取率 =总黄酮质量 /龙须藤质量 ×100%)。
2.3　提取方法的选择
称取龙须藤粉末 10 g,分别加水(8倍量 、0.4%
硼酸)和 50%(体积分数)乙醇(8倍量 、0.4%硼酸)
煮沸 3 min后调 pH8 ～ 9,在 80 ℃微沸 2h后过滤;
在同样条件下分别在石油醚回流(8倍量 、75 ℃、2
h)和 80%(体积分数)乙醇回流(8倍量 、80℃、2h)
后过滤;滤液浓缩并定容于 100 mL量瓶 ,测吸光度 ,
计算总黄酮含量 。不同提取方法结果见表 1。
表 1　不同方法黄酮的提取率
Tab.1　Extractionyieldoftotalflavonoids
提取方法 提取率 /%
碱水 1.624
碱性稀醇 2.432
石油醚 3.590
乙醇 6.814
　　由表 1可知 ,碱水提 、碱性稀醇提收率较低 ,且
提取液存放易腐败变质;石油醚提取提收率较低 。
结合提取率 、溶剂回收等因素 ,确定乙醇提取法为龙
须藤提取方法。
2.4　正交实验确定最佳提取工艺
根据预试验结果及参考文献 [ 4] ,以醇提时间
(A)、乙醇浓度(B)、醇提次数(C)及醇用量(D)4
个试验因素 ,每个因素 3个水平进行优选 ,按 “样品
含量测定”项下方法测定吸光度 ,以总黄酮含量为
考察指标进行正交试验。并进行极差分析和方差分
析 。结果见表 2、表 3、表 4。
表 2　因素水平表
Tab.2　Levelsoffactor
水
平
因素
A
醇提时间 /h
B
乙醇浓度 /%
C
醇提次数 /次
D
乙醇用量 /倍
1 1 60 1 6
2 2 70 2 8
3 3 80 3 10
表 3　正交试验结果
Tab.3　Orthogonaldesign
试验编号 A B C D 提取率 /%
1 1 1 1 1 1.947
2 1 2 2 2 5.604
3 1 3 3 3 6.875
4 2 1 2 3 6.836
5 2 2 3 1 5.301
6 2 3 1 2 3.648
7 3 1 3 2 7.212
8 3 2 1 3 4.137
9 3 3 2 1 5.541
K1 14.426 15.995 9.732 12.789
K2 15.785 15.042 17.981 16.464
K3 16.890 16.064 19.388 17.848
R 0.821 0.341 3.219 1.686
表 4　以黄酮含量为标准的方差分析结果
Tab.4 　 Varianceanalysisbased on thecontentsof
flavonoids
方差
来源
离差平
方和
自由
度 均方 F值 P值
A 1.02 2 0.51 4.67
B 0.22 2 0.11
C 18.14 2 9.07 83.41 P<0.05
D 4.56 2 2.28 20.95 P<0.05
　　由表 3、表 4极差分析结果可知 ,影响提取得率
的因素主次顺序为:C>D>A>B,以 B的极差最
小 ,故以 B项为误差 ,进行方差分析 。结果 C、D因
素有显著性差异 , C3 >C2 >C1 , D3 >D2 >D1 ,应取最
好值 C3D3;A、B因素虽无显著性差异 ,但 A因素的
水平越高 ,总黄酮的得率越高 ,取 A3;B因素的三个
水平对结果影响不大 ,再考虑生产成本 ,取 B1。因
此 ,确定最佳处方组成为:A3B1C3D3 ,即用原料 10
倍体积 60%(体积分数)乙醇溶液 ,回流提取 3次 ,
每次 3 h。
2.5　验证实验
按此优选的最佳提取工艺制备 3批样品 ,测定
样品中总黄酮 ,结果提取出的总黄酮提取率平均达
到 7.426%。 (下转第 601页)
597
第 6期　徐　伟 ,等.龙须藤中黄酮类化合物提取条件的研究
3　讨论
本实验通过一系列筛选 ,建立了较好的色谱洗
脱条件 ,各色谱峰之间分离度良好 ,所得到的苦碟子
的 HPLC指纹图谱重现性 、精密度和稳定性均良好 。
运用 DAD二极管阵列检测器 ,采集 200 ～ 400
nm的三维 HPLC-UV联用图 ,发现苦碟子药材供试
品溶液在 265 nm下有最大吸收波长 ,无色谱峰丢失
现象 ,信噪比优于 254 nm,综合考虑 ,选择 265 nm
波长作为苦碟子药材指纹图谱检测波长。
不同批号苦碟子药材所含各有效成分基本相
同 ,但是各成分含量有差异 ,如果要保证药品的一致
性 ,应注意药材产地和采收时间。咖啡酸是稳定存
在于苦碟子药材中的一个活性成分 ,重现性较好 ,分
离度较好 ,因此选择咖啡酸为指纹图谱的参照物 。
根据此方法确定了其中 38个共有峰 ,并利用相似度
软件对苦碟子指纹图谱进行匹配 ,结果表明东北产
10批苦碟子在整体上相似 ,因此以这 10批样品的
相对峰面积和相对保留时间的均值建立了模式图
谱 ,可用于苦碟子的真伪鉴别和质量评价。
参考文献:
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国药物化学杂志 , 2000, 10(2):143-144.
[ 2]韩文志 , 姜瑞芝 ,等.苦碟子中黄酮苷的分离与结构鉴定
[ J] .中国药学杂志 , 2005 , 40(19):1453.
[ 3]聂霞.苦碟子的药理作用及其临床应用 [ J] .山西医药杂
志 , 2006 , 35(7):658-659.
[ 4]高展 , 黄罗生.灯盏细辛 HPLC指纹图谱的研究 [ J] .海
峡药学 , 2005 , 17(3):86-88.
(收稿日期:2006-09-28;修回日期:2006-10-30)
(上接第 597页)
3　讨论
龙须藤中含有黄酮化合物 ,具有明显的镇痛抗
炎活性 ,可以抑制某些炎症介质和细胞因子的生成 ,
是康美肤烧伤膏中的主要成分 ,故以龙须藤中总黄
酮含量为测定指标之一 ,其测定方法简单可行 。在
提取中发现药物中总黄酮在温度较低时溶解度较
小 ,在操作中需趁热过滤以减少有效成分损失 。
实验证明 ,在用碱水 、碱醇 、石油醚 、乙醇四种提
取方法中 ,用醇提取龙须藤中的黄酮类化合物提取
率较高 。确定以 10倍量原料重的 60%(体积分数)
乙醇溶液 ,回流提取 3次 ,每次 3 h为提取最佳条
件 。此提取条件适合批量生产该药材的提取。每次
试验中其他因素如药材粉碎度 ,润湿程度 ,计时方法
及其他操作均须统一 ,以减少操作误差 。
参考文献:
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工艺 [ J] .安徽医科大学学报 , 2006 , 41(4):410-413.
(收稿日期:2006-09-13;修回日期:2006-10-30)
601
第 6期　张峻颖 ,等.苦碟子药材 HPLC指纹图谱研究