全 文 ：第 26卷 第 1期
2010年 2月 　　
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报(自然科学版)
JournalofHarbinUniversityofCommerce(NaturalSciencesEdition)　　
Vol.26No.1
Feb.2010
收稿日期:2009-12-19.
作者简介:杨连荣(1979-),女 ,硕士 ,讲师 ,研究方向:药物分析专业.
通讯作者:李彦冰(1955-),男 ,教授 ,硕士生导师 ,研究方向:中药新药开发.
长柱金丝桃抗抑郁作用有效部位的实验研究
杨连荣 1 , 张哲锋 2 , 齐乐辉 1 , 杨军涛 1 , 王金杰 1 , 李彦冰 1
(1.黑龙江中医药大学 , 哈尔滨 150040;2.黑龙江省兽药饲料监察所 , 哈尔滨 150069)
摘　要:在长柱金丝桃抗抑郁药效学研究的基础上 , 对长柱金丝桃抗抑郁有效部位进行了筛选研究.
选用小鼠强迫游泳模型对长柱金丝桃抗抑郁有效部位进行了筛选研究.实验结果表明 30%乙醇洗脱
部分能明显缩短小鼠强迫游泳绝望时间 ,并在此基础上判断 30%乙醇洗脱部分为长柱金丝桃抗抑郁
有效部位.首次研究了长柱金丝桃抗抑郁有效部位 , 为合理开发和利用资源提供依据.
关键词:长柱金丝桃;抗抑郁;有效部位;30%乙醇洗脱;强迫游泳
中图分类号:R285　　　　　文献标识码:A　　　　　 文章编号:1672-0946(2010)01-0004-02
Experimentalstudyofanti-depressioneffectofHypericumascyronL.
YANGLian-rong1 , ZHANGZhe-feng2 , QILe-hui1 , YANGJun-tao1 ,
WANGJin-jie1 , LIYan-bing1
(1.HeilongjiangUniversityofTraditionalChineseMedicine, Harbin150040, China;
2.HeilongjiangControlInstituteofVeterinaryBio-productsandPharmaceuticals, Harbin150069, China)
Abstract:BasedonantidepressantpharmacodynamicsstudyofHypericumascyronL., the
screeningstudyofanti-depressantvalidtargetistaken.Thispaperusestheforcedswimming
testmakestudyofanti-depresantvalidtarget.Theresultindicatesthat30% ethanolelution
showwhichcouldobviouslycurtailthetimeofforcedswimmingtestinmice, andonbasisof
theresult, theantidepresantvalidtarget.Theanti-depressantvalidtargetofHypericumas-
cyronL.arefirststudied.ItprovidesscientificbasesfortheHypericumascyronL.exploita-
tion.
Keywords:HypericumascyronL.;anti-depressionefect;validtarget;30% ethanolelu-
tion;forcedswimming
　　长柱金丝桃又名红旱莲 、湖南连翘 ,系藤黄科
金丝桃属植物黄海棠(HypericumascyronL.)的全
草 [ 1] ,具有凉血止血 、平肝消肿 、散结排脓 、清热解
毒等功效.该植物可用于抗抑郁症 、抗病毒 、抗癌
等 [ 2-3] .生于荒坡 、山野 、路边 ,我国东北地区及黄
河 、长江 、珠江流域均有分布.近年研究表明 ,该属
植物具有抗抑郁等药理活性 [ 4-8] .本研究在长柱金
丝桃抗抑郁药效学研究的基础上[ 9] , 选用小鼠强
迫游泳模型对其抗抑郁有效部位进行了筛选研究 ,
以便为该植物的进一步开发提供理论依据.
1　实验材料
1.1　动物
昆明种雌性小鼠 , (20±2)g,由黑龙江中医药
大学实验动物中心提供 ,饲养在 25℃条件下 ,自由
进食饮水 ,实验前稳定 3d.
1.2　药物
阳性对照药:百忧解(盐酸氟西汀),美国礼来
公司生产 , 礼来苏州制药有限公司分装 , 批号
A202606,实验前用蒸馏水配成 1 mg/mL(以氟西
汀计)的溶液;长柱金丝桃(产地为黑龙江省尚志
市 ,经黑龙江中医药大学药学院于加宾教授鉴定为
HypericumascyronL.);0.9%生理盐水.
2　实验方法
2.1　样品的制备
长柱金丝桃全草 ,用 80%乙醇回流提取 ,回收
乙醇 ,减压干燥 ,干浸膏经热水处理得 A(溶于热
水)部分 , B(沉淀)部分 ,称取 A、B部分适量 ,分别
用蒸馏水溶解 ,配制成每毫升相当于 0.5 g生药量
的溶液 ,备用.经预实验后 ,称取 A部分适量 ,上聚
酰胺层析柱 ,分别以水 、生药量质量分数 30%乙
醇 、生药量质量分数 95%乙醇和生药量质量分数
3.5%氨水洗脱 ,得到各洗脱部分 ,备用.
2.2　小鼠强迫游泳实验
100只小鼠随机分组 ,每组 10只.空白对照组
和百忧解组实验前 24、5 h均灌胃给予生理盐水
20 mL/kg,实验前 1h空白对照组继续给予生理盐
水 ,百忧解组灌胃给予配好的盐酸氟西汀溶液
20mL/kg,其余组实验前 24、5、1h均分别灌胃给予
配好的药液 ,按 20 mL/kg给药.
小鼠绝望时间的测定:将小鼠放入高 20 cm,
直径 14 cm的圆柱型玻璃杯中 ,每缸 1只 ,用纸板
隔离各玻璃杯 , 杯中水深 l0 cm, 水温控制在
(25±1)℃,每做 完一只后即换水.小鼠游泳时间
为 6 min,累计后 4min内小鼠不动时间.整个过程
用数码摄像记录 ,结果评判由非实验人员完成 ,以
保证结果客观.所谓不动是指小鼠在水中停止挣
扎 ,或呈漂浮状态 ,仅有细小的肢体运动以保持头
部浮在水面.
2.3　统计学分析
数据以均数 ±标准差( x±S)表示 ,显著性检
验采用 SPSS16.0统计软件进行单向方差分析 ,以
P≤0.05为差异有显著性统计学意义.
3　数据及结果
3.1　样品 A、B部分对小鼠强迫游泳绝望行为的
影响
表 1结果表明 ,长柱金丝桃全草的质量分数为
80%乙醇提取物 ,经热水处理所得的 A部分能明
显缩短小鼠强迫游泳不动时间 ,与空白对照组比
较 ,提取物 A(按生药量计 10g/kg)有显著性差异 ,
提取物 B没有显著性差异 ,故对 A部分进行进一
步筛选.
表 1　A、B部分对小鼠绝望行为的影响( x±S, n=10)
组别 剂量/(g· kg-1)
游泳不动时间
/s
空白组 - 125.30±26.66
百忧解组(以氟西汀计) 0.02 73.90±22.25＊＊
提取物 A组(含生药量) 10 99.30±27.02＊
提取物 B组(含生药量) 10 115.60±23.22
　　注:与空白对照组比较＊P﹤ 0.05, ＊ ＊P﹤ 0.01
3.2　各洗脱部分对小鼠强迫游泳绝望行为的影响
表 2结果表明 ,提取物 A的 30%乙醇洗脱部
分能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间 ,与空白对照
组比较 , 30%乙醇洗脱部分(按生药量计 10 g/kg)
有显著性差异 ,其余部分没有显著性差异 ,表明此
部分在行为绝望动物模型上有抗抑郁作用 ,是其抗
抑郁有效部位.
表 2　各部分对小鼠绝望行为的影响( x±S, n=10)
组别 剂量/(g·kg-1)
游泳不动时间
/s
空白组 - 123.10±32.64
百忧解组(以氟西汀计) 0.02 63.50±31.70＊＊
水洗脱组(含生药量) 10 112.80±22.61
30%乙醇洗脱组(生药量质量分数) 10 88.70±16.10＊＊
95%乙醇洗脱组(生药量质量分数) 10 115.70±29.56
3.5%氨水洗脱组(生药量质量分数) 10 113.50±24.09
　　注:与空白对照组比较＊P﹤ 0.05, ＊ ＊P﹤ 0.01
4　结　语
抑郁动物模型对抗抑郁药的研究至关重要 ,强
迫游泳实验是利用动物行为绝望而设计的一种经
典的抗抑郁评价模型 ,它提供了一个无法回避的压
迫环境 ,作为一种应激源可诱导小鼠的绝望行为 ,
不同作用机制的抗抑郁药物可选择性缩短小鼠强
迫游泳不动时间 ,提高对应激的耐受性.由于该望
模型操作简单快捷 ,被广泛用于抗抑郁药物的筛选
和评价[ 10] .
实验研究发现 ,生药量质量分数 30%乙醇洗
脱部分能明显缩短小鼠强迫游泳绝望时间 ,并在此
基础上判断其为抗抑郁有效部位 ,对于具体的活性
成分及其机制有待进一步研究.
参考文献:
[ 1] 　朱有昌.东北药用植物 [ M] .哈尔滨:黑龙江科技出版社 ,
1989:743.
[ 2] 　谢宗万.全国中草药汇编 [ M] .北京:人民卫生出版社 ,
2000:396
[ 3] 　江苏新医学院.中药大辞典(上册)[ M] .上海:上海科学技术
出版社.1997, 1002-1003. (下转 25页)
·5·第 1期　　　　　　　　　　　杨连荣 ,等:长柱金丝桃抗抑郁作用有效部位的实验研究
化学破乳剂排油量为 52.805 mg/L.枯草芽孢杆菌
培养液在未经提纯 、浓缩的情况下 ,破乳效果优于
化学破乳剂 ,具有广阔的应用前景.
3　结　论
1)经正交试验得出 ,培养温度对枯草芽孢杆
菌的发酵产量影响最大.发酵条件为:培养温度 25
℃、摇床转数 140r/min、培养基 pH值为 7.0、接菌
量 6%时 ,最有利于细菌在培养基中的生长 ,培养
24 h培养液中菌体数量最多.
2)摇床转数对枯草芽孢杆菌培养液破乳效能
影响最大.培养温度 25 ℃、摇床转数 140 r/min、培
养基 pH值为 7.0、接菌量 6%,此条件下培养液破
乳活性最高 ,培养时间 20h达到破乳效率最高值.
3)强酸的加入不会对培养液破乳活性造成较
大影响.pH值从 3增加到 9, 48h测定排油率均在
50%以上.培养液 pH值超过 10 ,培养液破乳效果
明显降低 ,排油率仅为 10%.
4)枯草芽孢杆菌培养液具有良好热稳定性.
经 45 ～ 90℃热处理 ,破乳活性稍有降低.48 h室温
下测定排油率在 60%左右.加热至 100 ℃,培养液
破乳活性反而升高.120℃高温灭菌处理后培养液
排油率为 72%.
5)对大庆含油废水进行破乳研究 ,随着培养
液加入量的增多 ,排油效率提高.加入 5mL的枯草
芽孢杆菌全培养液排油量为 62.056 mg/L,优于化
学破乳剂的排油效果 ,更利于油水分离.
参考文献:
[ 1] 　FUKUMIN, NOBUHIROT, TOMOHIKOT.Microorganisms,
demulsifiersandprocesesforbreakinganemulsion[ P] .US
Patent, 1999No662944.
[ 2] 　吴利春 , 刘松涛 , 刘雪娟.原油破乳剂的发展现状 [ J] .日用
化学品科学 , 2008, 31(11):8-10.
[ 3] 　WILLIAMLC, DAVIDGC, JAMESE, etal.Characterization
ofnocadiaamaraeasapotentbiologicalcoalescingagentofwater
-oilemulsions[ J] .Appliedandenvironmentalmicrobiology,
1982, 43(2):362-366.
[ 4] 　马　挺 ,梁凤来 ,奚艳伟, 等.红球菌 PR-1菌株破乳性能研
究 [ J].环境科学 , 2006, 27(6):1191-1196.
[ 5] 　HUANFGXF, LIUJ, LULJ, etal.Evaluationofscreening
methodsfordemulsifyingbacteriaandcharacterizationoflipopep-
tidebio-demulsifierproducedbyAlcaligenessp[ J] .Biore-
sourcetechnology, 2009, 100(3):1358-1365.
[ 6] 　侯　宁 ,马　放 , 李大鹏 , 等.高效破乳菌的破乳效能及活性
成分 [ J].石油学报 , 2009, 25(3):435-441.
[ 7] 　赵淑梅 , 郑西来, 高增文 , 等.生物表面活性剂及其在油污
染生物修复技术中的应用 [ J] .海洋科学进展 , 2005 , 23
(2):2342-2381.
[ 8] 　陈蓉明 ,林跃鑫 ,黄谚谚.枯草芽孢杆菌 ATCC2233产生表面
活性素的研究 [ J].福建轻纺 , 2000, 6(12):1-4.
[ 9] 　JANIYANIKL, PUROHITHJ, SHANKERR, etal.De-e-
mulsificationofoil-in-wateremulsionsbyBacilussubtilis.
Worldjournalofmicrobiologyandbiotechnology, 1994, 10:452
-456.
[ 10] 　曾　里.生物破乳剂的分离 、筛选及破乳特性研究 [ D] .成
都:四川大学 , 2003.
[ 11] 　马　放 , 任南琪 , 杨基先.污染控制微生物学 [ M] .哈尔
滨:哈尔滨工业大学出版社 , 2002, 126-127.
[ 12] 　PEYPOUXF, BONMATINJM, WALLACHJ.Recenttrendsin
thebiochemistryofsurfactin[ J] .Appliedmicrobiologyandbi-
otechnology, 1999, 51(5):553-563.
[ 13] 　ARIMAK, KAKINUMAA, TAMURAG.Surfactin, acrystal-
linepep-tidelipidsurfactantproducedbyBacilussubtilis:i-
solation, characterizationanditsinhibitionoffibrinclotforma-
tion[ J] .Bio-chemistrybiophysicsresearchcommunication.
1968, 31(3):488-494.
(上接 5页)
[ 4] 　徐　立 , 魏翠娥 ,赵明波 , 等.贯叶金丝桃总黄酮对小鼠抑郁
症模型的实验研 [ J] .中国中药杂志 , 2005, 30(15):1184-
1188.
[ 5] 　王卫星 ,胡新颖 ,刘　鹏 ,等.金丝桃苷等 10个天然黄酮类化
合物的抗抑郁活性筛选研究 [ J] .中草药 , 2007, 38(6):900-
902.
[ 6] 　BUTTERWERKV, JURGENLIEMKG, NAHRSTEDTA, etal.
FlavonoidsfromHypericumperforatumshowantidepressantactiv-
ityintheforcedswimmingtest[ J].PlantaMed, 2000, 66:3-6.
[ 7] 　潘阳红 ,郭宝林.国产金丝桃属植物有效成分研究概况 [ J] .
中药材 , 1993, 16(8):40-42.
[ 8] 　郁建平 ,刘兴宽.贵州金丝桃挥发油成分及抗菌活性研究
[ J] .中国药学杂志 , 2002, 37(12):900-902.
[ 9] 　李彦冰 ,杨　萍 ,范　锋 ,等.长柱金丝桃提取物抗抑郁作用
的研究 [ J].中国中医药科技 , 2007, 14(增刊):6-7.
[ 10] 　郑丽芳 ,明　亮.抑郁症动物模型的研究与应用 [ J].安徽医
药 , 2005, 9(11):801-804.
·25·第 1期　　　　　　　　　　　徐　暘 ,等:O/W型乳化液破乳菌发酵条件优化及破乳研究