全 文 ：[论　　著]
山苦茶提取物对动脉粥样硬化大鼠血管内皮功能的影响
刘月丽1 ,伍海涛1 ,王立群2 ,林连波1
摘要:目的　探讨山苦茶提取物(Mallotus furetianus)对动脉粥样硬化(Atherosclerosis , AS)大鼠血管内皮功能的影
响。 　方法　梯度浓度稀释山苦茶 B 、D ,与 DDPH 反应 , 测自由基清除率及其 EC50。一次性给大鼠腹腔注射 VD3 70 万
U/ kg , 高脂饮食 ,建立 AS 模型 , 并预防性给予山苦茶 B 、D处理。 9周后处死大鼠 , 取血清测定 SOD、NOS 、MDA。迅速取
出胸主动脉 , 制成宽 3mm 的主动脉环 , 保留内膜 ,并测定其内皮依赖性舒张能力。 　结果　山苦茶可以清除自由基
(山苦茶 D >维生素 C >山苦茶 B),并可明显降低 AS 大鼠血清 MDA水平 , 提高NOS 、SOD活性 ,增强内皮依赖性血管
舒张能力。 　结论　山苦茶 B 、D增加 AS 大鼠内皮依赖性血管舒张能力 ,可能与增强 NOS 活性 、清除自由基 、提高机
体抗氧化能力有关。
关键词:山苦茶;动脉粥样硬化;抗氧化;自由基
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1009-9727(2008)3-384-02
Effects of extracts of Mallotus furetianus on endothelial function of artery in atherosclerotic rats.LIU Yue-li , WU Hai
-tao , WANG Li-qun , et al.(Department of Pharmacy , Hainan Medical College , Haikou 571101 , Hainan , P.R.China)
Abstract:Objective　To investigate the effects and mechanism of extract of Mallotus furetianus on endothelial function of artery
in atherosclerotic rats.　Methods　The ability in clearance of 1 , 1-diphenyl-2-picrylhydrazy l free radical(DDPH).VD3 by
Mallotus furetianus was observed and high-fat diet were given to rats to make atherosclerotic model , different parts of Mallotus
furetianus were administered to prevent the development of atherosclerosis.After 9 weeks , rats were killed and the blood sample was
collected to determine the level of MDA and the activities of SOD, NOS.Vascular circles were made to measure endothelium
dependent vascular relaxation.　Results　The extract of Mallotus furetianus was capable of removing DDPH free radical , and
reducing MDA , enhancing the activities of SOD , NOS , improving the ability of endothelium dependent vascular relaxation.　
Conclusion　The extract of Mallotus furetianus can improve the ability of endothelium dependent vascular relaxation in
atherosclerosis rats , this effect is possibly associated with the ability of clearance of free radical , increasing activity of NOS , and the
enhanced antioxygen capability.
Key words:Mallotus furetianus;Atherosclerosis;Antioxidation;Free radical
　　山苦茶(Mallotus furetianus)是大戟科野桐属植物 ,产于海南
各地 ,具有清热解毒 、利胆消食等功效[ 1] 。山苦茶可以促进胆
汁的合成和排泄 ,有助于胆石的排除 , 对胆道疾病的患者取得
较好的临床效果[ 2] ,动物实验证明 , 山苦茶组分 B、D具有显著
的利胆作用[ 3] 。动脉粥样硬化(Atherosclerosis , AS)是以高脂血
症 、脂质代谢紊乱 ,引起脂质过氧化 , 损伤动脉内皮细胞 , 形成
粥样斑块为特征的疾病。本文研究山苦茶组分 B、D对动脉粥
样硬化大鼠血管内皮功能的影响及可能的机制。
1　材料与方法
1.1　动物　健康雄性Wistar 大鼠 90 只 ,体重 200 ～ 300g , 由长
春高新医学动物实验研究中心提供 , 合格证号:SCXK-(吉)
2003-0004。
1.2　药品与试剂　山苦茶叶中两种不同的提取部位 B 和 D ,
由海南医学院化学教研室提供。二苯代苦味肼基自由基
(DPPH)(Fluka公司);无水乙醇(分析纯 ,广州试剂厂);羧甲基
纤维素钠(上海黄河制药厂);胆固醇(北京化学试剂公司);猪
胆盐(北京化学试剂公司);它巴唑(上海复星朝晖药业有限公
司);维生素 D3(上海通用药业股份有限公司);维生素 E(上海
金伴药业有限公司);苯肾上腺素(PHE)(上海禾丰制药有限公
司);乙酰胆碱(ACh)(上海试剂三厂);过氧化物歧化酶(SOD)
测定试剂盒 、一氧化氮合酶(NOS)测定试剂盒 、丙二醛(MDA)
测定试剂盒由南京建成生物工程研究所第一分所提供。
1.3　仪器　721分光光度计(上海第三仪器分析仪器厂);LXJ
-Ⅱ型高速离心机(上海医用分析仪器厂);HANGPING FA1104
电子分析天平:上海天平仪器厂;电热恒温水浴锅:上海医疗器
械五厂;BL-420生物机能实验系统 、HW-400S 恒温平滑肌浴
槽:成都泰盟科技有限公司。
1.4　方法
1.4.1　山苦茶不同组分清除自由基测试[ 4 , 5] 　将 DPPH 以无
水乙醇为溶剂配制为 6×10-4mol/ L的储液 , 放置于 4℃冰箱 ,
临用前用同一溶剂将其稀释为 6×10-5mol/L 待用。将山苦茶
B 、D及维生素 C 以无水乙醇为溶剂分别配成 150、25 和 0.04g/
L , 然后将 B、D梯度稀释为 0.5 、0.4 、0.2 、0.1 、0.05 、0.025 、0.005
和 0.001g/ L , 将维生素 C 梯度稀释为 0.04 、0.02 、0.01 和
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基金项目:国家自然科学基金项目:30060088;海南医学院苗圃基金项目:200309
作者单位:1.海南医学院药学系 ,海南 海口　571101;　2.北华大学生理教研室 ,吉林吉林　132013.
作者简介:刘月丽(1980～ ),女 ,汉族,药理学硕士 ,药理学助教 ,主要从事心血管药理研究.
0.005g/L ,取上述各组分 0.5ml , 与 2.5ml DDPH 反应 , 反应总体
积3.0ml , 于 1cm 比色杯中 , 517nm 处测吸光度 , 每一吸光度平
行测 3 次 , 取平均值 , 计算自由基清除率及自由基清除率为
50%时各组分的浓度 ,即 EC50 。
清除率%=(1-Ai-Aj
A0
)×100%
表 1　DDPH 加样表
A0 2.5ml 6×10-5mol/ L DPPH 溶液 +0.5ml 试样的溶剂 ,为空白对照
Ai 2.5ml 6×10-5mol/ L DPPH 溶液 +0.5ml试样
A j 2.5ml DPPH 溶液的溶剂 +0.5ml试样
1.4.2　山苦茶不同组分对动脉粥样硬化大鼠抗氧化能力及血
管内皮功能的影响　将大鼠随机分为正常对照组 、模型组 、维
生素 E(0.20g/ kg)、山苦茶 B 高剂量组 0.081g/ kg、山苦茶 B 低
剂量组 0.026g/kg 和山苦茶 D 0.057g/kg。各药物均以 0.5%羧
甲基纤维素钠为溶剂配制。除正常对照组外 ,其余各组给予高
脂饲料饲养 , 同时灌胃给予相应的药物 , 给药容积为 10ml/ kg
体重;正常对照组和模型组给予相应体积的 0.5%羧甲基纤维
素钠。取Wistar 大鼠90 只 ,适应性喂养1 周后 ,随机抽取15 只
作为正常对照组 ,普通饲料(长春高新医学动物实验研究中心
提供)喂养 , 饮自来水;其余各组大鼠一次性腹腔注射 VD370万
U/kg , 高脂饲料(2%胆固醇+0.5%猪胆盐+0.2%它巴唑+
5%白糖+10%猪油+82.3%普通饲料)饲养 9 周(在杨彭远
等[ 6]基础上有所改变), 饮用自来水。
1.4.3　抗氧化能力测定　给药 9 周末 , 各组大鼠以戊巴比妥
钠腹腔注射麻醉后 , 经颈总动脉插管取血。 1 000rpm 离心
15min , 取上清。黄嘌呤氧化法测定 SOD活性;硫酸巴比妥比色
法测定MDA;化学比色法测 NOS;具体操作按南京建成试剂盒
要求进行。
1.4.4　内皮依赖性血管舒张实验[ 7] 　大鼠采血后 , 迅速取出
胸主动脉 , 制成宽 3mm 的胸主动脉环 , 保留血管内膜 , 置于通
0.95 O2+0.05 CO2 混合气体 、pH7.4 的正常Krebs 液的浴槽中 。
此液配制为(mmol/L):NaCl 115.0;KCl 4.6;MgSO4 1.16;NaH2PO4
1.16;NaHCO3 21.9;CaCl2 2.5;葡萄糖 11.0。标本负荷 2.0g , 平
衡2h , 每 20min 换营养液 1 次。 在采集资料前 , 主动脉环用
60mmol/ L KCl 液每隔 20min 收缩一次 ,直至标本收缩反应可重
现。用 1μmol/ L PHE收缩标本 , 待收缩达坪值后 , 按累积浓度
法加入 ACh ,记录 ACh 每一累积浓度时血管舒张效应 , 以 PHE
引起收缩的松弛率表示 ACh 的血管舒张效应。
1.4.5　统计学处理　结果以 x ±s表示 , 采用SPSS10.0 统计软
件包进行单因素方差分析 , 计量资料采用组间 t 检验(方差不
齐时用 t 检验)。
2　结果
2.1　山苦茶各组分对 DPPH 自由基清除能力的比较　山苦茶
各组分对 DPPH 自由基清除 EC50的比较:山苦茶 B >维生素 C
>山苦茶 D。具体见表 2。
表 2　山苦茶 B、D清除 DDPH 能力与维生素 C 比较的 t值
组别 EC50(ug/mol)
95%confidece
interval(min) 95%confideceinterval(max) t
维生素 C 15.4 12.3 19.4
山苦茶 B 23.5 17.1 32.2 2.094
山苦茶 D 5.80 2.50 13.6 1.944
2.2　山苦茶各组分对动脉粥样硬化大鼠抗氧化能力的影响　
模型组大鼠SOD、NOS 较正常组明显降低(P <0.01);MDA 较
正常组明显增加(P <0.05);山苦茶 B、山苦茶 D、维生素 E 均
能明显增加动脉粥样硬化大鼠的 SOD、NOS 活性 , 降低 MDA 。
其中 , 山苦茶 D对 SOD、MDA 影响最为显著 , 山苦茶 B 低剂量
对NOS 的影响最为显著 , 具体见表 3。
表 3　山苦茶各组分对动脉粥样硬化大鼠抗氧化
能力的影响(x ±s , n=15)
组别 剂量(g/kg) SOD(U/ml) MDA(nmol/ml) NOS(U/ ml)
正常 - 171.34±16.34﹡﹡ 10.47±1.25﹡ 35.80±5.23﹡﹡
模型 - 133.46±13.41■■ 13.24±2.11■ 22.40±5.77■■
维生素 E 0.20 150.06±16.23﹡ 10.25±2.09﹡ 31.01±3.70﹡﹡
山苦茶 B 0.081 152.30±12.27﹡ 10.78±2.80﹡ 29.10±4.58﹡
0.026 153.73±4.16﹡﹡ 10.80±1.69﹡ 35.74±9.87﹡﹡
山苦茶D 0.057 170.51±16.13﹡﹡ 10.07±2.20﹡﹡ 28.49±2.69﹡
注:与模型组比较 , ﹡P <0.05 , ﹡﹡P <0.01;与正常组比较 , ■P
<0.05 , ■■P <0.01。
2.3　山苦茶各组分对动脉粥样硬化大鼠内皮依赖性血管舒张
实验的影响　模型组大鼠对 ACh 引起的内皮依赖性血管松弛
作用明显降低 ,山苦茶 B 、山苦茶 D、维生素 E 均能改善动脉粥
样大鼠ACh 引起的内皮依赖性血管松弛作用 , 其中 , 以山苦茶
D的作用最为显著 ,具体见表 4。
表4　山苦茶各组分对 Ach 引起的内皮依赖性松弛作用(%)(x ±s , n=8)
组别 剂量(g/ kg) ACh-9 ACh-8 ACh-7 ACh-6 ACh-5 ACh-4
正常 - 26.96±9.05﹡﹡ 33.40±12.39﹡ 36.32±11.92﹡﹡ 41.54±11.54﹡﹡ 48.80±8.75﹡﹡ 55.76±8.67﹡﹡
模型 - 5.13±2.55■■ 7.10±5.12■ 11.63±5.87■■ 14.80±5.66■■ 20.58±4.17■■ 22.68±3.73■■
维生素 E 0.20 13.60±5.32 16.94±4.73 23.90±5.73﹡ 30.80±9.29﹡ 36.72±12.15﹡ 39.06±12.04﹡
山苦茶 B 0.081 14.27±1.65 34.07±5.12﹡ 41.93±1.32﹡﹡ 47.10±1.33﹡﹡ 50.50±0.70﹡﹡ 54.37±0.59﹡﹡
0.026 14.35±3.28 24.15±7.07 28.45±10.32﹡﹡ 33.70±14.58﹡﹡ 37.15±12.90﹡ 42.08±11.22﹡﹡
山苦茶 D 0.057 19.88±8.00﹡﹡ 30.10±3.96﹡﹡ 38.03±5.10﹡﹡ 42.77±5.20﹡﹡ 45.75±7.37﹡﹡ 48.49±8.30﹡﹡
3　讨论
以动脉粥样硬化(AS)为病理基础的心脑血管疾病是当今
发病率和病死率最高的疾病 , Ross[ 8] 于 1999 年在其“损伤反应
学说”基础上提出 , AS 是一种炎症反应性疾病 , (下转第 389页)
385中国热带医学 2008年第 8卷第 3期　CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.8 No.3March 2008　　　　　　　　　　　　　　　
床子体外杀阴道毛滴虫的最低有效浓度。
表 1　蛇床子素体外抗阴道毛滴虫效果
蛇床子素浓度(mg/ml)
加药后不同时间阴道毛滴虫死亡率(x ±s)%
30min 1h 4h 8h 24h
0.56 8.15±0.35﹡ 12.61±0.08﹡ 18.16±0.78﹡ 23.44±0.69﹡ 34.28±1.02﹡
1.12 19.98±0.76﹡ 37.14±1.08﹡ 56.18±1.79﹡ 77.32±5.12﹡ 100.00±0.00﹡
2.24 32.16±2.14﹡ 51.47±2.88﹡ 72.07±3.01﹡ 91.02±4.07﹡ 100.00±0.00﹡
4.48 52.32±1.89﹡ 77.34±2.24﹡ 100.00±0.00﹡ 100.00±0.00﹡ 100.00±0.00﹡
空白对照 0.82±0.78 1.09±1.13 1.79±0.35 2.22±0.29 2.93±0.42
注:与相应的空白对照组比较 , ＊P <0.01。
3　讨论
体外试验表明 , 蛇床子素对阴道毛滴虫有较好的灭杀作
用 , 1.12mg/ml 对阴道毛滴虫即有作用。 0.56mg ～ 4.48mg/ml
浓度的药物对阴道毛滴虫均有抑制 、杀灭和裂解的作用。随着
药物浓度的提高 ,阴道毛滴虫的死亡率升高 , 死亡时间逐渐缩
短。证实了蛇床子素在试管内确有杀阴道毛滴虫的作用 。
1.12mg/ml是试管内杀灭阴道毛滴虫的最低有效浓度。实验
结果将为研制新的外用兼口服的高效低毒抗滴虫药物探索有
效的途径。
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收稿日期:2007-11-23
(上接第 385页)
其病理表现为变质 、渗出 、增生。高血压 、高血糖 、高脂血症 、脂
质过氧化都是AS 炎症的诱发因素。 近年来 , 氧化低密度脂蛋
白(OX-LDL)与动脉粥样硬化的关系越来越受到人们的关注 。
高脂血症引起脂质代谢紊乱 , LDL 增多 , LDL的氧化产物 OX-
LDL增多。 OX-LDL损伤动脉内皮细胞 , 使内皮细胞对 LDL的
通透性增加 ,胞浆发生空泡变性 , 浆膜皱缩 ,甚至可使细胞最终
坏死。自由基清除实验表明 , 山苦茶组分 B、D均有清除自由
基的作用 ,其清除自由基能力:山苦茶 D>维生素 C>山苦茶
B。山苦茶组分 B、D能明显降低动脉粥样硬化大鼠的脂质过
氧化产物 , 提高抗氧化能力 , 山苦茶 B 在低剂量即能发挥抗氧
化作用 , 其抗氧化能力并不随剂量的增加而提高。山苦茶 D
抗氧化能力强于山苦茶 B , 这与自由基清除实验结果一致。山
苦茶 B、D均能增加 NOS 活性 , 增加 NO 的生成 ,改善动脉粥样
硬化大鼠的血管内皮功能。 山苦茶组分 B 、D通过清除自由
基 ,降低脂质过氧化产物 ,提高动脉粥样硬化大鼠的抗氧化能
力 ,降低动脉内皮细胞的脂质过氧化损伤 , 减轻 AS 的炎症反
应 ,改善血管的舒张能力。同时 , 山苦茶 B、D通过增加动脉粥
样硬化大鼠的NOS 活性 , 增加血管内皮细胞 NO 的生成 , 改善
ACh 引起的内皮依赖性血管舒张作用。
总之 ,山苦茶提取物 B 、D 均能够改善动脉粥样硬化大鼠
的内皮依赖型血管舒张 ,这可能与其增强 NOS 的活性 、清除自
由基 、提高动脉粥样硬化大鼠的抗氧化能力有关。
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收稿日期:2007-12-25
389中国热带医学 2008年第 8卷第 3期　CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.8 No.3March 2008