全 文 ：中国病理生理杂志 Ch ines e J o ur a nl o全 Pa t h OPhy s l o l o g y 1 9 8 5, 4 ( 5 ) 2 9 3
漏芦蜕皮留酮和维生素E对培养
主动脉平滑肌细胞的作用
北京中医学院 郭肇铮王秀萍 卢
i永才贾绪东 翁玉棒周玉琳
刘小青
摘要 漏芦蜕皮 街酮 ( R U E ) 是从祁州漏芦根中提取的一种植源性蜕皮激素。 本文以 2 %高 脂血
清培养家兔主动脉平滑肌细胞 , 形成细胞损伤 , 采用 T B A 萤光法 , 放射自显影和 电 镜 , 观 察 R U E
与维生素 E 对受损细胞的影响 。 结果发现二种药物作用相似 , 均使细胞增生 , 细胞内过氧 声化脂含量 降
低 , 胞浆脂滴缩小 、 减少 , 未发现细胞死亡。 由此认为 R U E 可能因具有抗 脂 质 过氧化作用 , 保 护
了平滑肌细胞结构完整 , 从而显示出抗动脉粥样硬化的作用 。
主超词 蜕皮由酮 , 细胞 , 过载化脂类 , 动脉粥样硬化
中药漏芦为菊科多年生草本植物 。 本室动
物实验证明 , 漏芦水煎剂能降低高脂饲料诱发
的家兔高血脂水平 , 减轻动脉粥 样硬 化 ( A s)
病变 , 降低血浆和主动脉粥样斑块中过氧化脂
( L p。 ) 水平及心脑肾组织中脂褐素含量 的作
用` ” 。 为研究漏芦的有效成分和作用机理 , 本
实验利用培养的家兔主动脉平滑肌细胞 , 对从
漏芦根中提取的漏芦蜕皮菌酮进行实验 , `以维
生素 E 作药物对照 , 观察其对细胞的影响 , 企
图验证漏芦蜕皮留酮的作用并对其机理作初步
探讨 。
材 料 和 方 法
漏芦蜕皮街酮 ( R U E )— 本院中药教研室从祁州漏芦根中提 出 的 白 色结 晶 , 占干 重
1
·
1%
, 分子量 4 8 0 , 分 子式 c : , H一 , , 熔点
2 4 2一2 4 4℃ 。
维生素 E ( V E )— 北 京 第 二 制 药 厂 ,
8 2 1 0 2 0 6
。
高脂血清 ( H L s) — 采用本室 A s 实验家兔 , 含 卜脂蛋白3 4 8 0m g d/ 1 , 实验用 2%浓度 。
3 H一胸 腺 咬 吮 核昔护H e T d R )— 4 01 所产 , 放射比活性 2 cl /m M , 放化纯度 90 % 。
主动脉平滑肌细胞 ( s M c) 的培养一取家兔
主动脉中膜 , 剪成 l m m : 小块作贴壁式培养 ,
按常规方法传代 , 经鉴定为 s M C , 本实 验用
第 1 6一 18 代细胞 。 每份样品含细胞 4~ 6 x 1 o气
1
. 名
-H
T d R 摄取的实验一 s M C 在 含 R U习
与vE 的培养液中生长 2天 , 按常规作 吕H - T d R掺入及放射自显影 。
2
. 细胞生长数量及 L oP 含量的测定一 S M C
在含 R U E 与 v E 培养液中生 长 5 天 , 酶 分
散细胞并计数。 按改良的 T B A 萤光法测细胞
L p o 含量 “ , 。
3
. 超微结构观察一在含 2% H L s 培养液中
分别 加 R U E 5 0件g /m l , v E 2 0林g /m l , 培 养 5
天 ,酶分散收集细胞 ,按 电镜常规包埋 、 切片 、
观察 。
结 果
i
.
R U E 对 SM C 的影响 :
表 1 R U E 对 SM C 摄即 H一 T d R的形晌
组别 n R U E 标u g /m l 又
互%
S D
P 值
C S a 1 1 。 7 士 0 。 95
5 0 1 5
。
2 士 1 。 6 0 < 0 。 05
H工 S “ 1 4。 2 士 1 。 7 0
5 0 1 8
。
8 士 2 。 4 0 < 0 。 05
注: ▲C S 组以 1 0% C S 培养 SM C . ` H儿S 组以
2% H L S + 8% C S 培养 SM C , 以下同
由表 1 可见 , 无论是正常 血清 ( C匀组 或
H L S 组 , 培养液中加 R U E 5 o协g / m l 后 , S M C
的标记率均升高 , 与未加 R U E 的相应对照组
比差别显著 ( P < 。 . 05 ) 。
有利于 台M C 的生长代谢。
2
.
V E 对 S M C 的影 l!向:
由表 3可见 , H L S 组标记率明显高于 C s
组 , 差别显著 。 C S 及 H L S 组中加 V E 后 ,
表 3 V E 对 SM C 摄取 .仆T d R 的影响
…二25
5 价必
口 c5
碱 “ sL
组别 。 ;器;
C S 5 0
标记率%
又 士 S D P 值
1 0
。
4 0餐 士 0 。 9 3
< 0
。
0 1
么甲.尸
I
Leses.卜l
n日八州曰口l
5O0
5 8 0 1 4
.
5 8 士 2 。 4 0
H L S S 刘 。 3 5朴 士 1。 2 0
< 0
。
0 1
8 0 2 1
。
7 5 士 2 。 7 5
60续、彩次翻拐
注: 赞二组相比 , P < 0 . 肠
.
P < 0
.
05 n 二 6
图 1 R U E 对 SM C 生长数量的影响
标记率比相应对照组明显 升 高 ( P < 0 . 0 1 ) 。 证
明 v E 促 s M C 合成 D N A 。
茶、狡级姻思翻
由图 1 可见 , C S 组加 R U E 后 , 细胞 平
均数明显增加 。 H L S 组加不 同剂量 R U E , 各
组细胞数均高于 H L s 组 , 显示出随浓度升 高
标记率增加的趋势 。
R U E 对 S M C 内 L p o 含量的影响见表 2 :
衰 2 不同荆 t R U E 对 S M C 内 L P O
含盘的影晌
120
8O
巨二}C S
巨乏}H l , S
组别 n R U E LP o n M ol 厂百万细胞卜s / m l 又 士 S D 与
3
P
组比值
C S 1 6 0
2 6 50
H玉5 3 6 0
4 6 5
5 6 2 5
一攀 6 5 0
0
。
3 62 士 0 . 0 9 0
0
。
2 5 3 士 0 。 0 50
< 0
.
0 5
< 0
。
0 0 1 份 P < 0
.
05 n 二 6
0
。
5 3 3 土 0 。 1 4 2
0
。
3 90 士 0 。 1 4 4
0
。
3 6 0 土 0 。 0 5 8 < 0 。 0 2
0
。
3 09 士 0 。 0 8 2 < 0 。 0 1
图 2 V E 对 S M C 生长数量的影响
从表 2 可见 , C S培养液中加 R U E 50 协g /m l
培养 ,细胞内LP 。 含量比未加者明显下降 。 IL s
( 第 3 ) 组 兀训 均值明显 高于 C s 组 (P <
0
.
0 5沁 ” 儿吕 洽养液中加 R U E S 、 2 5 、 5 0林s /m l ,
s M C 的 功。 含量依次下降 , 25 与 5。阳组与
IL s 对照组比均有易著差别。 此作用与 UR E剂量平行 , 剂量趁大效果越明显 。 UR E 2 5一5 0杯`加 , 能使 咖 .绎低瓤钾墙养中的水平 ,
由图 2 可见 C s 液中加 V E 80 “ g /m l , 细
胞数明显增加 。 H L s 液中加 V E 后 , 细胞 在
H L S 比 C s 组增加的基础上又随 v E 浓度升
高而增加 。
V E 对 S M C 的 L p。 含量影响见表 4 :
V石 使各组的 L p。 含量下降 。 在 以 H L S
培养的 3一 7 组中 , 显示随 V E 浓度 升 高而
S M C 的 L p o 量顺次下降的趋势 , 各组与LH s
组比均有非常显著差别 。
3
.
R U E ( 5 0林g / m l )与 v E ( 5 0林s / m l )作用的
比较
裘 4V E对 S MC内 L p 。 含 t的形晌
组别 n ;毙1 L oP n M OI / 百万细胞又 士 S D 与 3组比P 值
CS 1 6 0 0
。
362 Q
。
0 90 < 0
。
0 6
2 6 8 0 0
。
0 3 0 4
。
0 1 0 < 0
。
0 01
H L S 36 0 0
。
3 3 0 5
。
1 4之
6 2 40
。
2 4盛 0 。 0 52 < 0 。 0 0 1
56 8 0
。
1 0 0 5
。
0 1 8 < 0
。
0 0 1
6 6 2 G 0
。
0 9续 O。 0 1 9 < 0 。 0 0 1
7 6 8 0 0
。
0 6 3 0
。
0 1 6 < 0
。
0 0 1
…. ’禹一二甚:;
3
{禹割厉写CS
) )…匕交 !厂 泣别 H ` ,
,
L { } {找,白 夕;介 * ; 二’
L {止._皿一{鱿 __血
盈薪胶阵\落口
口 C s
翻 ” L`
图 4 R UE 与 柑 对SM C 的 LP 。 形成影响的比较
丁澎图比
一
,禹曰创
个|昨lù|讨叮
n乙曰.1
谈膝职振
费 p <划 5
!
跳咙
/ /
/
图 3 R U E 与 v E对 S M C摄取月任~ dT R作用的比较
由图 3 可见 H L s 促 s M c 摄取 sH 一 T d R ,
R U E 与 v E 均对 s M C 有进一步促其摄 3-H
T dR 的作用 , 差别显著 。 但用药二组 间 差别
无统计学意义 。
由图 吐可见 H L s 组 LP 。 含量明显高于
C S 组 , 加 R U E 与 V E 后 , L p 。 含量明显下
降 ; 均有统计学意义 。
4
.
R U E 与 V E 对 s M C 超微结构的影响 ,
用含那石H L s 清养的 s M C 胞浆中有较多
脂滴 , 直径 0 . 见一 。 . 7林 , 胞膜下有多量吞 饮小
泡 。 加 R U E 5 o林g /m l 培养的 SM c 中脂滴 与
吞饮小泡明显减少 , 脂滴缩小 , 溶酶体数量增
多 , 核染色质丰 富 。 v E组 ( 含 V E 8 0林刁m l)
SM C 形态与 R U E 组相似 。
讨 论
蜕皮街酮是一类强有力的昆虫活性物质 ,
礁掉物与高等动物也有明显作用 。 有些植源挂蜕皮留酮能促进蛋白质与核酸合成 , 增强酶活
性 `吕 , 。 本实验证 明 ,用从漏芦根中提取的 R U E
培养 s M C , 有减轻 LH S 引起的细胞损 伤 的
作用 。 首先表现在胞浆内脂滴减少和溶酶体数
量增加 , 这是细胞加强降解代谢反应的表现 ,
说明进入 s M C 的脂质得到处理而 减少 了堆
积 。 R U E 又有使 s M C 内 L p 。 含量减少的作
用 。 目前得到普遍重视的自由基学说认为 , 细
胞膜上的脂质过氧化是造成膜结构损伤和功能
障碍 、 导致多种疾病的共同发病机理 (’) 。 关于
L p o 与 A S 的关系 , 2 0 5 2年 G l a v i n d` “ , 首先
发现大动脉 A s 病灶内有 L OP 存在 , 粥样硬
化程度与 L p。 含量呈平行关系 。 本室的动 物
实验获相似结果 `。 , 。 临床观察结果扒为 LP 。损
伤动脉壁 , 促进 A S 形成 ` 7 ’ 。 野村喜重郎认为
V E 在体内可增加高密度脂蛋胆固醇量 , 使血
中 L卯 含量下降 , 对抗低密度脂蛋白的促 A s
作用 。 G a vi 立。 用不饱和脂肪酸培养 s M C , 发
现细胞内 L oP 含量上升 , 细胞增生受 抑 制 ,
加用 V E 后 L p o 量下降` 8 , 。
H盯m a n 1 9 5 6年 ` . ,提出 “ 自由基学说” ,
认为体内自由基的产生使动物衰老 和 寿 命 缩
短 。 近年来实验医学和临床医学都积累了丰富
的资料支持衰老的自由基学说 “ ’ 7 , 。 他于 1 9 5 7
年又提出 V E 是一种重要的抗氧化 剂 , 动物
缺乏 v E 时自由基对多价不饱和脂肪酸 的作
用增强 , 投予 v E 能减弱此作用 。 V E 的抗氧
代妇队制 , 除由于其结构特征使本身极易被氧化
而保护周围物质不被氧化外 , 还在于它能保护
细胞内过氧化物酶 、 谷胧甘肤过氧化物酶及超
氧化物歧化酶的活性 。 这些酶可催化 H夕 2 生
成水 , 使一种重要的自由基一超氧基 减少 。 实
验亦证明 V E 能延长大小鼠寿命 , 使细胞株生
存期延长` l0) 。 本实验证明 v E 减少 S M C 内
LP
。 含量的作用非常显著 , 使细胞膜结构保持
完整 , 进入细胞的过多脂质得到清除 , 细胞代
谢旺盛 , 增生活跃 。 R U E 对 lH, s 损伤 s M C
的保护作用与 v E 相似 。
一般认为 , s M C 增生是 A s 斑块形成 的
关键因素 。 但在细胞培养实验中 , 能使细胞生
长旺盛的药是否会在体内促进 A S 病变的形成
与发展呢 ? 诚然 , A S 斑块中 s M C 增生伴随
有结缔组织增生 , 但更重要的是脂质沉积 , 而
后泡沫细胞发生崩解坏死 , 引起炎性反应 、 钙
化和大量结缔组织增生等一系列变 化 而 形成
A s 斑块 。 分析实验结果 , 我们认为在细胞培
养过程中 , 细胞增生是健康 、 代谢旺盛的正常
表现 , 而变性 、 坏死可能由于脂质过氧化作用
加强使 L p 。 含量增高所造成 。 R U E 与 vE 二
者不同程度地减少细胞内 L p 。 含量 , 减 轻脂
质堆积 , 因而有可能减轻 SM C 的损伤及变性
坏死 , 较好地保护了超微结构的完整 。 结合漏
芦的体内实验减轻 A S 病变的作用看 “ ’ , 漏芦
可能是一个很有希望的抗 A s 药物 , 其作用机
制之一可能是通过抑制脂质过氧化而起作用。
参 考 文 献
1
。 卢咏才 , 等 。 中药漏芦抗动脉粥样硬化的实
验研究 . 中华医学杂志 1 985 , 65 , 7 5 .0
2
. 翁玉椿 , 等 . 细胞和细胞膜内过氧化脂质 的
微量定量 . 细胞生物学杂志 1 985 ; 7 , 1 4 .2
3
。
N b v a k V J A
.
I n s e e t H o e m o n e S
.
4 t h ed
.
L o n d o n : C h即m a n a n d H a l l , 1 975 : 1 0 2 -
1 8 0
.
遗。 小川和朗 . 膜破坏已机能原子图O 电子显微
镜的细胞化学 . 最新医学 19 78 , 3 , 6 7 .0
5
。
G l a v i n d J
, e t a l
.
S t u d i e s o n t h e r o l e o f
l iP o P e r o x i d e s i n h u m a n P a t h o l o g y : 11
.
T h e
P r e s e n c e o f P e r o x i d i z e d l i P i d s 主n t n e a t h -
e r o s e l e r o s i s a o r t a
.
A e t a P a t ho l M ICor b i o l
I m m u on l S e a n d 1 9 5 2 , 3 0
: 1
。
6
. 卢咏才 , 等 . 天然药何首乌对实验性家兔重
度动脉粥样硬化的影响 . 北京 82 年生理学年
会资料汇编 1 08 2 , 6 .
7
。
S u e m a t s u T W
, e t a l
.
S e r u m l i P o P e r o幻d e
l ve e l i n P a t i e n ts s u f f e r i n g f or m li v e r
d is e a s e s
.
C h i n Ch l m A e t a 1 9 77 ; 7 9 : 2 6 7
。
8
.
G a v i n o V C
, e t a l
.
E f f e e t o f P o l y un sa t ur
-
a t e d f a t t y a e i d s a n d a n t i o x i d a lt s o n l iP d
p e r o x i d a t io n i n t i别 e :cu l t u r e s . J L lIP d
R es 1 9 8 1 ; 22
:
7 6 3
。
9
。
H a r m a n D
.
A g i n g : A t h e o r y ba s e d o n f r e 。
ar d i e a l a n d r a d i a ti o n e h e m i s t r y
.
J G e or -n
t o l 1 9 5 6 , 1 1 : 2 9 8
。
1 0
。
M a r x J K
.
A g i n g r es e a r e h : e e l lu l a r t h eo
r -
i e冬 o f s e n e s e e n e e . S e i e n e e 1 9 7 4 ; 1 8 6吕 11 05 。
( 1 9 8 6年 5 月 2 8日收稿 , 1 98 6年 1 2月 3 0日修回 )
E f e e t o f R U E a n d v iat m i n E o n a o r t ic s m o o t h
力以U S C l e e e l l s in V i t r o
G u o Z加。一Z he n s , e t a l
T h e C o n t r a ! L o b o : a r o r y
,
B e l j i
n g oC l l
e s e o f T ar dl t fo n a l C h i n e s e M
e d i e i n e
,
B e i j i n g
Ab s t r a e t R U E 15 a P l a n r ec d y s o n e
, a m a jo r c om P
O n e n t
u m U n l f l o r u m
.
T h o a o r t i e s m o o t h mu
s e l e c e l l s ( S M C ) w
e r e
ex t ar
e t ed f or m R h a P o n t i e
·
i n ju r e d b y e u l t u r i n g i n
29 7
2%讯 S (好讲 r! IP e m l e e r sum) . T eh a e ti o n o 全R U E a n d v i ta m i n E O n i n j u red S MC
w e e ra 韶a v e d w l t五 T B A i fuo re scen e e re比n iq ue
,
au t or a d i og r a Ph y a n d e l ec t r o n m i
c or
-
S e O P y
.
I t w as fo u n d t加 t R U E 曲 o we d s im主l a r e f fe e t s o n ce l l s a s t h a t O f co n tOr I d r u g ,
v i t a m i n E
, 名u e h a s t h e a e t i v a t i o n o f S M C P r O l i f e r a t in n , r e d u e t i o n o f L P o ( IIP id P e r O
-
x i d e ) co n t e n t
a n d m a i n t a i n i n s u l t r a s t r u e t u ar l i n t铭 ir t y o f s M c . C O n s id e r i n g t h a t R U E
m i沙 t b e a b l e t o 主曲里加 t l i P id p e r o x ida t i叭 t h u : a v o id i n g d电en er a ti v e icl a gn e : o全 SM C
a n d t o k e e P i t , f ine s t r u
e t u r e w e! I
,
we
t址 n k t h at ma y P l a y a n i m P o r ta n t or l e i n t址
a n t l砚 t h er o s e ler o s i s m e e h a n l s m of R h a P o n t i e u m U n i f l o r u m at h er o s e le ros i s , l i P id Per o x i -
d e
,
h y Per l i Pem i
e s er u m
M e SH E cd y s t eor
n e ; C e l l s : L I P ld P e r o ir d es ; A ht e r os cl e r O S i s
~ 卜 .十月 . 斗曰 .印叫 .冲曰心斗闷 卜十闷 . 冲~ 州闷 ·」 , 州气洲卜 叫卜卜斗闷 .门叫 ,十门 .斗闷 ,十 , .」叫 护冲目 .月叫曰间 . j 叫州卜 卜+目卜卜. .」目脚卜 卜诗间叫卜.曰闷 .冲闷 斗叫一卜 .」叫 一诵~ .」闷 . 十 .叫叫曰州州 , 卜十 ,
( 上接第3 18 页 ) 强调机体完整统一的原 则。如
病例 4 ,慢性肾炎 、 慢性肾功能衰竭的患者 , 让
学生推测肾脏的主要病变 , 然后解释为什么尿
会出现蛋 白质 、 管型尿 、 血尿 , 为什么全身骨
骼疼痛 , 近半月来出现腹痛 、 厌食 、 恶心 、 头
昏 、 嗜睡等 。 为什么会出现血压增高 , 可闻及
心包磨擦音等 。 并让学生推测患者的二氧化碳
分压 、 标准碳酸氢盐 、 血磷是增高还 是 降低
等。 又如病例 5 。 肺性脑病的患者引起的昏迷
与体克 、 酸中毒 、 尿毒症 、 肝性脑病 、 脑D I C
所致的昏迷其表面现象都可引起昏迷 , 但本质
上并不一样 , 也就是发病机理不同等 。
在病例讨论中学生发言踊跃 。 提出各种各
样的间题 。 互相争辨 , 对学生提出具有一定深
度的问题 , 教师可进行阐述 , 最后总结发言 ,
起到教学相长的作用 。 更重要 的是通过这样的
活动 , 可 以启发学生的创造性思维 , 培养他们
的目学能力 , 因为没有创造性思维 , 就提不出
有见解的问题 。 爱因斯坦曾说过 “ 提出一个间
题往往比解决一个间题更重要 ” 。 提出新的间
题或新的可能性或从新的角度看旧的问题 , 都
需要有丰富的知识和创造性的想象力。 培养学
生的自学能力旨在校学生不仅 “ 学会 ” , 而且
“ 会学 ” , 才能在知识的海洋中不断的吸取 、
更新 、 这样的学生才能适应未来科学的飞速发
展 。
三 、 小结
通过病例讨论 , 能够提高学生智能 , 是病
生教学改革值得探讨的间题 。
( 1 9 8 7年 4 月 8 日收稿 , 1 9 8 8年 2 月 4 日修回 )
.十, 斗曰曰叫 钾扫曰曰 J , 叫 ·如 ,如 . , 叫 .祷目曰气 . , 目曰同 叫目 .冲曰峥阅 , 气 ,」川 .讨~ .十断闷闷咔司 十吸刊曲 , 曰 ·冲叫弓闷 ·十闷曰叫 十 ·十 .曰叫叶叫 十闷 . 曰卜 卜扫 十 .叶闷 叫闷 ·冲确曰` 咔 月
·本刊启事 ·
关于本刊收费改革的重要通知
学术期刊是各学科领域全国同行的论坛 。 但是 ,
以往由于期刊定价过低 , 而纸张 、 印刷和发行费用剧
增 , 本刊 自创刊以来 , 连年需要政策性贴补。 这种局
面很不利于期刊的正常发展 。 期刊的定价与收费制度
必需改革 。
遵照中国科协 〔 1日8 8 〕科协发字 0 39 号文件的精
神 , 本刊决定从 1 9 8 9年元旦起 , 对所有稿件收取 “ 稿
件处理费 ” 和 “ 发表费” 。 稿件处理费每千字 5元 。
对于经评审合格的论著类稿件 (包括论著 、 研究简报 、
短篇报道和论著摘要 ) 等收取发表费为每千字 30 元至
10 。元 。 上 述两种费用均由作者所在单位支付 , 可由
科研费或其它项、目开支 , 可经银行或邮局汇款 , 由编
辑部统一开收据作为凭证 。
学术论文在期刊上公开发表 , 既能使科研成果得
到整个世界的承认 , 又是成果推广的重要途经 。 在科
研经费中本来就包含科研论文的评审与印刷费用 。 因
此 , 上述改革 , 希望能得到广大作者与有关单位领导
的谅解和支持 。
《 中国病理生理杂志编辑部 》