全 文 ：[收稿日期 ] 2008-07-09
[基金项目 ] 海南医学院苗圃基金项目(NO.200309)
[作者简介 ] 刘月丽(1980-),女 ,河南上蔡人,助教 ,硕士。
[通讯作者 ] 刘月丽 , Tel:(0898)31350701, E-mail:lyl20041981@126.com
山苦茶提取物对动脉粥样硬化防治作用的研究
刘月丽 1 ,王立群 2 ,伍海涛1 ,曲　娴 2 ,林莲波1
(1.海南医学院药学系 ,海南 海口　571101;2.北华大学生理学教研室 ,吉林 吉林　132013)
　　[摘要 ] 目的:探讨山苦茶 (malotusfuretianus)提取物 B对动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的防治作
用及其机制 。方法:一次性给大鼠腹腔注射 VD370万 U/kg,高脂饮食 ,建立 AS模型 ,并预防性给予山
苦茶 B高剂量(0.081 g/kg)、低剂量 (0.026 g/kg)处理 。 9周后 ,取血测定 TG、TC、LDL-C、HDL-C、
SOD、NOS、MDA水平;引流胆汁 ,测胆汁中 TB和胆固醇;取肝脏 ,称肝湿重 ,计算肝指数;迅速取胸主动
脉 ,制成宽 3 mm的胸主动脉环 ,保留内膜 ,并测定其内皮依赖性舒张能力 ,余 HE染色 ,进行病理检查 。
结果:山苦茶 B降低 AS大鼠血清 MDA、TC、TG、LDL-C水平 , 提高 NOS, SOD活性;增加 HDL-C/LDL-C,
增加胆汁中 TB的排出 ,改善血管组织病理变化 ,增强内皮依赖性血管舒张能力。高剂量山苦茶 B能降
低 AS大鼠的肝指数。结论:山苦茶 B可以防治动脉粥样硬化 ,这可能与其降低 TC、增强 NOS活性 、清
除脂质过氧化产物 、提高机体抗氧化能力有关 。
[关键词 ] 山苦茶;动脉粥样硬化;抗氧化
[中图分类号 ] R543.5　[文献标识码 ] A　[文章编号 ] 1007-1237(2008)06-0608-04
Studyonextractofmalotusfuretianusonthepreventionandtherapyofatherosclerosis
LIU　Yue-li1 , WANG　Li-qun2 , WU　Hai-tao1 , QU　Xian2 , LIN　Lian-bo1
(1.DepartmentofPharmacy, HainanMedicalColege　Haikou571101 , China;2.DepartmentofPhysiology,
BeihuaUniversity　Changchun132013, China)
[ ABSTRACT] Objective:TodeterminetheextractBofmalotusfuretianusonthepreventionandtherapyof
atherosclerosis(AS)anditsmechanism.Methods:ASmodelswereestablishedbyinjectingratsVD370 000 U/
kgonetime, feedinghigh-fatdiet, andgivingextractBofmalotusfuretianushigh-dose(0.081 g/kg), low-
dose(0.026 g/kg)respectively.TG, TC, LDL-C, HDL-C, SOD, NOS, MDAlevelofthebloodwereassayed
innineweeks;TBandcholesterolinthebileweremeasuredfromdrainageofbile;theliversoftherateswerere-
movedandweighed, theliverindexwascalculated;thoracicaortaswereremovedinstantly, thoracicaortaringsof
3 mminwidthweremade, theendotheliumwasreservedandthecapacityofendothelium-derivedrelaxingwasde-
termined, therestofthethoracicaortaswereundergoneHEstainingandreceivedpathologicalexamination.Re-
sults:ExtractBofmalotusfuretianusloweredMDA, TC, TG, LDL-ClevelsofASserum, elevatedNOS, SOD
activity, increasedHDL-C/LDL-C, increaseddischargeofTBfrombile, improvedpathologicalchangesofvas-
culartissue, increasedtheabilityofvasodilationoftheendothelium-dependence.High-doseextractBofmalo-
tusfuretianusdecreasedtheindexoftheliver.Conclusion:ExtractBofmalotusfuretianusmaypreventathero-
sclerosis, whichmayberelatedtothedecreaseofTC, enhancementofNOSactivity, removaloflipidperoxidation,
improvementofantioxidation.
[ KEYWORDS] Malotusfuretianus;Atherosclerosis;Antioxidant
608
　海南医学院学报　 2008, 14(6)JournalofHainanMedicalColege
DOI :10.13210/j .cnk i.jhmu.2008.06.015
　　动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一种以高
脂血症 、脂质过氧化等为诱因的炎症性疾病[ 1] ,其
病理表现为变质 、渗出 、增生。目前 ,动脉粥样硬化
的治疗以调脂 、抗氧化为主 。山苦茶(malotusfure-
tianus)是产于海南各地的大戟科野桐属植物 ,具有
清热解毒 、利胆消食等功效[ 2] 。山苦茶可以促进胆
汁的合成和排泄 ,有助于胆石的排除 ,对胆道疾病的
患者取的较好的临床效果 [ 3] ;动物实验表明 ,山苦
茶提取物 B具有显著的利胆作用[ 4] 。本文研究山
苦茶提取物 B对动脉粥样硬化的防治作用及其机
制 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物 　健康雄性 Wistar大鼠 75只 ,体重
200～ 300 g,由长春高新医学动物实验研究中心提
供 ,合格证号:SCXK-(吉)2003-0004。
1.1.2　药品　山苦茶提取物 B,由海南医学院化学
教研室提供;羧甲基纤维素钠(上海黄河制药厂 ,批
号:910401A);胆固醇 (北京化学试剂公司 , 批号:
050829);猪胆盐 (北京化学试剂公司 , 批号:
20060222);他巴唑(上海复星朝晖药业有限公司 ,
批号:20061128);维生素 D3(上海通用药业股份有
限公司 ,批号:061101);维生素 E(上海金伴药业有
限公司 ,批号:20061007);苯肾上腺素(PHE)(上海
禾丰制药有限公司 , 批号:20060908);乙酰胆碱
(ACh)(上海试剂三厂 ,批号:20000420)。
1.1.3　试剂　过氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒
(批号:20070704)、一氧化氮合酶 (NOS)测定试剂
盒(批号:20070703)、丙二醛(MDA)测定试剂盒(批
号:20070705)由南京建成生物工程研究所第一分所
提供;胆汁胆固醇测定试剂盒(柏定生物工程(北
京)有限公司 ,批号:070702);总胆红素(TB)测定试
剂盒 (长春 汇力 生物 技术有 限公 司 , 批号:
20070725);血清总胆固醇(TC)测定试剂盒(批号:
070528)、血清甘油三酯(TG)测定试剂盒 (批号:
070228)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂
盒(批号:070228)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)
测定试剂盒(批号:070228)由上海科华生物工程股
份有限公司提供 。
1.1.4　仪器　721分光光度计(上海第三仪器分析
仪器厂);LXJ-Ⅱ型高速离心机(上海医用分析仪器
厂);BECMAN全自动生化分析仪 (美国 BECMAN
公司);电子天平:沈阳龙腾电子称量仪器有限公
司;电热恒温水浴锅:上海医疗器械五厂;HW-400S
恒温平滑肌浴槽 、BL-420生物机能实验系统 、BI-
2000医学图像分析系统:成都泰盟科技有限公司 。
1.2　方法
1.2.1　分组及给药　将大鼠随机分为正常对照
组 ,模型组 ,维生素 E(0.20g/kg),山苦茶 B高剂量
0.081 g/kg,山苦茶 B低剂量 0.026 g/kg。各药物
均以 0.5%羧甲基纤维素钠为溶剂配制 。除正常对
照组外 ,其余各组给予高脂饲料饲养 ,同时灌胃给予
相应的药物 ,给药容积为 10 mL/kg体重;正常对照
组和模型组给予相应体积的 0.5%羧甲基纤维素
钠。
1.2.2　模型的建立　取健康 Wistar大鼠 75只 ,适
应性喂养 1周后 ,随机抽取 15只作为正常对照组 ,
普通饲料(长春高新医学动物实验研究中心提供)
喂养 ,饮自来水;其余各组大鼠一次性给予 VD370
万 U/kg,高脂饲料(2%胆固醇 +0.5%猪胆盐 +
0.2%他巴唑 +5%白糖 +10%猪油 +82.3%普通饲
料)饲养 9周[ 5] ,饮用自来水。
1.2.3　血脂 、抗氧化能力测定　给药 9周末 ,各组
大鼠以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后 ,经颈总动脉插
管取血。 1 000r/min离心 15 min,取上清。血脂测
定用 BECMAN全自动生化分析仪 ,测定总胆固醇
(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-
C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);黄嘌呤氧化法
测定 SOD活性;硫酸巴比妥比色法测定 MDA;化学
比色法测 NOS;具体操作按试剂盒要求进行。
1.2.4　胆汁成分及肝指数测定 　给药 9周末 ,各
组大鼠以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后 ,胆管引流胆
汁 ,测定胆汁胆红素(TB)、胆汁胆固醇 。迅速取出
肝脏 ,称肝湿重 ,肝指数 =肝湿重 /体重 。
1.2.5　内皮依赖性血管舒张实验 [ 6] 　大鼠采血
后 ,迅速取出胸主动脉 ,制成宽 3 mm的胸主动脉
环 ,保留血管内膜 ,置于通 0.95 O2 +0.05 CO2混
合气体 、pH7.4的正常 Krebs液的浴槽中 。此液配
制为(mmol/L):NaCl115.0;KCl4.6;MgSO4 1.16;
NaH2PO4 1.16;NaHCO3 21.9;CaCl2 2.5;葡萄糖
11.0。标本负荷 2.0 g,平衡 2 h,每 20 min换营养
液 1次 。在采集资料前 ,动脉环用 60 mmol/LKCl
液每隔 20 min收缩 1次 ,直至标本收缩反应可重
现。用 1μmol/LPHE收缩标本 ,待收缩达坪值后 ,
按累积浓度法加入 ACh,记录 ACh每一累积浓度时
血管舒张效应 ,以 PHE引起收缩的松弛率表示 ACh
的血管舒张效应。
1.2.6　血管组织病理检查　用 10%甲醛固定的胸
609刘月丽等.山苦茶提取物对动脉粥样硬化防治作用的研究　
主动脉 ,石蜡包埋 ,连续切片 ,切片固于载玻片上 ,
HE染色 ,光镜下观察 , BI-2000医学图像分析系统
检测内膜中膜厚度比 。
1.2.7　统计学处理 　结果以 ( x±s)表示 ,采用
SPSS10.0统计软件包进行单因素方差分析 ,计量资
料采用组间 t检验(方差不齐时用 t检验)。
2　结果
2.1　山苦茶提取物 B对动脉粥样硬化大鼠血脂的
影响
山苦茶 B高低剂量组均能明显降低模型组大
鼠 TC(P<0.01)、TG(P<0.01, P<0.05)、LDL-C
(P<0.05),提高 HDL-C/LDL-C(P<0.01),见表 1。
2.2　山苦茶提取物 B对动脉粥样硬化大鼠抗氧化
能力的影响
模型组大鼠 SOD、NOS较正常组明显降低(P<
0.01);MDA较正常组明显增加(P<0.05);高低剂
量山苦茶 B、维生素 E均能明显改善动脉粥样硬化
大鼠的抗氧化能力 ,增加 NOS活性 ,山苦茶 B低剂
量对 NOS的影响最为显著 ,见表 2。
2.3　山苦茶提取物 B对动脉粥样硬化大鼠胆汁成
分和肝指数的影响
高低剂量山苦茶 B均能增加胆汁中胆红素的
量(P<0.01),对胆汁中胆固醇无明显影响。另外 ,
高剂量的山苦茶 B能够降低模型组大鼠的肝指数
(P<0.01),见表 3。
2.4　山苦茶提取物 B对动脉粥样硬化大鼠内皮依
赖性血管舒张实验的影响
模型组大鼠对 ACh引起的内皮依赖性血管松
弛作用明显降低 ,山苦茶 B高低剂量 、维生素 E均
能改善动脉粥样大鼠 ACh引起的内皮依赖性血管
松弛作用 ,见表 4。
表 1　山苦茶对动脉粥样硬化大鼠血脂的影响( x±s, n=15)
组别 剂量(g/kg)
TC
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
HDL-C
(mmol/L)
LDL-C
(mmol/l) HDL-C/ LDL-C
正常 - 1.62±0.34＊＊ 1.37±0.19＊ 0.69±0.160＊ 0.088±0.04＊＊ 6.18±1.75＊
模型 - 3.71±0.71■■ 1.71±0.45■ 1.33±0.036■ 1.730±0.45■■ 0.78±0.23■
维生素 E 0.20 2.12±0.38＊＊ 1.29±0.18＊ 0.74±0.390 0.540±0.40＊ 1.60±0.43＊
山苦茶 0.081 2.67±0.68＊＊ 0.85±0.31＊＊ 0.94±0.070 0.520±0.04＊ 1.80±0.11＊＊
0.026 2.64±0.83＊＊ 1.31±0.23＊ 0.95±0.620 0.530±0.39＊ 2.38±0.70＊＊
　　　注:与模型组比较 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与正常组比较 ■P<0.05, ■■P<0.01。
表 2　山苦茶各组分对动脉粥样硬化大鼠抗氧化能力的影响( x±s, n=15)
组别 剂量(g/kg) SOD(U/mL) MDA(nmol/mL) NOS(U/mL)
正常 - 171.34±16.34＊＊ 10.47±1.25＊ 35.80±5.23＊＊
模型 - 133.46±13.41■■ 13.24±2.11■ 22.40±5.77■■
维生素 E 0.20 150.06±16.23＊ 10.25±2.09＊ 31.01±3.70＊＊
山苦茶 B 0.081 152.30±12.27＊ 10.78±2.80＊ 29.10±4.58＊
0.026 153.73±4.16＊＊ 10.80±1.69＊ 35.74±9.87＊＊
　　　　　　　　注:与模型组比较 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与正常组比较 ■P<0.05, ■■P<0.01。
表 3　山苦茶 B对动脉粥样硬化大鼠胆汁成分和肝指数的影响( x±s, n=15)
组别 剂量(g/kg) TB(μmol/mL) CH(mmol/mL) Liverindex
正常 - 82.57±11.36＊＊ 1.02±0.28＊＊ 0.026±0.002 7＊＊
模型 - 29.60±12.20■■ 0.46±0.11■■ 0.038±0.005 2■■
维生素 E 0.20 69.00±11.17＊＊ 0.38±0.11 0.035±0.003 7
山苦茶 0.081 75.33±32.36＊＊ 0.47±0.12 0.028±0.003 7＊＊
0.026 74.00±22.89＊＊ 0.40±0.12 0.033±0.003 4
　　　　　　　　注:与模型组比较 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与正常组比较 ■P<0.05, ■■P<0.01。
610 　海南医学院学报 Vol.14No.6Dec.2008
表 4　山苦茶各组分对 Ach引起的内皮依赖性松弛作用(%)( x±s, n=8)
组别 剂量(g/kg) ACh-9 ACh-8 ACh-7 ACh-6 ACh-5 ACh-4
正常 - 26.96±9.05＊＊ 33.40±12.39＊ 36.32±11.92＊＊ 41.54±11.54＊＊ 48.80±8.75＊＊ 55.76±8.67＊＊
模型 - 5.13±2.55■■ 7.10±5.12■ 11.63±5.87■■ 14.80±5.66■■ 20.58±4.17■■ 22.68±3.73■■
维生素 E 0.20 13.60±5.32 16.94±4.73 23.90±5.73＊ 30.80±9.29＊ 36.72±12.15＊ 39.06±12.04＊
山苦茶 B 0.081 14.27±1.65 34.07±5.12＊ 41.93±1.32＊＊ 47.10±1.33＊＊ 50.50±0.70 ＊＊ 54.37±0.59＊＊
0.026 14.35±3.28 24.15±7.07 28.45±10.32＊＊ 33.70±14.58＊＊ 37.15±12.90 ＊ 42.08±11.22＊＊
　　注:与模型组比较 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与正常组比较 ■P<0.05, ■■P<0.01。
2.5　山苦茶提取物 B对胸主动脉组织病理的影响
正常组大鼠胸主动脉管腔圆形 ,内膜 、中膜 、外
膜分界清楚 ,管腔面由内皮细胞覆盖 ,结构完整;模
型组大鼠胸主动脉管壁增厚 ,管腔变窄 ,内皮细胞
水肿 ,内膜增生明显 ,并形成斑块 ,向管腔面突出 ,
斑块内有坏死物质和钙化 ,斑块表面纤维帽明显 ,
中膜明显萎缩;用高低剂量山苦茶 B和维生素 E处
理的大鼠 ,坏死物质和钙化明显减少 ,内膜 、中膜厚
度比较模型组明显降低 ,见表 5。
表 5　山苦茶 B对动脉粥样硬化大鼠胸主动脉内膜
和中膜厚度比的影响
组别 剂量(g/kg) 内膜 、中膜厚度比
正常 - 0.035±0.0076＊＊
模型 - 0.870±0.26■■
维生素 E 0.20 0.090±0.038＊＊
山苦茶 B 0.081 0.360±0.21＊＊
0.026 0.350±0.15＊＊
　　注:与模型组比较 ＊＊P<0.01;与正常组比较■■P<0.01。
3　讨论
高脂血症是动脉粥样硬化发病的危险因素 ,其
中高胆固醇 、高低密度脂蛋白血症是 AS病变形成
的决定因素 ,尤其氧化型 LDL(ox-LDL)更具致病
性 [ 7] ;血管内皮在血管稳态中所起到的轴心作用 ,
对于内皮依赖的血管舒张及维持内皮功能完整性
过程中 , NO起关键作用 , NO生成减少可导致内皮
功能紊乱 ,出现内皮依赖性的血管舒张能力下降 ,
可以导致动脉血管狭窄或动脉粥样硬化斑块的破
裂 [ 8] ;因此 ,促进 NO的生成 ,降低血清胆固醇 ,降低
ox-LDL,对动脉粥样硬化的防治具有重要意义 。
本次实验一次性大剂量腹腔注射 VD3,损伤血管内
皮 ,并给予高脂饮食 ,建立 AS大鼠模型 。 9周后 ,模
型组大鼠出现高脂血症 ,脂质代谢紊乱 ,体内过氧
化产物增多 ,抗氧化能力下降 ,病理检查出现明显
斑块 ,斑块内有大量的坏死物质和钙化。实验结果
表明 ,山苦茶 B能明显改善上述变化 。合成胆汁酸
是胆固醇主要的代谢途径 ,山苦茶 B对胆汁成分中
的胆固醇没有明显的影响 ,但能明显降低血液中的
胆固醇 ,可能是通过促进胆汁酸合成 ,增加胆固醇
的代谢来实现的 。高脂饮食 9周后 ,模型组大鼠血
清 TG增高 , TG在肝脏内蓄积 ,表现为肝指数增大 ,
同时 ,脂质过氧化可以损伤肝细胞 ,影响肝功能 [ 5] 。
高剂量的山苦茶 B能降低血液中 TG,减少 TG在肝
内的蓄积 ,降低模型组大鼠的肝指数 ,提高机体抗
氧化能力 ,改善肝组织脂质过氧化损伤 ,改善肝功
能 。山苦茶 B可以增加胆汁中胆红素的量 ,这可能
由于山苦茶 B促进肝细胞合成胆红素有关 。山苦
茶 B能降血脂 ,提高机体抗氧化能力 ,增加胆汁的
产生和排泄 ,改善内皮功能 ,阻止动脉粥样硬化的
发生和发展 。其具体的作用机制尚不清楚 ,有待于
进一步的研究。
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(责任编辑　伍平)
611刘月丽等.山苦茶提取物对动脉粥样硬化防治作用的研究