全 文 ：山苦茶抑菌效果研究
闫 佳， 李跃萍， 闫庆峰， 韦 祎
（ 海南医学院， 海南 海口 571101）
摘要： 山苦茶浸出物对金黄色葡萄球菌、 枯草杆菌 、 大肠杆菌和啤酒酵母具有较低的抑菌浓度 ， 分别为 1 300，
1 000， 1 500， 1 000 mg/L， 能短时间内杀灭这 4种菌， 30 min杀菌率在 60%以上， 60 min杀菌 100%， 并有良好的
热稳定性。
关键词： 山苦茶浸出物； 抑菌； 热稳定性
中图分类号： R285 文献标志码： A doi： 10.3969/jissn.1671- 9646（ X） .2012.05.008
Study on Bacteriostasis of Mallotus Furetianus Extract
YAN Jia， LI Yue- ping， YAN Qin- feng， WEI Yi
（ Hainan Medical College， Haikou， Hainan 571101， China）
Abstract： The inhibitory concentrations of mallotus furetianus extract on Staphylococcus aureus， Bacillus subtilis， beer yeast
and Escherichia coli are 1 300， 1 000， 1 500 and 1 000 mg/L， it can kill the four kinds of bacteria in a short period of time
and with good thermal stability.
Key words： mallotus furetianus extract； bacteriostasis； thermal stability
收稿日期： 2012- 02- 28
基金项目： 海南省自然科学基金 （ 310046） 。
作者简介： 闫 佳 （ 1968— ） ， 女， 山西人， 博士， 副教授， 研究方向： 营养及食品科学。 E- mail： goodluckyan@126.com。
文章编号： 1671- 9646 （ 2012） 05- 0027- 02
山苦茶系大戟科野生桐属， 主要分布我国海南
岛、 中印半岛及苏门答腊岛。 由于它香味怡人， 富
含多种矿物质， 必需氨基酸含量高， 有清热解毒、
利胆消食和降脂降血压的功效。 海南人习惯用晒干
后的山苦茶叶子泡制饮料， 俗称为鹧鸪茶。 山苦茶
是海南民间的一种具有浓郁地方特色和民族特色的
代茶饮料植物和重要的药用植物[1- 2]。
食品腐败的原因有物理作用、 化学作用、 酶和微
生物 4个因素， 其中微生物作用是主导因素。 食品加
工过程中， 为了防止食品腐败， 延长食品的贮存期，
必须使用防腐剂来达到防腐保鲜的目的。 目前常用的
防腐剂主要是化学防腐剂， 如苯甲酸及其盐类、 山梨
酸及其盐类等， 这些化学防腐剂对人们身体健康都有
一定的毒副作用。 人们期待既符合机体健康要求， 同
时能达到防腐效果的天然防腐剂。 自然界天然植物中
存在许多生理活性物质， 具有抗菌作用。 这为开展植
物源天然防腐剂的研究捉供了宝贵资源。 本试验研究
山苦茶浸出物对食品中常见的几种菌的抑制作用。
1 试验材料和方法
1.1 试验材料
茶多酚和山苦茶浸出物制备： 山苦茶 100 g， 在
海南茶叶店购买， 粉碎后过 50目筛， 用 85 ℃纯净
水浸泡 30 min， 茶与纯净水的质量比为 1∶100； 用
抽滤机过滤， 重复过滤 3 次， 合并 3 次浸提茶汤，
减压浓缩且烘干， 得 5 g山苦茶浸出物， 装瓶， 在
4℃的冷藏箱中贮藏。
试验菌种： 金黄色葡萄球菌、 枯草杆菌、 大肠
杆菌和啤酒酵母。
主要设备： 抽滤机、 超净工作台、 恒温培养箱、
电热鼓风干燥箱、 生物显微镜等。
1.2 试验方法
1.2.1 试管稀释法[3- 4]
取 2环斜面菌种于 5mL液体培养基， 牛肉膏 10g，
蛋白胨 10 g， 葡萄糖 1 g， NaCl 5 g和水 1 000 mL，
pH值调到 7.0， 在 37℃ （ 酵母 27℃） 培养 6 h， 显
微镜下观察计数， 调整到含菌 105~106 CFU/mL备用。
用液体培养基将山苦茶浸出物稀释成不同的浓度，
在超净工作台上， 无菌条件下接种 50 μL 制备好的
菌种， 同时设阴性和阳性对照药物不接菌， 吐温—
80接菌， 重复 3次。 培养箱中 37 ℃ （ 酵母 27 ℃）
培养 24 h后， 在波长 640 nm处测定吸光度， 以吸
光度为纵坐标， 药物浓度为横坐标绘制抑菌曲线。 曲
线中吸光度开始下降的浓度为起始抑菌浓度 （ ≤
MIC） ， 吸光度降到和空白 （ 不接菌） 的吸光度相等
第 5期 （ 总第 280期） 农产品加工·学刊 No.5
2012年 5月 Academic Periodical of Farm Products Processing May
农产品加工·学刊 2012年第 5期
时， 其浓度为完全抑制浓度 （≤MBC） 。 从完全抑制
后各管中取 50 μL接种于平板培养基中再培养 48 h，
以不长菌的为杀菌浓度 （ MBC） 。
1.2.2 杀菌时间试验[5]
取 50 μL 液体菌种到约含2倍 MBC山苦茶浸出
物的液体培养基中， 37 ℃ （ 酵母 27 ℃） 分别培养
30和 60 min 后 ， 立即取 1 mL， 稀释至 102， 103，
105， 106， 107倍终止杀菌反应， 各稀释度分别进行
平板培养 （ 37℃） 24 h后统计菌落形成个数， 结果
表示为 CFU/L。 每个稀释度重复 2个平板， 接种液直
接稀释平板培养计数作为起始值， 以此计算存活率。
抑菌率＝对照菌落数 - 试验物菌落数
对照菌落数
×100％.
1.2.3 耐热性试验
将山苦茶浸出物置于不同加热条件下处理后，
在灭菌培养基中分别加入其供试菌种的 MIC量， 分
别测定抑菌率， 观察加热处理是否影响山苦茶浸出
物的抑菌活性。
2 结果与讨论
2.1 茶多酚对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度 （ MIC）
和最低杀菌浓度 （ MBC） 测定结果
茶多酚对金黄色葡萄球菌的抑菌作用见图 1。
图 1 茶多酚对金黄色葡萄球菌的抑菌作用
由图 1可看出， 当茶多酚质量浓度增大到 25mg/L
时， 吸光度开始降低， 说明随浓度的增加， 菌的生
长受到抑制， 数量在减少， 此质量浓度为起始抑此
菌浓度； 当质量浓度高到 300 mg/L， 吸光度降到与
药物不接菌线重合， 说明此时菌的生长受到完全抑
制， 此浓度为完全抑此菌浓度。
用同样的方法得出茶多酚对实验 4种菌的完全
抑菌浓度。 可以看出茶多酚对金黄色葡萄球菌、 枯
草杆菌、 大肠杆菌、 啤酒酵母这 4种菌都有很好的
抑制作用。
茶多酚抑菌的 MBC见表 1。
表 1 茶多酚抑菌的 MBC /mg·L-1
2.2 山苦茶浸出物最低抑菌浓度 （ MIC） 和最低杀
菌浓度 （ MBC） 测定结果
山苦茶浸出物 MIC和 MBC见表 2。
表 2 山苦茶浸出物 MIC 和 MBC /mg·L-1
由表2可以看出， 山苦茶浸出物对金黄色葡萄球
菌、 枯草杆菌、 大肠杆菌、 啤酒酵母这 4种菌都有
较好的抑制作用， 但与茶多酚的抑菌效果比还是差
些， 山苦茶浸出物对枯草杆菌和啤酒酵母的抑制能
力好于其抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的能力。
因为茶多酚购买的是食品级纯品， 它有很好的生物
抑菌效果已得到广泛应用； 而山苦茶浸出物仅仅是
模拟人饮用山苦茶的一种粗提物， 它含有茶多酚等
生物抑菌成分。
2.3 山苦茶浸出物杀菌时间试验结果
山苦茶浸出物杀菌时间试验结果见表 3。
从表 3可看出， 用 2倍 MBC剂量处理供试 4种
菌 30 min 后， 在全部实验药液中处理前后菌落比在
40%以下； 60 min后完全无菌落形成。 结果说明， 山
苦茶浸出物能在短时间内杀灭金黄色葡萄球菌、 枯
草杆菌、 啤酒酵母和大肠杆菌这 4种菌。
供试菌种
金黄色
葡萄球菌
枯草杆菌 大肠杆菌 啤酒酵母
MBC 430 320 510 390
供试菌种
金黄色
葡萄球菌
枯草杆菌 大肠杆菌 啤酒酵母
MIC
MBC
1 300
4 500
1 000
3000
1 500
6 000
1 000
3 500
表 3 山苦茶浸出物杀菌时间试验结果
时间
t/min
金黄色葡萄球菌 枯草杆菌 大肠杆菌 啤酒酵母
菌落数
/CFU·L-1
处理前后菌落
比 /%
菌落数
/CFU·L-1
处理前后菌落
比 /%
菌落数
/CFU·L-1
处理前后菌落
比 /%
菌落数
/CFU·L-1
处理前后菌落
比 /%
30
60
13.1×105
0
35.1%
0
3.06×105
0
31.3%
0
4.66×105
0
36.2%
0
2.69×105
0
28.2%
0
(下转第 42页)
2.4 山苦茶浸出物耐热性试验结果
山苦茶浸出物耐热性试验结果见表 4。
由表 4可知， 不同热处理条件对山苦茶浸出物
抗菌活性有不同程度影响， 但抑菌率均在 70％以上，
对于高温短时间处理的样品， 抑菌率也高于 70％，
表明山苦茶浸出物抗菌能力具有良好的热稳定性。
28· ·
农产品加工·学刊 2012年第 5期
3 小结
山苦茶浸出物对金黄色葡萄球菌、 枯草杆菌、
啤酒酵母和大肠杆菌具有较低的 MIC和 MBC， 能短
时间内杀灭这 4种菌， 并有良好的热稳定性， 故而
可以将其用作饲料抗菌添加剂。 它对机体内的抑菌
作用效果将来可进行相关的动物实验研究。
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未加热处理
95℃ 30min
100℃ 10min
100.0
72.5
81.7
100.0
70.5
82.9
100.0
72.5
84.2
100.0
73.8
83.6
枯草杆菌 大肠杆菌
金黄色
葡萄球菌
啤酒酵母
处理方式
抑菌率 /%
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
(上接第 28页)
表 4 山苦茶浸出物耐热性试验结果
由于方程（ 4） 的二次系数为负值， 方程所代表
的抛物面开口向下， 因而该方程有极大值。
中心组合试验响应面见图 1。
图 1 中心组合试验响应面
由图 1可知， 模型的二维响应面证实了拟合面
具有最大值。
用 Mathematica对方程 （ 4） 进行求导， 可以得
到模型的最大值， 即最大木聚糖酶产量。 当 KH2PO4
为 1.33 g， ZnSO4·7H2O为 0.003 g时， 木聚糖酶产量
达到 8.718 U/mL。 为了进一步验证试验结果， 在优
化的培养基条件下进行重复试验 3次， 得到木聚糖
酶平均产量为 8.681 U/mL， 这证明试验值和实际值
之间具有良好的拟合性， 优化模型可靠。
3 结论
通过 Plackett- Burman设计、 最陡爬坡试验及中心
组合设计的方法确定了米曲霉 （ Aspergillus oryzae）
RM- 509发酵产木聚糖酶的最适培养基。 优化后木聚糖
酶产量达到 8.681U/mL， 较优化前提高了 1.399倍。
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