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山苦茶对小鼠非特异性免疫功能的影响



全 文 :DOI:CNKI:46-1049/R.20120314.1038.015
网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/46.1049.R.20120314.1038.015.html
[收稿日期]2012-03-06  [修回日期]2012-03-10  网络出版时间:2012-3-14 10:38
[基金项目]海南省自然科学基金资助项目(310046)
[作者简介]闫佳(1968-),曾用名阎高峰,女,山西人,副教授 ,博士,电话:18289762302,电子信箱:goodluckyan@126.com。
山苦茶对小鼠非特异性免疫功能的影响
闫 佳,李跃萍,闫庆峰,韦 祎
(海南医学院营养与食品卫生学教研室,海南 海口 571199)
  [摘要]目的:探讨山苦茶对小鼠非特异性免疫功能的影响。方法:80只昆明种健康小鼠随机分为4组:
空白对照组(给予无菌蒸馏水0.1mL/10g)及山苦茶低、中、高剂量组(分别给予山苦茶0.5、1.0、2.0
g/kg),每组20只,分别作小鼠碳粒廓清试验和腹腔巨噬细胞吞噬试验,计算并比较各组小鼠胸腺指
数、脾脏指数、校正吞噬指数a及腹腔巨噬细胞吞噬率、吞噬指数。结果:灌胃不同剂量山苦茶水提物
7d后,与空白对照组相比,山苦茶各剂量组小鼠的胸腺指数、脾脏指数以及单核巨噬细胞碳粒廓清能
力、吞噬率、吞噬指数均明显增加,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:山苦茶可通过影响小鼠免
疫器官来增强机体的免疫能力;可加快小鼠体内碳颗粒的清除速度,增强小鼠的非特异性免疫能力;能
提高小鼠巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,对正常机体的非特异性免疫功能具有增强作用。
[关键词]山苦茶;小鼠;非特异性免疫
[中图分类号]R-332;R931.71 [文献标识码]A [文章编号]1007-1237(2012)05-0589-03
Efects of Malotus furetianus on non-specific immune function of mice
YAN Jia,LI Yue-pin,YAN Qin-feng,Wei Yi
(Department of Nutrition and Food Hygiene,Hainan Medical College,Haikou571101,China)
[Foundation Project]:Hainan Provincial Natural Science Foundation(310 046)
[Author]:YAN Jia(1968-),formerly known as YAN Gao-feng,Female,Born in Shanxi,Associ-
ate Professor,Ph.D.,Tel 18289762302,e-mail:goodluckyan@126.com.
Received:2012-03-06  Revised:2012-04-10  JHMC,2012;18(5):589-591
View from specialist:It is creative,and of certain scientific and educational value.
[ABSTRACT]Objective:To explore the Effects of Mallotus furetianus on non-specific immune func-
tion of mice.Methods:Eighty mice were randomly divided into 4groups with 20in each group including
the control group administered with water and three experimental groups administered with Mallotus fure-
tianus at doses of 0.5g/kg,1.0g/kg,2.0g/kg for 7consecutive days respectively.Carbon clearance test
and peritoneal macrophage phagocytosis test were conducted to calculate and compare the thymus index,
spleen index,corrected phagocytic index a,peritoneal macrophage phagocytic rate and phagocytic index a-
mong each group.Results:After 7days of treatment experimental groups al showed significant increase in
thymus index,spleen index,corrected phagocytic index a,peritoneal macrophage phagocytic rate and
phagocytic index comparing with the control group(P<0.05).Conclusion:Mallotus furetianus can in-
crease thymus index,spleen index,corrected phagocytic index a,peritoneal macrophage phagocytic rate
and phagocytic index thus can improve the non-specific immune function of mice.
[KEY WORDS]Mallotus furetianus;Mice;Non-specific immunity
985
海南医学院学报 2012,18(5)
Journal of Hainan Medical University 
DOI:10.13210/j.cnki.jhmu.2012.05.005
  山苦茶系大戟科野生桐属,主要分布于我国海
南岛、中印半岛及苏门答腊岛。由于其香味怡人,富
含多种矿物质,必须氨基酸含量高,有清热解毒、利
胆消食、降脂、降血压的功效,海南人习惯用它的经
晒干后的叶子泡制饮料,俗称为鹧鸪茶,是海南民间
的一种具有浓郁地方特色和民族特色的代茶饮料植
物和重要的药用植物[1]。研究表明茶中含有“L茶
氨酸”的氨基酸和茶多酚都对人体有免疫作用[2],本
实验以山苦茶为材料,探讨山苦茶水提物对小鼠的
非特异性免疫效果,以推动海南山苦茶产业的发展。
1 材料与方法
1.1 材料与设备
山苦茶(海南产);昆明种健康小鼠80只,雌雄
各半,体重18~22g,由昆明医学院动物中心提供;
印度墨水、碳酸钠、瑞氏染粉等。设备:旋转蒸发器、
游泳箱(40cm×55cm×55cm)、离心机、电子天
平等。
1.2 方法
1.2.1 受试山苦茶水提物的制备 山苦茶100g→
85℃水浸提20min→用抽滤机过滤→减压浓缩至
100mL(75℃)→装瓶备用(其浓度为1g茶/mL茶
汤的提取液)→低温冷藏(4℃)[3]。
1.2.2 实验动物及分组 小鼠适应性饲养3d后
按体重随机分为4组:空白对照组(给予无菌蒸馏水
0.1mL/10g)及山苦茶低、中、高剂量组(分别给予
山苦茶0.5、1.0、2.0g/kg),每组20只小鼠,雌雄
各半,根据小鼠体重给予不同体积的受试物,每天经
口灌胃给予受试物1次,连续7d,期间小鼠自由取
水饮食。
1.2.3 小鼠碳粒廓清试验[4] 末次给药的次日,称
体重,每只鼠尾静脉注射5倍稀释的印度墨汁0.05
mL/10 g体重,分别于第2、10分钟用毛细采血管
在小鼠眼眶后静脉丛取血20μL溶于2 mL0.1%
Na2CO3 溶液中摇匀。以0.1% Na2CO3 溶液作空
白,于600 nm处测定吸光度。最后将小鼠断颈处
死,用滤纸吸脏器表面血污,称取脾脏和胸腺重量,
按下式分别计算廓清指数(K)、胸腺指数和脾脏指
数。K可表示吞噬速率,动物肝、脾重量影响吞噬速
率,一般以校正吞噬指数a表示,反映了每单位组织
重量的吞噬活性。
胸腺指数(mg/g)=
胸腺重量mg
体重g
脾脏指数(mg/g)=
脾脏重量mg
体重g
廓清指数K=logA1-logA2T2-T1
α=
体重
肝重+脾重×

槡K
1.2.4 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验[5]
1.2.4.1 鸡红细胞悬液的制备 将采血部位鸡毛
剪去,用70%乙醇局部消毒。取鸡血5mL转移到
20mL Alsever′s血细胞保存液中4℃保存(不超过
1周)。临用前用生理盐水洗涤3次,2 000r/min
离心,去上清液,用生理盐水配成1%的鸡红细胞悬
液。
1.2.4.2 Alsever′s血细胞保存液的配制 葡萄糖
2.05g、氯化钠0.42g、柠檬酸钠0.80g,溶于800
mL重蒸水,0.1%柠檬酸溶液调节pH为7.2(约需
50mL),然后定容到1 000mL。用0.22μm膜过
滤,10磅高压灭菌15min,4℃保存。
1.2.4.3 瑞氏染液的配制 称取瑞氏染粉0.2g,
放置于硏钵内,用120mL甲醇逐步分次洗溶并转
至棕色瓶中。37℃下放置1周,每天摇匀1次,使其
充分溶解,过滤后备用。
1.2.4.4 吞噬功能的测定 最后一次给药后1h,
每只小鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液1mL。间隔
30min颈椎脱臼处死,将其仰位固定于鼠板上,正
中剪开腹壁皮肤,经腹腔注入生理盐水1mL,转动
鼠板1min。然后吸出腹腔液0.5mL,平均分滴于2
片玻片上,用生理盐水漂洗,自然干燥,以甲醇溶液
固定,加入瑞氏染液染色1min,滴加pH6.5的PBS
与染液混匀,静置5min,纯净水冲去染料,干燥后
镜下观察计数,计算吞噬率和吞噬指数。
吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞
数/计数的巨噬细胞数×100%
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨
噬细胞数×100%
1.3 统计学处理
采用SPSS11.0统计软件处理数据,计量资料
的比较采用t检验,P<0.05为有差异有统计学意
义。
2 结果
从表1可见,灌胃不同剂量山苦茶水提物7d
后,与空白对照组相比,山苦茶各剂量组小鼠的胸腺
指数、脾脏指数以及单核巨噬细胞碳粒廓清能力、吞
噬率、吞噬指数均明显增加,差异均有统计学意义
(P均<0.05),说明山苦茶可通过影响小鼠免疫器
官来增强机体的免疫能力;可加快小鼠体内碳颗粒
的清除速度,增强小鼠的非特异性免疫能力;能提高
小鼠巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,对正常机体的
非特异性免疫功能具有增强作用。
095  海南医学院学报 Vol.18No.5May.2012
表1 山苦茶对小鼠免疫器官、吞噬指数及腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响(珚x±s)
组别 胸腺指数(mg/g) 脾脏指数(mg/g) a 吞噬百分率(%) 吞噬指数
空白对照组 0.99±0.01  2.90±0.05  4.930±0.174  42.79±1.25  0.49±0.15
山苦茶低剂量组 1.06±0.01* 3.00±0.07* 5.258±0.079* 49.79±1.26* 0.57±0.02*
山苦茶中剂量组 1.10±0.02* 3.14±0.07* 5.682±0.072* 53.46±0.75* 0.63±0.01*
山苦茶高剂量组 1.15±0.01* 3.20±0.07* 5.784±0.066* 59.02±0.69* 0.67±0.02*
    注:*与空白对照组比较,*P<0.05。
3 讨论
胸腺是免疫中枢器官,可有效地辅助并增强全
身免疫功能;脾脏是重要的外周免疫器官,是免疫细
胞居住、增殖、经营和产生免疫效应物质及免疫力的
场所,能合成增强吞噬细胞作用特有的物质而激活、
增强巨噬细胞及中性粒细胞的吞噬销毁作用[6,7]。
免疫器官的重量是反映机体非特异性免疫功能的重
要指标,脏器指数的高低是反映机体非特异性免疫
的一个方面[8]。胸腺和脾脏的重量和结构变化在一
定程度上反映了动物的免疫水平,是衡量机体免疫
功能的初步指标[9]。巨噬细胞的吞噬能力很强,能
吞噬细菌、疟原虫、异物、组织碎片,还能识别和杀
伤肿瘤细胞。另外,巨噬细胞可吞噬、处理和呈递
抗原,将抗原信息传递给免疫活性细胞,参与特异
性免疫反应[10]。单核巨噬细胞是衡量机体非特异
性免疫功能的指标之一,当墨汁被注入到小鼠尾静
脉血液中,血液中的外周血单核巨噬细胞会吞噬异
物颗粒,可用巨噬细胞的吞噬指数反映其吞噬能力,
鸡红细胞因其表面具有多种蛋白复合物,注入到小
鼠腹腔中时能激活巨噬细胞并将其吞噬,吞噬指数
是衡量巨噬细胞吞噬能力的标志[11]。本实验结果
表明:与空白对照组比较,各剂量组山苦茶均能提高
小鼠胸腺指数和脾脏指数,差异有统计学意义(P<
0.05),能增强小鼠单核-巨噬细胞吞噬指数(P<
0.05),也能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<
0.05),即能增强小鼠2项巨噬细胞功能,表明其具
有增强小鼠非特异免疫功能的作用。
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(上接第588页)
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