全 文 :*浙江省科技厅公益项目(2011C23128);2010年度丽水学院重点
科研项 目 (kz201018);2011 年 度 丽 水 市 科 技 局 公 益 项 目
(20111JYZB20)
△浙江省丽水市质量技术监督检测院(丽水323000)
▲浙江省景宁县人民医院(丽水310000)
条叶榕抗炎镇痛作用研究*
王喜周 应跃跃△ 张 昊 姚晓伟 陈学智▲ 丽水学院医学院(丽水323000)
摘 要 目的:观察条叶榕的抗炎镇痛作用。方法:对实验小鼠连续灌喂不同提取部位和剂量的条
叶榕,分别采用三种抗炎实验(二甲苯致小鼠耳肿胀实验、角叉菜胶致小鼠足跖肿胀实验、小
鼠皮下棉球肉芽肿增生实验)和两种镇痛实验(醋酸致小鼠扭体法实验和小鼠热板法)。结
果:条叶榕能降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀率,抑制角叉菜胶所致的小鼠足跖肿胀以及小鼠
皮下棉球所致的肉芽肿增生,减少醋酸所致小鼠扭体次数,提高小鼠热板痛阈值;同剂量的
条叶榕醇提液的抗炎镇痛效果强于水提液。结论:条叶榕的具有较好的抗炎镇痛,并且醇提
液强于水提液。
主题词 @ 条叶榕 镇痛药 动物实验 小鼠
【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1000-7369(2013)05-0621-03
条叶榕(Ficus pandurata hance var.angustifolia Cheng)为
桑科榕属植物,畲药名小香勾,别名小康补[1],是畲族最常用的
畲药之一。《浙江省中药炮制规范》记载:条叶榕的功效:利湿,
健脾。主治:消化不良,疳积,腹泻等的疾病[2]。该药在浙中南
地区民间应用较广,主要用于水肿,腹痛,风湿等疾病。鄢连和
等认为其有祛风除湿,行气活血的功效[3]。有科研工作者对条
叶榕的黄酮类生物活性物质进行了提取分离研究[4],发现其富
含黄酮类物质。据文献报道榕属药用植物所含的黄酮类物质
具有多重生物活性功效,如抗菌[5]、抗炎[6]、抗氧化[7]、护肝
作[8]等。本文对条叶榕的抗炎镇痛作用进行药效学研究,并比
较了其不同提取的抗炎镇痛效果。为条叶榕的药物开发和临
床应用提供依据。
1 材 料 1.1 仪器和试剂 YLS-6B智能热板仪、
YLS-Q4耳肿打耳器,醋酸地塞米松(浙江仙居制药厂,批号
110736),阿司匹林、95%乙醇、氯仿、醋酸乙酯、冰醋酸、二甲苯
均为分析纯;角叉菜胶,Sigma公司。
1.2 药 物 野生条叶榕2010年8月中旬采自浙江遂
昌白马山国家森林公园,丽水食品药品检验所李建良鉴定为
Ficus pandurata hance var.angustifolia Cheng,取条叶榕根茎,
水洗,60℃烘箱中烘至恒重,粉碎,过三号筛,装保鲜袋,冷藏备
用。
称取条叶榕根茎粉末100g,加蒸馏水1000mL,28℃超声
辅助 提 取 20min,100℃ 回 流 30min,过 滤,药 渣 加 蒸 馏 水
500mL,100℃回流30min,过滤,合并滤液,浓缩至生药1g/mL,
得条叶榕水提液,置4℃保存备用。
称取条叶榕根茎粉末100g,加50%(v/v)乙醇1000mL,
28℃超声辅助提取20min,煮沸,回流30min,过滤,药渣加50%
(v/v)乙醇500mL,煮沸,回流30min,过滤,合并滤液,挥醇,浓
缩至生药1g/mL,得条叶榕醇提液,置4℃保存备用。
给药方式及容积:条叶榕水提液、条叶榕醇提液和阿司匹
林灌胃给药,每天一次,每次25mL/kg,地塞米松腹腔注射给
药。
1.3 动 物 昆明种小白鼠(清洁级),雌雄各半,年龄4
~6周,体重18~22g,由丽水学院实验动物中心提供并饲养。
饲养条件:笼养,安静,室温23±2℃,湿度60±10%,12小时昼
夜更替。
2 实验方法 2.1 二甲苯致小鼠耳肿胀实验[9] 60
只18~22g小鼠实验动物,随机分为6组,每组10只,即生理
盐水组(25g·kg-1)、阳性对照组(地塞米松1mg·kg-1)、条叶
榕水提液高剂量组(9g·kg-1)、条叶榕水提液低剂量组(3g·
kg-1)、条叶榕醇提液高剂量组(9g·kg-1)、条叶榕醇提液低剂
量组(3g·kg-1)。各组动物每天给药1次,连续给药6d,末次
给药lh后,将二甲苯(0.04mL/只)涂于小鼠右耳正反两面,左
耳作对照,1h后处死小鼠,沿耳廓基线剪取两耳,用直径8mm
打孔器分别在双耳的同一部位打下圆耳片,精确称重,其差值
为炎性肿胀度,并计算小鼠耳朵肿胀抑制率。
抑制率(%)=(生理盐水对照组肿胀度—条叶榕组肿胀
度)/生理盐水对照组肿胀度×100%
2.2 角叉菜胶致小鼠足跖肿胀实验[10] 60只18~22g
小鼠实验动物,分组、剂量和给药同2.1项。末次给药lh后,在
小鼠右后足跖皮下注入以1%角叉菜胶(0.02mL/只)致炎,致
炎后次日处死小鼠,剪取小鼠左右后足跖,精确称重,左右足跖
差值为炎性肿胀度,并计算小鼠足跖肿胀抑制率,计算公式同
2.1项。
2.3 小鼠皮下棉球肉芽肿增生实验[11] 60只18~22g
小鼠实验动物,每只小鼠注射0.7%硫喷妥钠(10mL·kg-1)麻
醉后,无菌操作,在其背部切1cm长小口,在小鼠左右腋窝各植
入已灭菌棉球一只(10mg/只),缝合皮肤,次日对植棉小鼠进行
126陕西中医2013年第34卷第5期
分组,分组、剂量和给药同2.1项,连续给药8d,末次给药1h后
脱颈处死小鼠;剖取棉球肉芽肿,剔除脂肪组织,置60℃烘箱烘
至恒重,减去原棉球质量即为肉芽肿质量,计算肉芽肿抑制率。
抑制率(%)=(正常对照组肉芽肿质量—条叶榕组肉芽肿
质量)/正常对照组肉芽肿质量×100%
2.4 醋酸致小鼠扭体的实验方法[9] 60只18~22g实
验小鼠随机分成6组,每组10只,即阳性对照组(阿司匹林溶
液200mg·kg-1),其余分组及剂量同2.1项。连续给药6d,各
组小鼠在末次给药后1h,每只小鼠腹腔注射0.6%(v/v)的醋
酸溶液0.4mL/只。记录注射醋酸后小鼠15min内的扭体次
数,并计算扭体抑制率。
抑制率(%)=(正常对照组扭体次数—条叶榕组扭体次
数)/正常对照组扭体次数×100%
2.5 对小鼠热板痛反应的影响[9] 将实验小鼠置于(55
±0.5)℃的智能热板仪上,测定每只小鼠的痛阈值。痛阈值在
10~15s为合格小鼠。选取痛阈值在10~15s间的小鼠60只,
随机分成6组,分组及给药同2.4项,每组给药前重复测定痛
阈值2次,取均值作为基础痛阈值,连续给药6d,每天1次,第
6天给药后,在分别在第30min、60min、90min时测量小鼠的痛
阈值,计算各组痛阈提高百分率。
痛阈提高百分率(%)=(给药后痛阈值-给药前痛阈值)/
给药前痛阈值×100%
2.6 统计学方法 实验数据以 珚x±s表示,采用单因素方
差分析,给药组与生理盐水对照组比较,条叶榕醇提液高剂量
组与水提液低剂量组比较,组间差异用t检验,所有数据均采
用SPSS13.0软件进行处理。
3 实验结果 3.1条叶榕对二甲苯致小鼠耳壳肿胀的影
响 条叶榕醇提液高剂量组、低剂量组和水提液高剂量组对
二甲苯所致的鼠耳肿胀有抑制作用,抑制率分别为35.96%、
17.21%和26.38%,与生理盐水组比较有显著性差异或非常显
著差异;条叶榕醇提液组对二甲苯所致小鼠耳肿胀的抑制作用
强于水提液组,但是在相同剂量组之间比较没有显著差异。见
表1。
表1 条叶榕对二甲苯致小鼠耳廓
肿胀的影响(珚x±s,n=10)
组 别 剂量(g·kg-1) 肿胀度(mg) 抑制率(%)
生理盐水组 25 20.67±4.91 —
地塞米松组 0.001 10.96±3.37▲ 46.98
条叶榕水提液高剂量组 9 15.22±3.81△ 26.37
条叶榕水提液低剂量组 3 18.54±4.65 10.30
条叶榕醇提液高剂量组 9 13.24±3.45▲ 35.95
条叶榕醇提液低剂量组 3 17.11±4.23 12.22
注:与生理盐水组比较,△P<0.05;▲P<0.01;水提液高剂量组与醇提液
高剂量组比较◇P<0.05(下同)
3.2 条叶榕对角叉菜胶所致足肿胀的影响 条叶榕醇
提液高剂量组、低剂量组和水提液高剂量组对角叉菜胶所致足
跖肿胀有抑制作用,抑制率分别为34.29%、13.98%和23.
34%,与生理盐水组比较有显著性差异或非常显著差异;条叶
榕醇提液高剂量组对角叉菜胶所致足肿胀的抑制作用高于水
提液高剂量组,并有显著差异。见表2。
表2 条叶榕对角叉菜胶致小鼠足跖
肿胀的影响(珚x±s,n=10)
组 别 剂量(g·kg-1) 肿胀度(mg) 抑制率(%)
生理盐水组 25 89.25±15.60 —
地塞米松组 0.001 48.86±9.71▲ 45.25
条叶榕水提液高剂量组 9.0 68.42±12.58◇ 23.34
条叶榕水提液低剂量组 3.0 80.63±14.12 9.66
条叶榕醇提液高剂量组 9.0 58.65±13.90◇▲ 34.29
条叶榕醇提液高剂量组 3.0 76.77±14.35 13.98
3.3 条叶榕对小鼠皮下棉球肉芽肿增生的影响 条叶
榕水提液高剂量组和醇提液高剂量组均抑制皮下棉球所致小
鼠皮下肿胀,其抑制率分别为21.19%和28.73%,与生理盐水
组比较有显著性差异,其它条叶榕组与生理盐水组比较没有显
著差别;相同剂量的醇提液组与水提液组比较没有显著差异。
见表3。
表3 条叶榕对小鼠皮下棉球肉芽肿
增生的影响 (珚x±s,n=10)
组 别
剂量
(g·kg-1)
肉芽肿质量
(mg)
抑制率
(%)
生理盐水组 25 6.23±1.73 —
地塞米松组 0.001 4.16±1.55 33.22
条叶榕水提液高剂量组 9.0 4.91±1.72 21.19
条叶榕水提液低剂量组 3.0 5.30±1.59 14.93
条叶榕醇提液高剂量组 9.0 4.44±1.98△ 28.73
条叶榕醇提液高剂量组 3.0 5.24±1.76 15.89
3.4条叶榕对醋酸致小鼠扭体反应的影响 条叶榕4个
剂量组均能显著减少醋酸所致的小鼠扭体次数,其中水提液高
剂量组、醇提液高剂量组和低剂量组与生理盐水组比较有显著
性差异(P<0.05或P<0.01);醇提液高剂量组镇痛作用大于
水提液高剂量组,且有显著差异。见表4。
表4 条叶榕对醋酸致小鼠扭体反应的
影响(珚x±s,n=10)
组 别
剂量
(g·kg-1)
扭体次数
(次/15min)
抑制率
(%)
生理盐水组 25 41.4±13.2 —
阿司匹林组 0.001 15.2±6.8▲ 63.2
条叶榕水提液高剂量组 9.0 24.8±10.1◇ 40.1
条叶榕水提液低剂量组 3.0 38.1±12.9 7.8
条叶榕醇提液高剂量组 9.0 18.1±9.2▲◇ 56.1
条叶榕醇提液低剂量组 3.0 33.72±11.6 18.5
3.5 条叶榕对小鼠热板痛反应的影响 条叶榕水提液
组合醇提液组均能够能显著提高小鼠热刺激体表的痛阈值,其
中条叶榕水提液高剂量组合和醇提液高剂量组与生理盐水组
比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),表明一定剂量的条
叶榕水提液和醇提液对小鼠具有镇痛作用;条叶榕醇提液组高
于水提液组的镇痛作用,其中90min的条叶榕醇提液高剂量组
与水提液高剂量组比较有显著差异;条叶榕用药组的痛阈值随
时间的延长而提高。见表5。
226 陕西中医2013年第34卷第5期
表5 条叶榕对小鼠热板痛反应时间的影响(珚x±s,n=10)
组 别
剂量
(g·kg-1)
痛阈值(s)
基础痛阈 30min 60min 90min
痛阈值提高率(%)
30min 60min 90min
生理盐水组 25 14.2±5.0 15.8±6.0 17.1±5.7 18.4±6.1 11.5 20.5 29.2
阿司匹林组 0.2 14.4±6.3 24.3±7.4▲ 28.7±7.4▲ 33.7±7.4▲ 66.6 96.2 130.9
条叶榕水提液高剂量组 9 13.8±5.2 18.9±7.0 23.6±6.2▲ 24.1±6.8◇▲ 36.7 71.2 74.9
条叶榕水提液低剂量组 3 14.3±6.7 16.52±6.6 18.0±6.7 18.1±5.3 15.2 25.4 25.9
条叶榕醇提液高剂量组 9 13.9±5.6 20.7±5.5 24.8±7.1▲ 27.7±6.8◇▲ 49.5 78.8 99.4
条叶榕醇提液低剂量组 3 13.7±5.8 17.1±6.2 18.1±5.8 19.5±5.9 25.6 32.7 43.2
4 讨 论 本研究采用3种炎症模型(两种急性致炎模型
与一种慢性致炎模型)和2种镇痛模型(中枢性镇痛模型和外周
性镇痛模型)检测条叶榕的抗炎镇痛效果。条叶榕的水提液和
醇提液对二甲苯所致小鼠耳片肿胀、角叉菜胶所致小鼠足肿胀
以及小鼠皮下棉球肉芽肿增生均有抑制作用,说明条叶榕能够
有效缓解炎症发生过程中的症状;条叶榕水提液和醇提液均能
抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的痛反应,减少小鼠的扭体次数,提
高小鼠热刺激体表的痛阈,延长热板痛反应时间,说明条叶榕可
以分别通过中枢神经和外周神经产生镇痛作用;同剂量条叶榕
醇提液的抗炎镇痛作用高于水提液,与前期研究的黄酮类物质
更易被乙醇溶剂提取有关[12]。条叶榕抗炎镇痛作用可能与榕
属植物含有生物活性物质有关,如黄酮类、萜类、三萜类、甾醇类
和多糖类等成分有关;条叶榕气味芳香,可能与中药芳香化湿,
通畅气机,通则不痛的理论有关。
总之,条叶榕具有镇痛抗炎作用,并且同剂量醇提液比水提
液抗炎镇痛效果强,但对条叶榕抗炎镇痛药效物质基础及作用
机制有待于进一步研究。
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(上接第615页)
伤肝阴,加之情志不遂,肝气郁结,终成其症,故加用滋
水清肝之品,正气生,肝胆湿热才好清。此三例患者均
服用过拉米夫定,病程不同,停用后,肝功能并没有立
即反弹,反弹后症状表现各异并又很快得以恢复,中药
的功效显而易见。
从治疗过程中可以看出,实验室检查的轻重与症
状的轻重并不成正比,而自身症状的轻重往往能够影
响到实验室的检查结果,这进一步说明了坚持整体观
念、辨证施治的重要性,同时也说明了乙肝治疗上用药
的多样性。
在治疗初期2周至3周内,三例患者均表现出自
我症状的减轻,主要是:纳食好转,乏力减轻,患者1腰
膝酸软改善;患者2鼻衄消失;患者3的遗精次数减
少,心烦急躁消除。这些变化都突出说明中药的效果。
上述3个病例,笔者也仅是临床上偶遇,对于单纯
服用拉米夫定的乙肝患者并没有长期跟踪治疗的经
验。笔者在用中药治疗的过程中,初见肝功能的反弹,
及症状的加重,亦甚疑虑,但由于有拉米夫定应用报道
(拉米夫定用药期间或停药后均有肝功反弹的现象发
生)的先例存在,笔者结合自己的实践经验,遵照中医
辨证施治,辨病立方的原则,调整用药,终使这几例患
者有了起色。但以上终究是管中窥豹,其中缺憾,尚需
同仁斟酌切磋。 (收稿2012-10-17;修回2012-12-15)
326陕西中医2013年第34卷第5期