全 文 ：收稿日期:2013-11-05; 修订日期:2014-04-24
基金项目:广西自然科学基金( No． 2010GXNSFA013199) ;
广西壮族自治区教育厅科研项目( No． 200911LX244)
作者简介:李 兵( 1982-) ，男( 汉族) ，广西南宁人，广西中医药大学讲师，
硕士学位，主要从事中药化学成分及质量标准研究工作．
* 通讯作者简介:卢汝梅( 1969-) ，女( 汉族) ，广西南宁人，广西中医药大
学教授，博士学位，主要从事中药、民族药化学成分和质量标准研究工作．
红花夹竹桃寄生中芦丁和广寄生苷含量的
高效液相色谱法测定
李 兵1，张宏建2，谭雯雯1，韦建华1，卢汝梅1*
(1．广西中医药大学，广西 南宁 530001; 2．中国药科大学中药学院，江苏 南京 210038)
摘要:目的 建立 HPLC法测定红花夹竹桃寄生中芦丁和广寄生苷含量的方法。方法 采用 HPLC法，以芦丁和广寄生苷
为对照品，色谱柱为依利特 Hypersil ODS柱( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，以乙腈 － 1%乙酸溶液梯度洗脱为流动相，流速为
1． 0 ml·min －1，检测波长 365 nm，测定红花夹竹桃寄生中芦丁和广寄生苷含量。结果 芦丁、广寄生苷的线性范围均为
8． 24 ～ 329． 6 μg·ml －1，相关系数分别为 0． 999 5，0． 999 6，加样回收率( n = 6) 分别为 101． 76%，103． 47%，ＲSD 分别为
1． 34%、0． 76%，红花夹竹桃寄生中芦丁和广寄生苷的平均含量分别为 0． 32%，0． 11%。结论 该方法准确、重现性好，可
作为红花夹竹桃寄生药材的质量控制标准。
关键词:红花夹竹桃; 桑寄生; 芦丁; 广寄生苷
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 08． 020
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 08-1850-02
HPLC determination of rutin and guajeverin in Scurrula parasitica L． parasitizing on Ne-
rium indicum Mill
LI Bing1，ZHANG Hong-jian2，TAN Wen-wen1，WEI Jian-hua1，LU Ｒu-mei1*
( 1． Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530001，China; 2． College of Parmacy，China
Pharmaceutical University，Nanjing 210038，China)
Abstract: Objective To establish an HPLC method for the determination of the contents of rutin and guajeverin in Nerium indi-
cum Mill．Methods Contents of rutin，guajeverin in Nerium indicum Mill was measured by HPLC a column of Hypersil ODS ( 4．
6mm × 250mm，5μm)〗，with mobile phase consisted of acetonitrile( B) － 1% acetic acid( A) with the gradient elution，flow rate:
1． 0ml·min －1，detection wavelength of 365nm． Ｒesults The calibration curves showed good linearity in the range of 8． 24 ～ 329．
6μg·mL －1 ( rutin，guajeverin) ; correlation coefficients were 0． 9995，0． 9996． The average recoveries ( n = 6 ) were 101． 76%，
103． 47% ; ＲSD were 1． 34%，0． 76% respectively． The average contents( n = 5) were 0． 32% ( rutin) ，0． 11% ( guajeverin) ． Con-
clusion An accurate and reproducible method can be used for the quality control of Scurrula parasitica L． parasitizing on Nerium
indicum Mill．
Key words: Nerium indicum; Mill; Taxillus chinensis ( DC) ; Ｒutin; Guajeverin
中药桑寄生为桑寄生科钝果寄生属植物桑寄生 Taxillus
chinensis(DC．)Danser的干燥带叶茎枝，又名广寄生、桃寄生、寄
生茶，主产于广东、广西、云南、福建等地，具有补肝肾，强筋骨，祛
风湿，安胎元等功效，用于治疗风湿痹痛，腰膝酸软，筋骨无力，崩
漏经多，妊娠漏血，胎动不安等症，现代药理研究表明桑寄生具有
降血压、抗病毒、抗肿瘤、抗菌、镇静、利尿、强心、降血脂等作
用［1，2］。由于桑寄生是多寄主植物，药材来源复杂，其中化学成
分及其含量因寄主不同而有所差异，因此有必要研究寄主对桑寄
生化学成分及其含量的影响。有关桑寄生类药材中化学成分主
要含槲皮素、槲皮苷、芦丁及广寄生苷等黄酮成分［2 ～ 4］。但对红
花夹竹桃寄生的含量测定未见报道，未能建立其质量控制方法，
从而无法保证该药材品质，无法确保临床用药安全。因此本实验
首次采用 HPLC法测定桑寄生类药材红花夹竹桃寄生中芦丁、广
寄生苷的含量，该方法准确、重现性好，可作为红花夹竹桃寄生药
材的质量控制方法。
1 仪器与试药
仪器:日本岛津高效液相色谱仪 LC － 20AT(A/B)二元泵，
SIL － 20A 自动进样器，CBM － 20A /SPD － 20A 检测器;依利特
Hypersil ODS(4． 6mm × 250mm，5μm) ;超声仪(SK2200LHC，上海
科导超声仪器有限公司)。
试药:芦丁、广寄生苷对照品为本实验室自制，其结构
经1HNMＲ、13CNMＲ、MS鉴定，HPLC归一化法测定纯度在 98%以
上;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯;红花夹竹桃寄生药材采
自广西南宁市郊区，经广西中医药大学廖月葵高级实验师鉴定为
桑寄生科植物红花夹竹桃寄生 Nerium indicum Mill。
2 方法
2． 1 色谱条件 色谱柱为依利特 Hypersil ODS(4． 6mm × 250mm，
5μm) ;流动相为乙腈 － 1%乙酸(梯度洗脱:0 ～ 20min，10%乙腈
－ 30%乙腈;20 ～ 40min，30%乙腈) ;检测波长为 365nm;流速1． 0
ml·min －1;柱温 30℃，进样量 20μl。
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 8 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 8
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 混合对照品溶液制备 分别精密称取对照品芦丁10． 30
mg、广寄生苷 10． 30 mg，至 25 ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻
度，即得芦丁(412μg·ml －1)、广寄生苷(412μg·ml －1)混合对照
品储备液。
2． 2． 2 供试品溶液制备 取过 2 号筛药材粗粉约 3g，精密称定，
精密加入甲醇 30 ml，称重，超声提取 9 min，放冷，用甲醇补足损
失的重量，用 0． 45 μm的微孔滤膜滤过，即得。
2． 3 线性关系考察 分别精密量取芦丁、广寄生苷对照品混合液
0． 20，1． 00，2． 00，4． 00，8． 00 ml于 10 ml量瓶中，用甲醇定容至刻
度，进样前用 0． 45μm 滤膜过滤，按“2． 1 色谱条件”项分别测定
峰面积，以峰面积为纵坐标(Y) ，进样量为横坐标(X)进行线性回
归，求得方程为芦丁:Y = 28 701X － 38 920，r = 0． 999 5;广寄生
苷:Y = 19274 X + 2． 4E + 5，r = 0． 9996;结果表明，芦丁、广寄生苷
在线性范围均为 8． 24 ～ 329． 6μg·ml －1内呈现良好的线性关系。
2． 4 精密度试验 取同一混合对照品溶液，一日内连续测定 5
次，测得芦丁、广寄生苷日内精密度(n = 6)ＲSD 分别为 1． 10%，
0． 90%;另取同一混合对照品溶液，连续测定 5 d，每天 1 次，测定
芦丁、广寄生苷日间精密度(n = 6)ＲSD分别为 1． 50%，1． 20%。
2． 5 重复性试验 取过 2 号筛药材粗粉约 3g，精密称定，共 6
份，按“2． 2． 2 供试品溶液制备”项下制备供试液，按“2． 1 色谱条
件”项下测定峰面积，计算芦丁、广寄生苷含量，结果芦丁、广寄
生苷含量 ＲSD 分别为 1． 30%，1． 10%，实验结果表明重复性良
好。
2． 6 稳定性试验 取过 2 号筛药材粗粉约 3g，精密称定，按
“2． 2． 2供试品溶液制备”项下制备供试液，按“2． 1 色谱条件”项
下在放置 0，1，2，4，6，8h 后测定峰面积，计算含量，结果芦丁、广
寄生苷含量的 ＲSD值分别为 0． 30%，0． 70%。表明供试品溶液
在 8h内稳定。
2． 7 加样回收率试验 取已知含量的样品粗粉约 0． 5g ，共 6
份，精密称定，分别精密加入与样品相当的芦丁、广寄生苷 1． 65
mg，0． 55mg，按“2． 2． 2 供试品溶液制备”项下制备供试液，按
“2． 1色谱条件”项下测定，以外标法计算加样回收率。结果芦
丁、广寄生苷平均回收率分别为 101． 76%，103． 47%(n = 6) ;ＲSD
分别为 1． 34%，0． 76%。
2． 8 样品测定 取过 2 号筛药材粗粉约 3g，精密称定，共 5 份，按
“2． 2． 2 供试品溶液制备”项下制备供试液，精密吸取 20μl 注入
高效液相色谱仪，按“2． 1 色谱条件”项下进行含量测定，记录色
谱图(图 1)。结果样品中芦丁、广寄生苷含量(n = 5)分别为
0． 32%，0． 11%;ＲSD分别为 0． 50%，1． 0%。
1．芦丁(rutin) 2．广寄生苷(guajeverin)
图 1 对照品(A)和样品(B)色谱图
3 讨论
黄酮类是桑寄生类药材的主要活性成分，长期以来一直缺少
质量分析方法和质量控制指标。本实验对红花夹竹桃寄生中 2
种主要黄酮类成分进行含量测定，为红花夹竹桃寄生药材的质量
标准提供依据，同时也为含红花夹竹桃寄生的制剂质量分析提供
参考。
实验中采用甲醇来作为提取溶剂，比较了超声提取 30，60，
90，120，150，180 min的提取效果，结果表明芦丁和广寄生苷都在
90min提取完全。故确定供试品超声提取时间为 90 min。比较
了不同比例的乙腈 － 1%乙酸溶液、甲醇 － 1%乙酸溶液流动相等
浓度和梯度洗脱的分离效果。经反复试验采用乙腈 － 1%乙酸
(梯度洗脱)为流动相色谱峰分离效果较好，故确定了流动相。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中国药典，一部［S］． 北京:中国医药科技出版
社，2010:258．
［2］ 《中华本草》编委会，国家中医药管理局．中华本草(上册) ［M］． 上
海:上海科技出版社，1998:321．
［3］ 陈乐生．桑寄生药理研究［J］． 陕西中医，2000，21(11) :520．
［4］ 李良琼，李美蓉，杨智彪，等． 毛叶寄生化学成分研究［J］． 中草药，
1995，26(3) :118．
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