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鸡蛋花离体培养和快速繁殖研究



全 文 :收稿日期:2011-05-25
基金项目:广东省科技厅粤港关键领域重点突破项目资助
(2009A030901011)
作者简介:陈瑜珍,女(1976 -) ,广东雷州人,实验员,主要研究方向
为药用植物组织培养。
* 通讯作者:莫小路,E - mail:moxl@ gdyzy. edu. cn
鸡蛋花离体培养和快速繁殖研究
陈瑜珍,曾庆钱,蔡岳文,赵珍东,莫小路﹡
(广东省中药研究所,广东 广州 510520)
摘要:目的 为获得鸡蛋花快速繁殖无菌苗。方法 以鸡蛋花种子为材料研究不同植物生长调节剂对愈
伤组织形成、腋芽萌发和生根的影响。结果 在 MS培养基内添加 2 mg /L BA和 1 mg /L NAA的对愈伤诱导
的效果最佳;添加 0. 1 mg /L NAA 和 2 mg /L 6 - BA诱导腋芽萌发效果最佳;添加 1 mg /L IBA的 1 /2 MS培养
基为最佳生根培养基,生根率达到 95%。结论 0. 1mg /L NAA 和 2 mg /L 6 - BA对鸡蛋花腋芽萌发有明显促
进作用。
关键词:鸡蛋花;快速繁殖
中图分类号:Q943. 1 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2012)03-0010-03
Study on Rapid Propagation In Vitro of Plumeria Rubra L.
CHEN Yu-zhen,ZENG Qing-qian CAI Yue-wen,ZHAO Zhen-dong,MO Xiao-lu
(Guandong Research Institue of Traditional Chinese Medicine,Guanzhou 510520,China)
Abstract:Objective To establish the rapid propagation system of Plumeria rubra L. Methods Effects of
plant growth regulators on the calli,buds germination and rootage were studied by seedlings of Plumeria rubra L. .
Result The optimal medium for calli was MS medium with 2 mg /L 6 - BA and 1 mg /L NAA,for buds germina-
tion MS medium with 0. 1 mg /L NAA and 2mg /L 6 - BA and for the 95% rootage rate of Plumeria rubra L 1 /2 MS
medium with 1 mg /L IBA. Conclusion The axillary buds germination were increased obviously by MS with 0. 1
mg /L NAA and 2 mg /L 6 - BA.
Key words:Plumeria rubra L.;rapid propagation
鸡蛋花(Plumeria rubra L.) ,是夹竹桃科鸡蛋花
属植物,原产于墨西哥,世界各地都有栽培,国内主
产于福建、广东、广西、云南等地,其干燥花朵为广东
地区常用药材,是广东凉茶“五花茶”的主要原料之
一,有清热解暑、利湿、止咳的功效,用于湿热下痢,
肺热咳嗽等[1,2]。鸡蛋花的花冠白色漏斗状,花冠
中心为黄色,主要含鸡蛋花酸(plumeric acid)、甙类
及挥发油,气味芳香,可提取香精应用于日用化妆品
行业;鸡蛋花树形美丽,花大而芳香,具有较高的观
赏价值,也是南方地区重要的园林绿化树种。目前
鸡蛋花栽培主要依靠扦插繁殖,我们对鸡蛋花进行
离体培养和快速繁殖研究,旨在为鸡蛋花的种植提
供快速繁殖技术。
1 材料和方法
1. 1 材料
鸡蛋花种子,由曾庆钱老师提供,经广东省中药
研究所蔡岳文教授鉴定为鸡蛋花(Plumeria rubra
L.)。
1. 2 方法
1. 2. 1 无菌苗培养 种子去除掉杂质,剥开胚根一
端的外种皮,用 0. 1 %HgCl2 溶液消毒 12 min,用无
菌水冲洗 5 次,用滤纸吸干多余水分,分别接种在
MS和附加 1 mg /L GA3 的 MS 培养基上,26 ℃ ±
2℃,黑暗培养;种子萌发后移至光照 16 h /黑暗 8 h
培养,光照强度 2 500 Lux。
1. 2. 2 愈伤组织诱导培养 选取鸡蛋花无菌苗的
幼嫩叶片,切成 0. 5 mm ×0. 5 mm的小块,置于附加
不同激素的 MS培养基上,26 ℃ ±2℃,黑暗培养。
1. 2. 3 腋芽萌发的诱导 以苗高约 5 cm的鸡蛋花
无菌苗作为外植体,切取 1 ~ 1. 5 cm 带节茎段置于
—01—
现代中药研究与实践 2012 年第 26 卷第 3 期
Chin Med J Res Prac,2012 May,Vol. 26 No. 3
DOI:10.13728/j.1673-6427.2012.03.010
附加不同激素的 MS培养基上进行腋芽诱导培养。
1. 2. 4 生根培养 将萌发的腋芽从基部切下,置于
附加不同激素的 MS 培养基上进行生根培养;在第
六组培养基中修改[3],从各组诱导生根的试验中选
取生长旺盛的无根苗,切取上段约 3 cm(带顶芽) ,
置于附加不同激素的 MS培养基上进行生根培养。
2 结果和分析
2. 1 种子的萌发
表 1 不同激素对鸡蛋花种子萌发的影响
Tab. 1 Effects of plant growth regulators on seed
germination of Plumeria rubra . L
培养基 附加激素 接种种子数量(个)
萌发种子数量
(个,20 天时统计)
萌发率
(%)
MS - 50 2 4
MS 0. 5 mg /L GA3 50 16 32
MS 1 mg /L GA3 50 22 44
MS 2 mg /L GA 50 21 42
种子的萌发试验结果表明:添加 1 mg /L GA3 能
明显促进鸡蛋花种子的萌发,2 周左右就开始萌发,
出芽率达到 44%(表 1)。
2. 2 激素对愈伤组织形成的影响
本试验以 MS 为基本培养基,分别添加不同浓
度的 NAA、6 - BA、2,4 - D,实验结果表明,只添加
BA,鸡蛋花愈伤组织的形成率很低,而与 NAA 组合
则诱导率明显提高,0. 5 ~ 2. 0mg /L 的 BA 和 0. 5 ~
1. 5 mg /L的 NAA的组合都能诱导鸡蛋花愈伤组织
的形成,其中 2. 0 mg /L 的 BA 与 1. 0 mg /L 的 NAA
组合最利于鸡蛋花愈伤组织的形成(表 2,第 Ⅶ
组) ,愈伤组织形成率达到 91%,且愈伤生长旺盛,
呈黄绿色颗粒状;而 2,4 - D 不利于鸡蛋花愈伤组
织的形成。
表 2 不同激素对鸡蛋花愈伤组织形成的影响
Tab. 2 Effects of plant growth regulators on callus induction of Plumeria rubra. L
编号 附加激素(mg /L) 外植体数量(个) 形成愈伤组织的数量(个) 愈伤组织形成率(%) 愈伤组织状态
Ⅰ BA1. 0 45 17 37. 7 少量愈伤褐化
Ⅱ BA0. 5 + NAA0. 5 45 29 64. 4 易褐化,水份多
Ⅲ BA1 + NAA 0. 5 45 32 71. 1 易褐化,米黄色
Ⅳ BA1 + NAA0. 8 45 36 80 易褐化,水份多
Ⅴ BA1 + NAA1 45 39 86. 6 黄绿色
Ⅵ BA1. 5 + NAA0. 5 45 38 84. 4 愈伤有根长出
Ⅶ BA2 + NAA1 45 41 91. 1 黄绿色,颗粒状
Ⅷ BA2 + NAA1. 5 45 35 77. 7 愈伤长根多
Ⅸ BA1. 5 + 2,4 - D0. 5 45 45 0 没有愈伤形成
Ⅹ BA1. 5 + 2,4 - D1. 0 45 11 24. 4 易褐化
Ⅺ BA1. 5 + 2,4 - D1. 5 45 16 35. 5 米黄色
2. 3 不同激素对腋芽萌发的影响
鸡蛋花茎段在添加不同激素的 MS 培养基上的
腋芽萌出结果表明:不同浓度 NAA、6 - BA 的培养
基上均可诱导腋芽萌出,其中,添加 NAA 0. 2 mg /L
+ 6 - BA 2 mg /L的培养基最利于鸡蛋花腋芽萌发,
接种 3 周后萌出腋芽,出芽率可达 95%(表 3)。
表 3 不同激素对鸡蛋花腋芽萌发的影响
Tab. 3 Effects of plant growth regulators on buds germination of Plumeria rubra . L
附加激素(mg /L) 外植体数量(个) 腋芽萌发数量(个) 出芽率(%) 腋芽生长状态
BA1 + NAA0. 1 40 32 80 一般,有极少量形成愈伤
BA1 + NAA0. 2 40 33 82. 5 健壮
BA1 + NAA0. 5 40 30 75 芽短,有愈伤
BA1 + NAA0. 8 40 31 77. 7 芽细小,愈伤化
BA2 + NAA0. 2 40 38 95 芽壮,生长快
2. 4 不同激素对生根培养的影响
带顶芽的无菌苗接到附加不同激素的培养基上
大约 2 周后开始生根,4 周根基本稳定(见表 4) ,各
种激素组合的培养基中,添加 1 mg /L IBA 的 1 /2
MS培养基生根效果最佳。
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现代中药研究与实践 2012 年第 26 卷第 3 期
Chin Med J Res Prac,2012 May,Vol. 26 No. 3
表 4 不同激素对生根培养的影响
Tab. 4 Effects of plant growth regulators on rootage of sterile plantlet of Plumeria rubra. L
培养基 附加激素 mg /L 外植体数量(个) 生根外植体数量(个) 生根率(%) 根生长状态
Ms BA1 + NAA2 40 40 0 不生根,愈伤化
Ms IBA1 40 34 85 根壮
Ms IBA1 + NAA0. 1 40 32 81 根较粗
1 /2Ms NAA1 40 26 65 根较细长
1 /2Ms IBA1 40 38 95 根壮,
B5 IBA1 40 36 89 根一般
B5 IBA1 + BA1 40 30 73 根一般
3 讨论
目前生产上鸡蛋花还是靠扦插繁殖,通过组织
培养获得再生植株的尚未见报道,本研究考察了
NAA、6 - BA、2,4 - D 等几种植物生长调节剂对鸡
蛋花愈伤组织形成的影响,结果表 1mg /L 的 NAA
对鸡蛋花的愈伤组织形成最有利,与 1mg /L 或
2mg /L的 6 - BA配合,愈伤组织的诱导率达到 90%
以上,形成的愈伤组织呈颗粒状,生长良好,但一直
未见分化,尝试了多种培养基,都未能使该愈伤组织
分化出芽,其原因可能与该愈伤组织的特性有关,如
何促进该愈伤组织转化为胚性愈伤组织并进一步分
化形成再生植株,还有待于探索。在快繁技术方面,
本研究通过腋芽诱导成功地建立了鸡蛋花的快速繁
殖体系,在添加 NAA 0. 2 mg /L和 6 - BA 2 mg /L的
MS培养基上,腋芽的萌出率达到 95%,萌出的腋芽
转到添加 1 mg /L IBA 的 1 /2 MS 培养基上,生根率
达到 95%,无菌苗健壮,移栽成活率达到 98%以上。
参考文献
[1] 广东省中药材标准编委会. 广东省中药材标准[M].广州:广
东科技出版社,2004,11,121 - 122.
[2] 广东中药志编委会. 广东中药志(第一卷) [M].广州:广东科
技出版社,1996 ,1,100 - 101.
[3] 朱靖杰,莫玲华,陆升团,等.鸡蛋花组织培养的研究[J].园艺
学报,2005,32 (3) ,540 - 540.
收稿日期:2011-09-05
不同类型玄参主要性状调查研究
肖杰易1* ,申明亮1,韩 凤1,韦中强1,谢贤明1,明孝均2,陈 曌2,吕俊明2
(1.重庆市药物种植研究所,重庆 南川 408335;2.贵州省道真县教育和科学技术局,贵州 道真 563500)
关键词:玄参;类型;经济产量
中图分类号:R931. 2 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2012)03-0012-03
玄参(Scrophularia ningpoensis Hems1.) ,也叫元
参、黑参,为玄参科多年生草本植物,以根入药,是载
入中国药典的常用中药。具有滋阴、降火、生津、解
毒功效,可治疗热病烦渴,发斑,夜寐不宁,自汗盗
汗,吐血,衄血,咽喉肿痛等症。它不但是中药处方
用药还是多种中成药的重要原料。主要栽培于浙
江、重庆、贵州、湖南、四川等地。玄参是大宗药材品
种,近年来重庆市的南川区和贵州省的道真县生产
面积较大,年种植达 10 000 亩以上,是山区农民创
收的主要来源之一。据调查种植的玄参是多个类型
的混合群体,其各类型植株性状、生育期、经济产量
和商品规格参差不一,对正常的田间管理、商品产量
和质量影响较大。但在这些类型中,发现有经济产
量高商品质量好的类型,为了解决生产中存在的问
题,必须从源头做起,找出玄参不同类型的主要区别
点,为筛选良种奠定基础,为此,特开展了本项研究。
1 调查研究区域
本课题于 2009 ~ 2010 年,先后在重庆市南川区
头渡镇和贵州省道真县阳溪镇等区域,玄参种植基
地开展了本项研究工作。
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现代中药研究与实践 2012 年第 26 卷第 3 期
Chin Med J Res Prac,2012 May,Vol. 26 No. 3