全 文 ：刺天茄提取物的抑菌作用研究
李昌灵 ,沈廷　(怀化学院生命科学系,湖南怀化 418008)
摘要　[目的 ]研究刺天茄提取物的抑菌作用 ,为刺天茄的开发利用提供科学依据。 [方法 ]以乙醇、乙酸乙酯、和丙酮为有机溶剂对刺
天茄进行提取 ,将获得的提取物进行抑菌试验。使用药敏纸片法和二倍稀释法测定了刺天茄提取物对粪肠球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄
球菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌 5种细菌的抑菌效果。 [结果]刺天茄 75%乙醇提取物对粪肠球菌、大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌、普通变形
杆菌都具有一定的抑菌效果 ,抑菌圈直径分别为 8.0、7.5、8.0和 10.0mm, 但是对枯草芽孢杆菌几乎无抑制效果;乙酸乙酯提取物和水
提取物对 5种供试菌的抑菌效果一般 , 略高于丙酮提取物 ,抑菌圈直径均小于 7.0 mm。乙醇提取物的 MIC(最低抑菌浓度)值为
0.125 00g/ml。 [结论]刺天茄不同溶剂的提取物对供试菌抑菌效果不同 ,且 75%乙醇提取效果最好;药敏纸片法和二倍稀释法有较好
的相关性。
关键词　刺天茄;抑菌作用;提取物;药敏纸片法;二倍稀释法
中图分类号　S567.1+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)02-00652-02
StudyonBacteriostusisofExtractfromSolanumkhasianumC.B.Clarke
LIChang-lingetal　(DepartmentofLifeScience, HuaihuaUniversity, Huaihua, Hunan418008)
Abstract　[ Objective] ThebacteriostusisofextractfromSolanumkhasianumwasresearchedtoprovidethescientificreferencefordevelop-
mentandutilizationofSolanumkhasianum.[ Method] TheextractsfromSolanumkhasianumwasgotwithethanol, ethylacetateandacetone.
TheantibioticactivitiesofSolanumkhasianumagainstEnterococcusfaecalis, Escherichiacoli, Staphylococcusaureus, Proteusvulgaris, Bacilus
subtilisCohnweretestedbydrugsensitiveslipsmethodandtubedoubledilutionmethod.[ Result] 75%ethanolextractfromSolanumkhasia-
numwasefectivetoEnterococcusfaecalis, E.coli, S.aureus, Proteusvulgaris.Andthebacteriostusisdiameterwas8.0, 7.5, 8.0and10.0
mmrespectively.ButitwasntefectivetoB.subtilis.ExtractswithethylacetateandwaterwerelesseffectivetoEnterococcusfaecalis, Esche-
richiacoli, Staphylococcusaureus, Proteusvulgaris, BacillussubtilisCohn, andtheirbacteriostusisdiameterswereallessthan7.0mm.But
theirefectswerebeterthanacetone.MICvalueofethanolextractfromSolanumkhasianumwas0.125 00g/ml.[ Conclusion] Extractswith
diferentsolventsweredifferentefectivetothetestedstrains, andthe75%ethanolextractwasthebestofal.Thedrugsensitiveslipsmethod
andtubedoubledilutionmethodshowedagoodcorrelation.
Keywords　Solanumkhasianum;Bacteriostusis;Extract;Drugsensitiveslipsmethod;Tubedoubledilutionmethod
基金项目　怀化学院科技处人才引进基金。
作者简介　李昌灵(1973-),男 ,江西抚州人 , 硕士 ,讲师 ,从事微生物
技术方面的研究。
收稿日期　 2008-10-31
　　刺天茄 ,别名天茄子 、刺茄子 、添钱果 、红颠茄 、假茄子
等 ,属于 Solanaceae科茄属 Solanum;为有刺灌木 ,高 0.5 ～
1.6 m,小枝 ,叶背面的叶柄及花序均密布 8 ～ 11 mm分枝长
短不等的星状绒毛;全年开花结果 ,种子淡黄色 ,近盘状 ,直
径约 2 mm[ 1] 。刺天茄常见于海拔 180 ～ 1 700(或 2 800)m的
林下 、路边 、田边荒地 ,在干燥灌木丛中有时成片生长。除云
南东北部外几乎全省均有分布 ,同时在湖南 、四川 、贵州 、广
东 、广西 、福建 、中国台湾也有分布。而国外广泛分布在印
度 、缅甸 、中南半岛 、马来半岛 、菲律宾等地 。
刺天茄的浆果含澳洲茄胺 、谷甾醇 、薯蓣皂甙元 ,其中含
有的澳洲茄胺甙类 、澳洲茄边碱等生物碱为其主要生物活性
成分 [ 2] ;另外 ,刺天茄含有氨基酸 、脂肪酸 、黄酮 、甾体类化合
物等 ,具有抗癌作用 ,其中以甾体类化合物及黄酮化合物为
主 [ 3] 。此外 ,国内对野生植物刺天茄和鸡蛋参的营养成分进
行了分析 ,结果表明 ,刺天茄中含有多种营养成分 ,如丰富的
矿质元素和维生素及 β-胡萝卜素 ,至少含有 17种氨基酸 ,其
中 , 7种为人体必需的氨基酸 [ 4] 。刺天茄全草入药可清肝明
目 、消炎止痛 ,叶和姜汁可止吐 ,果含龙葵碱 ,有毒。不同地
区刺天茄的药用范围也不相同 ,如刺天茄在云南昆明一带常
被用于消炎解毒 、镇静止痛 、风湿跌打疼痛 、神经性头痛 、胃
痛 、牙痛 、乳腺炎 、腮腺炎 [ 1]等疾病的治疗 ,并具有较好的疗
效 。除此之外 ,在我国的其他地方 ,刺天茄也多用于散瘀消
肿 、痈肿疮疖 、慢性骨髓炎 、淋巴结核 、冻疮等方面的治疗 。
但对于刺天茄提取物抗菌作用的研究 ,迄今鲜有报道。为
此 ,笔者研究刺天茄提取物对常见菌种大肠杆菌 、枯草杆菌 、
变形杆菌 、金黄色葡萄球菌及粪肠球菌 5种供试菌的抑制作
用 ,旨在阐明其抗菌特性 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　植物材料。刺天茄:采集于湖南省洪江市雪锋山 ,经
鉴定为茄科多年生草本植物 。
1.1.2　仪器及试剂。仪器:立式压力蒸汽灭菌器(YXQ-LS-
50S1,上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产);摇床(ZH-
WY200B,上海智城分析仪器制造有限公司生产);电热恒温
培养箱(DHP-2000型 ,天津市华北实验有限公司生产);水平
层流净化工作台(苏州洁净技术研究所生产);SHZ-Ⅲ型循环
水真空泵(上海亚荣生化仪器厂生产);旋转蒸发器(RE-
52AA,上海亚荣生化仪器厂生产);超声波提取仪(济宁金百
特生产);FA1104型电子天平;粉碎机;打孔器;游标卡尺等。
化学试剂均为国产分析纯。
1.1.3　菌种。粪肠球菌(Enterococusfaecalis),大肠杆菌
(EscherichiacoliCVCC249),金黄色葡萄球菌(Staphylococcus
aureusCCTCCAB90153),变形杆菌 (ProteusvulgarisCCTCC
91103),枯草芽孢杆菌(BacilussubtilisCohn),均由怀化学院
微生物学实验室提供。
1.1.4　培养基。LB培养基 。
1.2　方法
1.2.1　刺天茄的预处理及提取物的制备 。刺天茄的预处
理:将采集的刺天茄适当清洗 ,除去表面的污渍 ,将茎和叶剪
成约 2mm长度的小段 ,置于干燥箱中 60 ℃烘干保存备用。
责任编辑　姜丽　责任校对　李洪安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(2):652-653, 667
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.02.150
刺天茄水提取物的制备:称取刺天茄茎和叶的干品 20
g,置于烧杯中加蒸馏水浸泡 30 min;煮沸后文火煎 30min,滤
出煎液 ,加蒸馏水再煎 1次 , 2次煎液合并;再浓缩定容至 20
ml,使刺天茄水提取物相当于干物质的含量为 1 000
mg/ml[ 5] ,高压蒸汽灭菌后置于冰箱中保藏备用。
刺天茄有机溶剂提取物的制备:精确称取 10g经过处理
的刺天茄 ,分别放入 3个烧杯中 ,写好标签;按设计量各加入
200 ml70%乙醇 、乙酸乙酯 、丙酮 ,用保鲜膜封口;充分混匀
后放入超声波提取仪中 ,在 37℃、0.5W/cm2条件下浸提 30
min[ 6] 。提取完成后用旋转蒸发仪处理 3种浸泡液 ,待蒸发
完后用乙醇 、乙酸乙酯 、丙酮清洗对应的瓶壁 ,清洗后转移至
10ml容量瓶中 ,定容至 10 ml,使刺天茄有机溶剂提取物相
当于干物质的含量为 1 000 mg/ml,所得液体即为试验所需
的刺天茄提取液 ,高压蒸汽灭菌后置冰箱中保藏备用 。
1.2.2　药敏纸片法。用打孔器将滤纸打成直径为 6 mm的
圆纸片 ,经 121℃高压蒸汽灭菌 30 min,将直径为 6 mm的无
菌滤纸片分别浸入刺天茄 3种提取物中 ,充分浸泡后用无菌
镊子移至无菌试管中 ,再加入 1 ～ 2滴刺天茄提取液 ,放在 37
℃干燥箱中烘干制成饱和的药敏纸片 。取配制成 0.5麦氏
单位的 5种菌悬液各 0.1 ml涂布到直径为 75mmLB固体平
板中 ,将饱和的药敏纸片贴在平板上 ,于 37℃恒温培养箱中
培养 24 h,测定其抑菌圈直径。
1.2.3　二倍稀释法测定药物的最低抑菌浓度(MIC值)。供
试菌种为变形杆菌。在无菌条件下 ,将灭菌试管分成 2大
组 ,每组 7支 。第 1支试管中加入 1 ml二倍浓度的 LB液体
培养基 ,第 2 ～ 5支试管中各加入 1mlLB液体培养基 ,向第 1
支试管中加入 1ml提取液后按 2倍稀释法 ,使各管药液浓度
分别为 0.500 000、0.250 000、0.125 000、0.062 500、0.031 250、
0.015 625g/ml。之后 ,于各管中加入 0.1ml的 106 cfu/ml菌
液 ,第 6支试管中加入 2 mlLB液体培养基不加提取液作为
阳性对照(水),第 7支试管中加入提取液但不加菌悬液作为
阴性对照(青霉素),将培养物置于 37 ℃培养 16 ～ 18 h[ 7] ,
观察抑菌效果 。试验重复 3次。
2　结果与分析
2.1　药敏纸片法测定刺天茄提取物的抑菌效果　从表 1可
以看出 ,刺天茄乙醇提取液对粪肠球菌 、大肠杆菌 、金黄色葡
萄球菌 、变形杆菌都具有一定的抑菌效果 ,抑菌圈直径分别
为 8.0、7.5、8.0和 10.0 mm,但是对枯草芽孢杆菌几乎无抑
制效果 ,其中刺天茄乙醇提取液对变形杆菌的抑制效果最
好 。刺天茄丙酮提取液的抑菌效果最不理想 ,抑菌圈直径均
略大于 6.0 mm。刺天茄乙酸乙酯提取液和水提取液的抑菌
效果一般 ,但是对于 5种供试菌都有一定的抑制效果 ,其中
对金黄色葡萄球菌和变形杆菌的抑制效果略高于刺天茄丙
酮提取物 ,抑菌圈直径均为:7.0 mm>6.5 mm>6.0 mm。 4
种提取物对革兰氏阳性和革兰氏阴性菌都有一定的抑制
作用。
2.2　二倍稀释法测定刺天茄提取物的 MIC　统计结果表
明 ,阳性对照有大量菌落出现 ,阴性对照没有菌落出现;刺天
茄乙醇提取液浓度为 0.500 000、0.250 000、0.125 000g/ml
时没有菌落出现 ,浓度为 0.062500g/ml时有少量菌落出
表 1　刺天茄提取物药敏纸片法的抑菌结果
Table1　BacteriostasisresultofextractfromSolanumkhasianumby
drugsensitiveslipsmethod
试验菌
Testingstrain
抑菌圈直径 Diameterofbacteriostasis∥mm
丙酮
Acetone
乙酸乙酯
Ethylacetate
乙醇
Ethanol
水
Water
粪肠球菌 Enterococcusfaecalis ± ± 8.0 ±
大肠杆菌 Escherichiacoli ± ± 7.5 ±
金黄色葡萄球菌 ± 7 8.0 ±
Staphylococcusaureus
变形杆菌 Proteusvulgaris ± 7 10.0 ±
枯草芽孢杆菌Bacilussubtilis ± ± - ±
Cohn
　注:-表示无抑菌圈;±表示抑菌圈不清晰。
　Note:-standsfornoantibacterialcircle;±standsfornotclearofanti-
bacterialcircle.
现 ,浓度为 0.031 250 g/ml时有较多菌落出现 ,浓度为
0.015 625g/ml时有大量菌落出现。由此可以判断 ,刺天茄
乙醇提取物对变形杆菌的 MIC值为 0.125 000 g/ml。
3　结论与讨论
3.1　结论　通过药敏纸片法 ,笔者从 4种刺天茄提取物和 5
种供试菌中筛选出了刺天茄乙醇提取物和变形杆菌的组合。
结合 2倍稀释法测定刺天茄乙醇提取物对变形杆菌的 MIC
值为 0.125 000 g/ml。
3.2　讨论　药敏纸片法是一种半定量的试验方法 ,具有操
作简便 、工作量小的优点 ,能够达到从多种提取物和细菌中
筛选出最适合抑菌药物的目的 ,而二倍稀释法多用于对药物
MIC值的测定。虽然二倍稀释法较药敏纸片法的工作量大 ,
但是它能够更精确地测出药液的 MIC值 。因此 ,药敏纸片法
可用于抑菌药液的初步筛选 ,筛选出抑菌效果最明显的药物
和菌种的组合。但是 ,药敏纸片法和二倍稀释法也有不足之
处。目前 ,对中草药提取物抑菌效果的检测一般采用试管法
或滤纸片法 ,但中草药提取的药液一般为颜色较深的制剂 ,
用试管法常常会因为制剂颜色深而导致观察不准确 ,用滤纸
片法则会因为中草药扩散慢 、抑菌弱 ,较难得到准确的抑菌
浓度 [ 7] 。
作为植物药主要形式之一的提取物 ,因其部分有效成分
的已知性和可量化性 ,已作为传统中草药的通行形式在全球
被广泛接受和认可。我国分布的 39种茄属植物中有许多未
被研究和利用。为了研究植物的生理活性成分 ,寻找治疗常
见病和多发病的高效药物 ,很有必要对我国茄属植物进行全
面的研究。
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(下转第 667页)
65337卷 2期　　　　　　　　　　　　　　　　　　李昌灵等　刺天茄提取物的抑菌作用研究
表 2　不同地区蚕茧解舒率
Table2　Cocoonreelabilitypercentageatdifferentareas
试验点
Experimental
point
实测值∥%
Measured
value
与平均差∥%
Differencewith
meanvalue
与最高差∥%
Diferencewith
maximumvalue
1 58.9 -9.2 22.7
2 71.2 9.8 6.6
3 63.1 -2.7 17.2
4 59.0 -9.0 22.6
5 67.2 3.6 11.8
6 65.3 0.7 14.3
7 76.2 17.5 0
8 72.7 12.1 4.6
9 54.5 -16.0 28.5
10 60.6 -6.6 20.5
而地区 9只有 54.5%,可能解舒率受很多因素的影响 ,与品
种 、簇中环境和簇具 、采茧和蚕茧收烘 、干茧贮藏和煮茧等因
素有关 。
2.3　地区环境对茧等级的影响　按照桑蚕茧(干茧)分级国
家标准(GB/T9176-1988)规定 ,分级项目:主要项目为解舒丝
长;辅助项目为洁净;补正项目为茧丝纤度 、内霉茧率。由于
解舒丝长作为干茧分级主要指标 ,并且解舒丝长 =茧丝长 ×
解舒率 ,所以在茧丝长一致的情况下 ,解舒率直接影响蚕茧
的质量等级。由于地区 7的蚕茧解舒好 ,解舒丝长就长 ,蚕
茧质量就好 ,评为 3级 ,等级就高;反之 ,地区 9的蚕茧解舒
丝长短 ,基本等级就低 ,还因气候等原因茧生霉 ,内霉茧率高
达 17.50%,下降 3级 ,最终等级为 17级(表 3)。
表 3　综合等级评定结果
Table3　Evaluationresultofsyntheticgrade
试验点
Experimentalpoint
解舒丝长∥m
Non-broken
filamentlength
基本等级∥级
Basicgrade
洁净 Clean
分数∥分
Score
升降级∥级
Upgradinganddowngrading
内霉率Internalmildew
实测值∥%
Measuredvalue
升降级∥级
Upgradinganddowngrading
1 486.9 12 96.3 0 0 0
2 759.6 4 100.0 0 0 0
3 602.5 8 90.0 0 0 0
4 516.8 11 95.0 0 1.25 0
5 523.4 11 98.7 0 0 0
6 552.8 10 96.9 0 3.65 0
7 852.2 3 97.5 0 0 0
8 652.3 7 96.2 0 0 0
9 430.4 14 95.0 0 17.50 -3
10 490.4 12 95.0 0 0 0
3　结论与讨论
3.1　环境对蚕茧解舒的影响　根据国内外大量研究资料分
析 ,一致认为蚕茧解舒最易受吐丝中环境条件的影响 ,变量
最大 ,约占 70%。影响蚕茧解舒的环境条件主要是簇中温
度 、湿度和气流 3个要素 ,其中簇中湿度和气流对解舒的影
响最为明显 ,约占 85%,因此 ,如果在簇室内促使空气流通 ,
及时排出湿气和不良气体 ,是大幅度提高解舒的有效措
施 [ 2] 。地区 7地处高原 ,由于地形的多样性 ,凉山州内各地
区都明显呈现出立体气候 。总的来说 ,地区 7的气候属于亚
热带季风气候区 ,干湿分明 ,气候凉爽;日温差大 ,年温差小 ,
年均气温 16 ～ 17 ℃。由于地区 7的特殊地理环境 ,造就了
该地蚕茧的优良解舒。地区 9属浅丘陵地区 ,气候温和 ,属
亚热带湿润气候 ,冬暖 、夏热 、春早 、无霜期长 ,雨量充沛 。由
于气候湿润 ,湿度较大 ,茧丝塌压 ,胶着面积大 ,离解困难 ,解
舒就差 。
3.2　提高蚕茧质量的技术措施　根据分析 ,理想的上簇环
境应该是:温度 22 ～ 24 ℃,相对湿度 65% ～70%,气流 0.5 ～
1.0m/s[ 2] 。具体生产可以通过以下措施进行调节:调整簇
室温度 ,开启门窗 ,通风排湿(特别是上簇后 24 h到营茧结
束之后这段时间 [ 3] );如果簇室排湿不畅 ,可人为用风扇排
风 ,强制排风时要注意气流不能过大;如果室温过高需降温 ,
可采取在室外挂草帘 ,帘上洒水等措施。
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66737卷 2期　　　　　　　　　　　　　　　　　　吴建梅等　四川蚕茧质量地区差异研究