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响应面法优化朝天椒中辣椒碱类物质的提取工艺



全 文 :响应面法优化朝天椒中辣椒碱类物质的提取工艺
王莹1,王华2,张龙1,翟国倩1,高瑞1,鲁圆圆1
(1.江苏农牧科技职业学院 动物药学院,江苏 泰州 225300;
2.南京理工大学泰州科技学院 化工学院,江苏 泰州 225300)
摘要:为优化朝天椒中辣椒碱类化合物的提取工艺,以辣椒碱提取率为指标,在单因素实验的基础上,以
提取温度、乙醇浓度和碳酸钠浓度为自变量,根据Box-Behnken中心组合方法设计实验,进行响应面分
析,得到的优化工艺条件为:提取时间3h,料液比1∶15,提取温度70℃,乙醇浓度75%,Na2CO3 浓度
4%,在此条件下,辣椒碱提取率达87.69%,与响应面模型预测值基本吻合。
关键词:辣椒碱;朝天椒;乙醇;响应曲面法
中图分类号:TS201.2   文献标志码:A    doi:10.3969/j.issn.1000-9973.2015.03.010
文章编号:1000-9973(2015)03-0037-05
Optimization of Extraction Technology of Capsaicin from Capsicum
frutescens var.by Response Surface Methodology
WANG Ying1,WANG Hua2,ZHANG Long1,ZHAI Guo-qian1,GAO Rui 1,LU Yuan-yuan1
(1.School of Animal Pharmacy,Jiangsu Animal Husbandry and Veterinary Colege,
Taizhou 225300,China;2.School of Chemical Engineering,Colege of Taizhou Institute
of Technology,Nanjing University of Science and Technology,Taizhou 225300,China)
Abstract:The extraction technology of capsaicin from Capsicum frutescens var.is studied in this
paper.According to the single-factor experiment,three levels of the factors(extraction temperature,
ethanol concentration and Na2CO3concentration)are selected for the central composite design to
establish a quadric regression equation for describing the yield of capsaicin.By response surface
analysis,the optimum extraction conditions are obtained as folows:extraction time of 3h,extraction
temperature of 70 ℃,material-liquid ratio of 1∶15,ethanol concentration of 75% and Na2CO3
concentration of 4%,the practical yield of capsaicin is 87.69%,which basicaly agrees wel with the
predictive value by response surface model.
Key words:capsaicin;Capsicum frutescens var.;ethanol;response surface methodology
  辣椒[1]原产于墨西哥,明朝末年传入我国。辣椒
的果实多具有较强的辛辣味,能增进食欲,因而被用作
调味品。1876年,Thresh[2]分离出辣椒果实中的辣味
成分,并命名为辣椒碱。1968年,Bennett等[3]研究的
结果表明,辣椒碱是由十多种辣椒碱同系物组成,称为
辣椒碱类物质。随着研究的不断深入,人们发现辣椒
碱类物质还具有镇痛、抗菌和抗肿瘤等作用,广泛应用
于食品、医药、农业和军事等领域[4]。我国的辣椒种植
面积及产量均居世界第一,产品以食品加工为主,而对
高附加值综合深加工制品如辣椒色素、辣椒籽油、辣椒
碱等生产较少[5,6]。因此以辣椒为原料,选择合适的
工艺途径,提取其中的辣椒碱类化合物是非常有意义
的。本研究采用乙醇作为提取剂,在单因素试验的基
础上,通过响应曲面法优化了辣椒碱提取的工艺条件。
收稿日期:2014-11-06
基金项目:江苏省大学生实践创新训练计划(201312806008Y)
作者简介:王莹(1983-),女,讲师,硕士,主要从事药物分析。
—73—
第40卷 第3期
2015年3月
               中 国 调 味 品
China Condiment 基础研究  
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
朝天椒 武汉市荣发调味食品有限公司;香兰素
标准品 中检所-100093;其它试剂均为市售分析纯。
XF13-200微型高速粉粹机 湖南吉首市中诚制
药机械有限公司;HH-1数显恒温水浴锅,JJ-1增力电
动搅拌器,SHA-B双功能水浴恒温振荡器 金坛市杰
瑞尔电器有限公司;722N可见分光光度计 上海精密
科学仪器有限公司;TE124S电子天平 赛多利斯科
学仪器有限公司。
1.2 试验方法
刘录等[7]研究表明辣椒的辣味越强,辣椒碱类物
质含量越高,故本课题选择当地市场销售的辣味最强
的朝天椒为对象,进行辣椒碱类物质的提取工艺研究。
1.2.1 香兰素标准曲线的绘制
参照相关文献,以香兰素代替辣椒碱为标准品,采
用钼蓝比色法检测辣椒碱的含量[8-10]。
称取香兰素0.1250g,用0.1mol/L NaOH 溶
解,并定容至250mL。此液1mL约等于含1000μg
辣椒碱。分别取上述溶液2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,
5.0mL,用0.1mol/L NaOH定容至250mL容量瓶
中,其中辣椒碱浓度分别相当于10,12,14,16,18,
20μg/mL。分别取上述溶液1mL至10mL容量瓶
中,加1mL钨酸钠磷钼酸显色剂,用饱和碳酸钠溶液
定容至10mL,振荡后静置30min,在760nm处测定
吸光度A。以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标
准曲线,并通过线性回归得到标准方程,实验结果见
图1。
y = 0.013x + 0.037
R2 = 0.998
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
A 7
60
香兰素浓度(μg/mL)
8 10 12 14 16 18 20 22
图1 辣椒碱标准样液测定曲线
Fig.1Standard curve of capsaicin
1.2.2 辣椒碱类化合物的提取
将朝天椒烘干后,用微型高速粉碎机粉碎。称
取1g的朝天椒粉,用乙醇溶液浸提,滤去不溶物,
浓缩滤液,得辣椒碱类化合物的粗提物。将粗提物
用少 量 0.1 mol/L NaOH 溶 液 溶 解 后,转 移 至
50mL容量瓶中,用0.1mol/L NaOH定容,得到待
测原液。取待测原液1mL于10mL容量瓶中,用
0.1mol/L NaOH溶液定容至10mL。取稀释后的
待测液 1 mL,按照步骤配制加入显色 剂,并 在
760nm下测定其吸光度,通过香兰素标准曲线进行
分析计算,从而得出待测原液(提取液)中辣椒碱类
化合物的质量。
m=(A760-0.038)/0.0132×1.065×10×50。
式中:m为辣椒碱待测原液(提取液)中辣椒碱类
化合物的质量,μg;A760为稀释后的辣椒碱溶液在
760nm下的吸光度;1.065是香兰素对辣椒碱的等量
系数;10为稀释倍数;50为辣椒碱待测原液体积,mL。
1.2.3 辣椒碱类化合物的提取率计算
  称取1g干朝天椒粉3份,分别用乙醇溶液反复
提取,直至提取液中经分光光度法测量不到辣椒碱的
存在,浓缩提取液后按1.2.2方法测算出辣椒碱类化
合物的含量,经计算,1g干朝天椒粉中辣椒碱类化合
物的平均含量为9.15mg。
提取率(%)= m9.15×1000×100%

式中:m为辣椒碱待测原液(提取液)中辣椒碱类
化合物的质量,μg。
2 结果与讨论
2.1 单因素试验
2.1.1 时间对辣椒碱提取率的影响
称取1g干朝天椒粉5份,加入15mL 70%的乙
醇溶液,60℃,分别提取1,2,3,4,5h。滤去不溶物,
浓缩滤液,浓缩液用0.1mol/L NaOH溶解并定容至
50mL,再用上述方法测定吸光度并计算提取率,实验
结果见图2。
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基础研究  第40卷 第3期
2015年3月
               中 国 调 味 品
China Condiment
85
80
75
70
65



( %

提取时间(h)
1 2 3 4 5
图2 时间对辣椒碱提取率的影响
Fig.2Influence of extracting time on capsaicin extraction rate
  辣椒碱提取时间越长,提取率越高,3h后上升趋
势逐渐趋于平缓。这是因为随着提取时间的增加,朝
天椒中的辣椒碱已经基本溶出,溶液中的辣椒碱浓度
已远高于辣椒细胞中的浓度,浓度梯度的扩散动力微
弱。为了节约时间,减少成本,后续实验中提取时间均
为3h。
2.1.2 温度对辣椒碱提取率的影响
称取1g干朝天椒粉,分别加入15mL 70%的乙
醇溶液,在40,50,60,70,80℃提取3h。滤去不溶物,
浓缩滤液,浓缩液用0.1mol/L NaOH 溶液溶解后,
定容至50mL,再用上述方法测定吸光度并计算提取
率,实验结果见图3。
85
80
75
70
65



( %

提取温度(℃)
40 50 60 70 80
图3 温度对辣椒碱提取率的影响
Fig.3Influence of extracting temperature on
capsaicin extraction rate
  由图3可知,随着温度的升高,辣椒碱提取率迅速
上升,温度在60~70℃时,提取效果比较好。随着温
度的持续升高,辣椒碱产量反而有所降低,这主要是因
为80℃已达乙醇水溶液的沸点,乙醇挥发加快,从而
影响辣椒碱的提取。
2.1.3 乙醇浓度对辣椒碱提取率的影响
称取1g干朝天椒粉,分别加入15mL含量为
50%,60%,70%,80%,90%的乙醇溶液,60℃提取
3h。滤去不溶物,浓缩滤液,浓缩液用0.1mol/L
NaOH溶液溶解后,定容至50mL,再用上述方法测定
吸光度并计算提取率,实验结果见图4。
85
80
75
70
65
60



( %

乙醇浓度(%)
40 50 60 70 80 90 100
图4 乙醇浓度对辣椒碱提取率的影响
Fig.4Influence of the concentration of ethanol on
capsaicin extraction rate
  由图4可知,随着乙醇浓度的增大,辣椒碱的提取
率逐渐升高,乙醇浓度为70%时,辣椒碱的提取率达
到最大。随着乙醇浓度的提高,辣椒碱的提取率反而
降低,原因是高浓度的乙醇溶液有强烈的吸水作用,影
响了细胞的溶胀,抑制辣椒碱类物质的释放[11],此外,
高浓度的乙醇溶液能够导致大量的辣椒红素被同时提
取出来,干扰了辣椒碱的提取[12]。
2.1.4 料液比对辣椒碱提取率的影响
称取1g干朝天椒粉5份,分别加入5,10,15,20,
25mL 70%的乙醇溶液,60℃提取3h。滤去不溶物,
浓缩滤液,浓缩液用0.1mol/L NaOH 溶液溶解后,
定容至50mL,再用上述方法测定吸光度并计算提取
率,实验结果见图5。
85
80
75
70



( %

料液比
1∶5 1∶10 1∶15 1∶20 1∶25
图5 料液比对辣椒碱提取率的影响
Fig.5Influence of solid-liquid ratio on capsaicin extraction rate
  由图5可知,随着提取溶剂用量的增加,辣椒碱产
量随之增加。在料液比达到1∶15后辣椒碱提取率基
本稳定。过多溶剂用量带来成本的增加以及回收的困
难,所以后续辣椒碱的提取选用料液比为1∶15。
2.1.5 Na2CO3 浓度对辣椒碱提取率的影响
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               中 国 调 味 品
China Condiment 基础研究  
称取1g干朝天椒粉,分别加入含0,2%,4%,
6%,8% Na2CO3 的15mL 70%乙醇溶液,60℃提取
3h。滤去不溶物,浓缩滤液,浓缩液用0.1mol/L
NaOH溶液溶解后,定容至50mL,再用上述方法测定
吸光度并计算提取率,实验结果见图6。
90
85
80
75



( %

0 2 4 6 8 10
Na2CO3浓度(%)
图6 Na2CO3 浓度对辣椒碱提取率的影响
Fig.6Influence of the concentration of Na2CO3
on capsaicin extraction rate
  由图6可知,含有Na2CO3 的乙醇溶液,对于辣椒
碱的提取有一定的帮助,随着Na2CO3 浓度的升高,辣
椒碱类物质的提取率也在不断变大,原因是辣椒碱含
酚羟基,呈弱酸性,在碱性条件下则有利于辣椒碱的溶
出[13]。
2.2 辣椒碱提取的响应面优化实验
2.2.1 辣椒碱提取的数学模型建立
综合单因素实验结果,确定朝天椒中辣椒碱类物
质的提取时间为3h,料液比为1∶15。选取提取温度
(A)、乙醇浓度(B)和 Na2CO3 浓度(C)三个对辣椒碱
提取率影响显著的因素,以辣椒碱提取率为响应值
(Y),采用Box-Behnken试验设计法对辣椒碱提取工
艺进行进一步优化。分析因素及水平编码表见表1,
试验方案及结果见表2。
表1 Box-Behnken中心组合设计的因素水平编码表
Table 1Factors and levels of response surface experiment
因素 代码
编码水平
-1  0  1
提取温度(℃) A  60  65  70
乙醇浓度(%) B  60  70  80
Na2CO3浓度(%) C  0  2  4
表2 Box-Behnken试验方案与结果
Table 2Results of response surface experiment
试验号 A  B  C 辣椒碱提取率(%)
1 -1  0 -1  81.08
2 -1  0  1  86.30
3 -1  1  0  85.50
4  1 -1  0  78.67
5  0  1 -1  81.48
6  0  0  0  85.10
7  1  1  0  85.90
8  0  0  0  84.70
9  0  0  0  84.29
10 -1 -1  0  77.07
11  0 -1 -1  76.27
12  1  0  1  87.10
13  0 -1  1  81.89
14  0  0  0  85.10
15  0  0  0  85.50
16  0  1  1  87.10
17  1  0 -1  82.29
  根据表2的实验结果,通过Design-Expert 8.0.6
软件拟合得到影响辣椒碱提取率的回归方程:提取率
=84.94+0.50A+3.26B+2.66C-0.30AB-
0.10AC-0.32A2-2.83B2-0.42C2。
表3 回归方程方差分析表
Table 3Analysis results of regression and variance
方差来源 平方和 自由度 均方 F值 P值 显著性
模型 180.17  9  20.02  31.42 <0.0001 **
A提取温度 2.01  1  2.01  3.15  0.119
B乙醇浓度 85.02  1  85.02  133.44 <0.0001 **
C碳酸钠浓度 56.55  1  56.55  88.76 <0.0001 **
AB  0.36  1  0.36  0.57  0.4768
AC  0.042  1  0.042  0.066  0.8047
BC  5.684E-14  1  5.684E-14  8.921E-14  1
A2  0.44  1  0.44  0.69  0.4341
B2  33.73  1  33.73  52.93  0.0002 **
C2  0.75  1  0.75  1.18  0.3131
残差 4.46  7  0.64
失拟项 3.62  3  1.21  5.71  0.0629
纯误差 0.84  4  0.21
总误差 184.63  16
  注:**(P<0.01),为高度显著。
实验结果拟和的模型方差分析见表3,二次模型
中回归系数的显著性检验表明,因素B,C和B2 对辣
椒碱的提取率影响高度显著,回归模型的相关系数
R2=180.17/184.63=97.58%,模型亦是高度显著
的,表明该回归方程可以较好地描述各因素与响应值
(提取率)之间的真实关系,可用来进行响应值的预测。
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基础研究  第40卷 第3期
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China Condiment
2.2.2 提取率的响应曲面分析
90
88
86
84
82
80
78
76



( %

60.00
65.00
70.00
75.00
80.00
60.00
70.00
68.00
66.00
64.00
62.00
B:乙醇浓度(%) A:提取温度(℃)
碳酸钠浓度:2%
(a)
90
88
86
84
82
80
78
76



( %

0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
60.00
70.00
68.00
66.00
64.00
62.00C:碳酸钠浓度(%) A:提取温度(℃)
乙醇浓度:70%
(b)
90
88
86
84
82
80
78
76



( %

0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
60.00
80.00
75.00
70.00
65.00C:碳酸钠浓度(%) B:乙醇浓度(%)
提取温度:65 ℃
(c)
图7 不同因素组合影响辣椒碱提取率的曲面图
Fig.7The response surface plot of different combinations
of factors affecting the extraction rate of capsaicin
  由图7可知,3个响应曲面图均为开口向下的凸形曲
面,响应值Y随着每个因素的改变,其变化的趋势也不
同,但是从曲面来分析,比较3个不同的因素对响应值Y
的影响,乙醇浓度对实验结果的影响最大,表现为曲面最
陡,碳酸钠浓度的影响次之,提取温度的影响最小。
经Design-Expert 8.0.6软件分析得出的最佳理论
提取方案为:提取温度70℃,乙醇体积分数75.22%,
Na2CO3 浓度4%,预测辣椒碱提取率88.02%。
2.2.3 模型验证
考虑到实验操作的可控性,对上述最优实验条件进
行适当的修正:提取温度为70℃,乙醇体积分数为75%,
Na2CO3浓度为4%,进行3组平行实验,其实际测得的辣
椒碱平均提取率为Y=87.69%,与预测值Y=88.02%较
为接近,验证了响应面法回归模型的合理性。
3 结论
本研究通过Design Expert软件,将响应面分析
法应用到辣椒碱类化合物的提取工艺上。
优化后的辣椒碱提取工艺为:提取时间3h,料液比
1∶15,提取温度70℃,乙醇体积分数7.5%,Na2CO3 浓
度4%,在此条件下,辣椒碱提取率达87.69%。
参考文献:
[1]张德纯.辣椒[J].中国蔬菜,2007(9):44.
[2]Thresh I C.Capsaicin[J].Analyst,1876(1):149.
[3]Bennett D J,Kirby G W.Constitution and biosynthesis of
capsaicin[J].J.Chem.Soc.(C),1968(1):442-446.
[4]刘菲菲,王兵,曹建新.辣椒碱应用研究进展[J].食品工业
科技,2012,33(16):368-371.
[5]马艳青.我国辣椒产业形势分析[J].辣椒杂志,2011(1):1-5.
[6]王继榜.我国辣椒产业现状及发展趋势综述[J].安徽农学
通报,2013(19):64,78.
[7]刘录,陈海云,刘菲菲,等.HPLC法测定云南省不同辣椒品
种中辣椒碱及二氢辣椒碱的含量[J].食品工业科技,2013
(5):299-303.
[8]GB 10465-1989,辣椒干[S].
[9]杨玉珍.香兰素-亚硝酸钠比色法对辣椒素的测定[J].分析
试验室,1994(3):46-48.
[10]朱妞,訾荣禄.分光光度法测定辣椒碱含量的研究[J].中
国调味品,2013,38(11):70-71,76.
[11]王莹,王华,王妲妲,等.花生壳中总黄酮提取工艺的研
究[J].江苏农业科学,2013(2):245-247.
[12]赵宁.从干红辣椒中提取辣椒红素的研究[D].北京:北京
化工大学,2004.
[13]赵爱云,滕大为,杜桂彩,等.辣椒精中辣椒碱的提取工
艺[J].食品与发酵工业,2002,28(7):82-83.
—14—
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China Condiment 基础研究