全 文 ：颠茄流浸膏真伪鉴别及含量测定方法研究
*
黄伟1，张文婷2＊＊，赵维良2，嵇思思1
(1．浙江中医药大学，杭州 310053;2．浙江省食品药品检验所，杭州 310004)
摘要 目的:对颠茄流浸膏进行定性定量研究，鉴别真伪，提高颠茄流浸膏的质量标准。方法:运用薄层色谱法对颠茄流浸膏
进行定性分析;采用高效液相色谱法测定硫酸天仙子胺的含量，色谱柱为 Shim － pack VP － ODS(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)柱，
流动相为 0. 004%磷酸溶液(含 0. 25%十二烷基硫酸钠)－乙腈(60∶ 40) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 210 nm，柱温 30 ℃。
结果:薄层色谱方法能有效识别非法添加硫酸阿托品，鉴别特征明显，专属性强;硫酸天仙子胺进样量在 0. 2888 ～ 16. 50 μg范
围内线性良好(r = 1. 000) ，平均回收率为 103. 8%(RSD = 1. 6%，n = 6)。结论:本方法专属性强、灵敏度高、操作简便，对 30 余
批不同生产企业颠茄流浸膏进行鉴别和含量测定，结果有 6 批次样品检出非法添加硫酸阿托品，该方法可为颠茄流浸膏的质
量控制提供依据。
关键词:颠茄流浸膏;硫酸天仙子胺;硫酸阿托品;薄层色谱;高效液相色谱;标准提高
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2012)01 － 0151 － 04
Study on identification and content determination of
Extractum Belladonnae Liquidum*
HUANG Wei1，ZHANG Wen － ting2＊＊，ZHAO Wei － liang2，JI Si － si1
(1． College of Pharmacy，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，China;2． Zhejiang Provincial Institute
for Food and Drug Control ，Hangzhou 310004，China)
Abstract Objective:To establish qualitative and quantitative methods for the quality evaluation of Extractum Bel-
ladonnae Liquidum． Methods:Extractum Belladonnae Liquidum was identified with TLC method． The separation
and determination of hyoscyamine sulfate were obtained by RP － HPLC，with Shim － pack VP － ODS column(4. 6
mm ×250 mm，5 μm)as analytical column and 0. 004% phosphoric acid solution(containing 0. 25% dodecyl sul-
fonate sodium salt)－ acetonitrile(60∶ 40)as the mobile phase． The flow rate was 1. 0 mL·min －1 at 30 ℃，and the
detection wavelength was at 210 nm． Results:The identification of TLC was characteristic and specific to figure out
atropine sulfate which was illegally added into Extractum Belladonnae Liquidum． Calibration curve of hyoscyamine
sulfate showed good linear regression(r = 1. 000)within the test ranges of 0. 2888 － 16. 50 μg;Average recovery was
103. 8%(RSD =1. 6%，n = 6)． Conclusion:The methods were proved to be sensitive，reliable and useful by ana-
lyzing thirty different samples of Extractum Belladonnae Liquidum． Atropine sulfate was detected in six samples．
These methods have been successfully applied to evaluate the quality of Extractum Belladonnae Liquidum．
Key words:Extractum Belladonnae Liquidum;hyoscyamine sulfate;atropine sulfate;TLC;HPLC;standard impove-
ment
颠茄流浸膏是我国较广泛使用的植物中间体，
具有解除平滑肌痉挛，抑制腺体分泌等功效;临床上
主要用于胃酸十二指肠溃疡，胃肠道、肾、胆绞痛等。
其原药材颠茄草为茄科植物颠茄 Atropa belladonna
L．的全草，原产欧洲［1］，20 世纪传入中国。目前山
东是我国最大的颠茄草生产基地。颠茄流浸膏主要
含天仙子胺(hyoscyamine)、东莨菪碱(scopolamine)
等莨菪类生物碱成分。天仙子胺又称莨菪碱，其旋
光性呈左旋，生物碱的生理活性与其旋光性密切相
关，通常左旋体的生理活性比右旋体强，l －天仙子
—151—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(1)
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＊＊
十一五国家科技支撑计划项目(2009ZX090308 － 004)
通讯作者 Tel:(0571)86459425;E － mail:leozhwt@ 163． com
胺的散瞳作用比 d －天仙子胺大 100 倍［2］，且颠茄
流浸膏药效为其中多种莨菪烷类生物碱协同作用结
果。中国药典 2010 年版颠茄流浸膏质量标准中
TLC鉴别的指标成分为硫酸阿托品(atropine sul-
fate) ，阿托品为天仙子胺的外消旋体，一般为化学合
成品，或是在富含莨菪碱植物中提取而后消旋制得，
因此颠茄流浸膏以硫酸阿托品作为 TLC 鉴别的指
标成分不甚合理。另外，硫酸阿托品与硫酸天仙子
胺在 TLC中的比移值与在 HPLC 中保留时间均相
同，目前国内对颠茄流浸膏定量测定的报道仅限于
用 RP － HPLC对硫酸阿托品(所有测定均以硫酸阿
托品计)等进行定量测定［1，3 ～ 7］，国外文献报道可用
以手性为基础的高效液相色谱法［8］、核磁共振
法［9］加以鉴别，但检测成本高，加上硫酸阿托品成
本低廉，使得在颠茄流浸膏非法添加硫酸阿托品的
现象较为广泛。因此，建立能区分阿托品与天仙子
胺的分析方法就显得十分重要。基于此，本文建立
了特异性的阿托品与天仙子胺的鉴别方法，并建立
硫酸天仙子胺的高效液相色谱含量测定方法，从而
为评价颠茄流浸膏质量提供技术依据。
1 仪器与试药
硅胶 G 预制板(青岛海洋化工厂) ，双槽展开
缸，薄层色谱仪(瑞士卡玛公司 ATS4 型全自动点样
仪) ，Agilent 1100 系列高效液相色谱仪(G1322A 脱
气机，G1311A四元泵，G1313A自动进样仪，G1316A
柱温箱，G1314A 紫外检测器，Chemstation 色谱工作
站) ，TU － 1901 型紫外 －可见分光光度计(北京普
析通用公司) ;甲醇为色谱纯(德国 Merck 公司) ，水
为注射用水，其他试剂均为分析纯。
对照品硫酸阿托品(批号 100040 － 200510)购
自中国食品药品检定研究院，硫酸天仙子胺购自美
国药典委员会(USP) ，颠茄流浸膏为 6 家企业提供
的 30 批样品，其中 2 号、3 号、24 号、25 号、26 号为
颠茄流浸膏生产过程中间体。
2 实验方法
2. 1 定性鉴别 取颠茄流浸膏 0. 6 mL 于分液漏
斗中，加水 20 mL、浓氨试液 2 mL，用乙醚振摇提取
2 次，每次 20 mL，合并乙醚液，水浴蒸干，残渣加
0. 5 mL甲醇使溶解，即得供试品溶液。另取对照品
硫酸天仙子胺、硫酸阿托品适量，分别加甲醇制成每
1 mL均含 4. 5 mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取
上述 2 种溶液各 20 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层
板上，以浓氨溶液 －水 －丙酮(3∶ 7 ∶ 90)为展开剂，
展开，展距 8 cm，取出，晾干，置 105 ℃干燥 5 min，
放冷，喷以稀碘化铋钾试液至斑点清晰。样品色谱
中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑
点，见图 1 － A。再喷以亚硝酸钠试液，放置 15 min。
样品色谱中，在与天仙子胺对照品色谱相应位置上
斑点颜色由橙色变为红棕色，出现灰蓝色则添加硫
酸阿托品，样品 5 号、6 号、9 号检测到硫酸阿托品，
见图 1 － B。
图 1 颠茄流浸膏的薄层色谱图
Fig 1 TLC chromatograms of Extractum Belladonnae Liquidum
S1:硫酸天仙子胺对照品(reference substance of hyoscyamine sulfate)
S2:硫酸阿托品对照品(reference substance of atropine sulfate)
1 ～ 10．样品(sample No． 1 to 10)
2. 2 含量测定
2. 2. 1 色谱条件 采用 Shim － pack VP － ODS
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，以 0. 004%磷酸
溶液(含 0. 25%十二烷基磺酸钠)－乙腈(60∶ 40)为
流动相，流速 1. 0 mL·mi －1，检测波长 210 nm，柱温
30 ℃。
2. 2. 2 对照品溶液 精密称取硫酸天仙子胺对照
品适量，加 50%甲醇制成每 1 mL 含硫酸天仙子胺
30 μg的溶液，摇匀，即得。
2. 2. 3 供试品溶液 精密量取样品 1 mL，置 25
mL量瓶中，加 50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2. 2. 4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液Ⅰ
(0. 2888 mg·mL －1)1，2，4，8，12，16，24 μL 及对照
品溶液Ⅱ(4. 216 mg·mL －1)1，2，4 μL，按上述色谱
条件分别进样测定。以对照品溶液进样量(X)为横
—251— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(1)
坐标，峰面积值(Y)为纵坐标，得回归方程为:
Y = 1. 183 × 103X + 135. 6 r = 1. 000
线性范围为 0. 2888 ～ 16. 50 μg。
2. 2. 5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 10
μL，在上述色谱条件下连续进样 6 次，测得硫酸天
仙子胺色谱峰峰面积的 RSD为 0. 2%，精密度良好。
2. 2. 6 重复性试验 取同一样品(23 号样品)6
份，按“2. 2. 3”项下方法制备供试品溶液，在上述色
谱条件下进样 10 μL，测得硫酸天仙子胺含量平均
值为 7. 562 mg·g －1，RSD为 0. 72%，重复性良好。
2. 2. 7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10
μL，在上述色谱条件下，分别于 0，1，4，18，25 h进样
测定，测得硫酸天仙子胺色谱峰峰面积的 RSD 为
0. 88%，表明供试品溶液在 25 h内稳定。
2. 2. 8 加样回收试验 取已知含量的颠茄流浸膏
(23 号样品)0. 4 mL共 6 份，精密称定，分别按已知
含有量的 100%加入 0. 288 μg·mL －1硫酸天仙子胺
对照品溶液 10 mL，按“2. 2. 3”项下方法制备供试溶
液，在上述色谱条件下进样 10 μL，测得硫酸天仙子
胺平均回收率(n = 6)为 103. 8%，RSD为 1. 6%。
2. 2. 9 样品测定 分别精密吸取“2. 2. 2”项下的
对照品溶液与“2. 2. 3”项下的供试品溶液各 10 μL，
注入液相色谱仪，测定。色谱图见图 2，结果见表 1。
图 2 对照品(A)、23 号样品(B)高效液相色谱图
Fig 2 HPLC chromatograms of reference substance(A) ，and sample No．
23(B)
1．硫酸天仙子胺(hyoscyamine sulfate)
表 1 颠茄流浸膏定性定量分析结果
Tab 1 The result of qualitative and quantitative determination of Extractum Belladonnae Liquidum
编号(No)
含量
(content)/mg·mL －1
硫酸阿托品检查中呈阳性
(atropine sulfate detection
presented positive results)
编号
(No)
含量
(content)/mg·mL －1
硫酸阿托品检查中呈阳性
(atropine sulfate detection
presented positive results)
1 6. 33 16 7. 55
2 17. 28 17 25. 53
3 17. 41 18 7. 08
4 7. 42 19 8. 51 +
5 8. 85 + 20 8. 63 +
6 30. 47 + 21 7. 64
7 18. 6 22 7. 52
8 17. 75 23 7. 56
9 8. 64 + 24 21. 23
10 6. 25 25 21. 87
11 9. 16 26 21. 91
12 8. 26 27 7. 44
13 8. 21 28 7. 93
14 9. 68 + 29 7. 42
15 7. 31 30 0. 92
3 讨论
3. 1 薄层色谱条件的选择 分别考察了不同的展
开系统:乙酸乙酯 －甲醇 －浓氨、浓氨溶液 －水 －丙
酮、乙酸乙酯 －氯仿 －甲醇 －氨水，在此基础上进行
—351—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(1)
优化。结果表明以浓氨溶液 －水 －丙酮(3 ∶ 7 ∶ 90)
作为展开剂得到的色谱分离度及斑点相对位置重现
性好。比较了国产的普通硅胶 G板(青岛海洋化工
厂)、高效硅胶 G 板(烟台市化学工业研究所)及进
口的普通硅胶 G板(德国默克公司)、高效硅胶 G板
(德国默克公司) ，结果均可以对颠茄流浸膏中非法
添加硫酸阿托品进行定性鉴别，在保证重复性的前
提下，以选择价格易于接受为原则，使用国产普通硅
胶 G板。
3. 2 硫酸天仙子胺 HPLC含量测定条件的选择
3. 2. 1 检测波长的选择 取硫酸天仙子胺对照品
溶液适量，置紫外分光光度计进行光谱扫描，结果显
示硫酸天仙子胺在 211. 00 nm 波长处有最大吸收，
故确定 210 nm为测定波长。
3. 2. 2 流动相的选择 试验中参考文献［1，10］，
比较 4 种流动相体系对流动相组成［0. 004%磷酸
0. 008 mol·L －1十二烷基硫酸钠溶液 －乙腈(50 ∶
50)、乙腈 －磷酸盐缓冲溶液(取 6. 8 g 磷酸二氢钾
溶于 1000 mL 水中，加入三乙胺 10 mL，用磷酸调
pH至 2. 8) (7∶ 93)、0. 25%十二烷基硫酸钠溶液(磷
酸调 pH至 2. 5)－乙腈(60∶ 40) ］进行考察，最终确
定流动相组成为:0. 004%磷酸溶液(含 0. 25%十二
烷基硫酸钠)－乙腈(60∶ 40)。
3. 2. 3 耐受性试验 对不同品牌色谱柱［Kromasil
KR100 － C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)、Agilent
ZORBAX SB － C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)、Shim
－ pack VP － ODS C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)、
Welch Materials XB － C18 (4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ］、柱温(20 ～ 40 ℃)、流速(0. 95 ～ 1. 05 mL·
min －1)进行考察，按本文含量测定的色谱条件以及
改变后色谱条件进样分析，测得硫酸天仙子胺色谱
峰面积的 RSD ＜3%，分离度符合含量测定要求。因
此，颠茄流浸膏中的硫酸天仙子胺含量测定条件较
宽，具有较好的耐受性。
3. 3 小结 本文研究内容为 2010 年版中国药典
颠茄系列标准提高课题，首次运用薄层色谱的方法
鉴别出添加硫酸阿托品的颠茄流浸膏，再运用
HPLC 方法对样品中硫酸天仙子胺进行含量测定，
结果显示 30 批样品中 6 批样品添加硫酸阿托品，30
号样品虽硫酸阿托品检查呈阴性但硫酸天仙子胺含
量很低，故确定为伪品。本方法解决了此前难以控
制颠茄流浸膏生产中非法添加硫酸阿托品的实际问
题，操作简便，为颠茄流浸膏的非法添加的控制方法
提供合理数据，可用于颠茄流浸膏的质量控制，具有
较高的实用价值。
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