全 文 ：特 产 研 究 P S e c il a Wd l i E e on o而 e八习 im公 n ad P ln at R e s er a eh
文章编号 :0 0 1 1一 472 1( 2 0 0 8 )0 4一0 0 6 3一0 4
落地梅与狭叶落地梅的药材鉴定与主要化学组分的含量测定
李小锋 , 宋良科 “ , 谢娟 , 何海洋 , 王恒 , 代春初
(西南交通大学生命科学与工程学院 ,四川 成都 61 0 31 )
摘要 : 目的 拟建立稳定的落地梅与狭叶落地梅主要化学组分的定性 、定量分析方法以及药材鉴定技术 ,为药材质 t 控制方法
的筛选莫定基础。 方法 TL c 、 H r L c 法 , 采用 w a te sr 5 15 Hr L c 泵 、 w a t e sr 2 48 7 紫夕淞测器 、 mE po w er 色谱工作站 ; s , 吐 m e e
匀 s ihel 洲即切色谱柱 (4 . 6 n ” n x 25 0 n u n , 5卜 m ) ; 甲醇刁 .4 % 磷酸 (65 : 35 )为流动相 ;检测波长为 3 65 nl ; 流速为 1 . 0切工lr in n ;柱
温为 30 ℃ 。 结果 山奈酚在 .0 0 74 4 一 .0 52 0 8 卜 g 范围与峰面积值线性关系良好 (r 二 .0 1为 9 8) , 平均回收率 101 . 4% , R sD 二
.2 69 %
, n 二 6 。 结论 高效液相色谱法测定落地梅与狭叶落地梅中山奈酚含量方法稳定 ,可作为药材质 t 控制方法之一。
关妞词 : 落地梅 ; 狭叶落地梅 ; 薄层色谱法 ;高效液相色谱法
中圈分类号 : 2R 82 .5 ; 06 57 .7 文献标识码 : A
dI en it if ca it o n o f M e由d n a l M a t e ir a ls a n d C o n t en t D e t e n nr in a it o n
o f ht e M a i n C h e m ic al G r o u P s i n 入卿im a 动祖 . aP ir 山fo n . 括
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,
S O N G iL an g一 e气 X正 J u an , EH H al 一 y an g
W A N G H e n g
,
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( Co l l e g e o f iL fe s
e ien e e an d E池n i n e e ir n g s o u ht 一w set Ji a o一 n g nU iv ser iyt , C h en g du 6 10 0 3 1 , C h i n a
A bs t ar tC : O bj 白改iv e T o e sabt il s h a sabt l e me ht o d fo r q u碰iat ve an d q u an it iat ve an al y is s o f ht e m ia n e h e而 e al g or u P s in ysL i~ h奴
P ar 记如、 众 an d Lys i~ 人奴 夕盯记如~ v ar
.
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.
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e o lu 功nL o v en m ia n面 n e d at 3 0℃ . R e s u lt s hT e 血aer n ln g e o f K ae 呷介 r o l w as 0 . 074 4一 5 20 8 卜g ( r动侧为 8 ) , ht e va e卜
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o v e叮 w as 10 1 .4% , R S D = 2 . 69 % ( n场 ) . C o n e lu s io n T七e e on ent t de et r in n iat on o f k a e m p fe r o l in ysL i~ 人奴 尹耐扣~ an d
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h奴 尹耐如、 15 v ar . s et n o Ph y 1la by HP L C me ht 0 d w as sabt le . T卜1s mhet o d e an be u eS d fOr ht e q u ial yt e on mt l o f ysL i~ h证
p J 记如~ an d伽~ h奴 p ar 记如~ v ar
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K e y w o r ds : ysL i~
h奴 p or 记如n is : ysL i~ h奴 p ar 记如、 ` v ar
.
s et n o phy l a ; T L C ; H P L C
.
收稿日期 : 20() 8 - 0 7一 15
甚金项目 : 国家科技部自然保护区生物标本整理 、整合共享试点 一 民族医药标本整理 、整合课题 (2 o 5D K户卫 14《H )
作者简介 :李小锋 ( 19 8 6一 ) ,男 ,四川成都人 ,硕士研究生 ,研究方向: 药用植物资源与活性成分研究。
,通讯作者 : 宋良科 ( 1954 - ) ,男 ,副教授 ,主要从事中药资源与品质评价研究。 -E m ial : s on g玫 591 @ 126 .c o m
DOI : 10. 16720 /j . cnki . tcyj . 2008. 04. 022
特 产 2以阳年第 4期
落地梅茎表皮细胞 1 列 ,类方形 ,外被棕红色角质
层 。 皮层由 10 一20 层的薄壁细胞组成 , 含淀粉粒 ,皮层
外侧 2一 3 层薄壁细胞排列紧密 , 内侧薄壁细胞则排列
疏松 ;有分泌细胞分布 ,可见红棕色块状物 。 中柱鞘纤
维明显 ,有 4一 7 层细胞 。 韧皮部由筛管 、韧皮薄壁细胞
组成 , 形成层不明显 。 木质部由导管和木薄壁细胞组
成 。 髓部宽大 , 由大型薄壁细胞组成 。 狭叶落地梅与落
地梅的茎横切面的特征相似。
.3 2 叶衰面制片
落地梅上表皮细胞有 1层分泌物或角质 。 下表皮
细胞呈多边形 ,垂周壁深波状弯曲 ;气孔较多 ,为不等
式 ;腺毛较多易见 ,为单细胞状 ,基座较小 , 内含棕红色
分泌物 。 狭叶落地梅与落地梅的区别在于 :狭叶落地梅
的上表皮腺体较多 。
3
.
3 粉末鉴定
灰绿色 ,气微 ,味淡 ;纤维多成束 ,长条状 ;腺毛较
多 , 多破裂 , 由单细胞构成 , 内含红棕色分泌物 ,柄较
短 ;导管较常见多螺纹 、 网纹 ;油滴和棕色块多见 ,大小
不一 ;淀粉粒较少 ,类球形 , 单粒或复粒 ;气孔多见 , 为
不等式 , 副卫细胞 3一4 个 。 狭叶落地梅与落地梅的粉末
鉴别特征相似 。
4 薄层色谱鉴别
取本品粉末 g2 ,加 80 % 甲醇 SOm L ,加热回流 hl ,
放冷 ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加水 l。功L 使溶解 ;用乙醚
提取 2 次 , 每次 10 n l L , 弃去乙醚液 , 水液加稀盐酸
l o m L
,置水浴中水解 hl ,取出 ,迅速冷却 , 用醋酸乙醋
振摇提取 2 次 , 每次 2 0m L , 合并醋酸乙醋液 ; 用水
3 0n
l L 洗涤 ,弃去水洗液 ,醋酸乙醋液蒸干 ,残渣加甲醉
1毗使溶解 ,作为供试品溶液 。 另取搬皮素及山奈酚对
照品 ,分别加甲醇制成每 lmL 各含 .0 s m g 的溶液 ,作为对照品溶液 。 用毛细管吸取等量的溶液 ,分别点于同一
硅胶 G 薄层板上 ,以甲笨 一 甲酸乙醋 一 甲酸 (10 : 8 :
1) 为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 3 %三抓化铝乙醉
溶液 ,在 1 05 ℃加热数分钟 ,置紫外光灯 (3 65 n m )下检
视所得的结果 ,见图 1。
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落地梅(srL ~ h奴 p盯记如朋15 rF an hc
.
)与狭叶落
地梅 (如 i~ 施 p ` 仙扣~ var . st en hoP yu a rF an hc . )为报春花科珍珠菜属 (xsL i~ h她 )植物。 落地梅又名重横排草 、四块瓦等 ,全草入药 ,具有祛风 、除湿 、活血 、 散
痛等功效 ,主治风寒咳嗽 、风湿麻木 、疼痛 、 月经不调 、
跌打损伤等症阴 。 现代药理研究证明落地梅具有兴奋
子宫的作用阁 。 狭叶落地梅又名伞叶排草 、追风伞等 ,全
草入药 ,祛风 、活血 ,治风湿痹痛 、半身不遂 、跌打损伤 、
小儿惊风等症 l冈 。 落地梅及狭叶落地梅药效广泛、植物
资源丰富、价格低廉 ,作为一种民族药物己开始得到药
物行业的关注。 因此 ,对落地梅与狭叶落地梅的药材性
状 、解剖学特性 、主要化学组分进行基础研究 , 为进一
步研究落地梅与狭叶落地梅的药材质量控制方法莫定
基础 , 为充分利用落地梅与狭叶落地梅野生资源提供
有益参考 。
1 实验材料与仪器
1
.
1 药材样品
采收落地梅和狭叶落地梅 ( 2 0 7 年 5 月 ,峨眉山
善觉寺附近 )各 I k g , 晾干 ,切碎 ,烘干 (不超过 50 ℃ ) ,
用刁型粉碎衫晰碎 ,过筛 ,备用 。
1
.
2 试药与试荆
山奈酚对照品 : 中国药品生物检定所 , 批号 :
u 0 86 1一03 03 ;懈皮素对照品 :中国药品生物检定所
,
批号 : l以x犯 l一以摊 06 ;蒸馏水 、超纯水 、 硅胶 G 、 乙醚 、
乙酸乙醋 、 甲苯 、 甲酸 、 甲酸乙醋、 甲醇 (分析纯 ) 、 甲醇
(色谱纯 ) 、盐酸 (分析纯 ) 、磷酸 (分析纯 )。
1
.
3 仪姗
高效液相色谱仪 :w a te sr 248 7 紫外检测器 ; S y m 一
me ytr s h iel 洲即。 色谱柱 ( 4 . 6 un x 2 5 0 n u n , 5 林 m ) ;
w a比sr 51 5 Hp L C 泵 ,美国 w aet sr 公司 ; Em op ~ 色谱工作站 。 1 l0 G - 3 型烘箱 : 上海实验仪器厂有限公司 ;
A K切卜 r y一 10 超纯水机 : 振大水处理器材有限公司 ;
GT 3 2A 分析天平 :上海天平仪器厂 。
2 药材性状鉴别
落地梅茎长 10 ~4 sc m , 不分枝 ,表棕色或暗棕色 ,
有纵纹 , 多皱缩 ,断面实心 ,不易折断 ;叶聚生茎顶端 ,
4币片 ,呈轮生状 ,极少出现第 2 轮叶 ,展平后叶片倒卵
形至椭圆形 , 皱缩 , 长 5一 1 c7 m , 宽 3一 1 k( m , 先端短渐
尖 ,基部椒形 ,全缘 ;上表面灰绿色或棕褐色 ,下表面灰
白 ,两面腺条不明显 ;主脉明显突起 ,侧脉 4 一 5对 ;花聚
生顶端 ,花冠黄色 ,花粉粒具 3孔沟 ;气微 ,味淡 。
狭叶落地梅与落地梅的区别 : 狭叶落地梅的叶片
为 6一 18 片 ,叶片披针形 ,较落地梅的叶片狭长 。
3 药材显微鉴别
3
.
1 茎橄切面
O
圈 l :a 落地梅样品溶液 . :b 狭叶落地梅样品溶液 ,
:c 山奈酚对照品溶液 . :d 拱皮素对照品溶液。
第 4 期 李小锋 ,等 :落地梅与狭叶落地梅的药材鉴定与主要化学组分的含盆测定
5 含 t 测定
.5 1 色谱条件
w a tesr 51 5 H , L C 泵 , w a tel sr 2 4 8 7 紫外检测器 ,
Em oP wer 色谱工作站 ; s , nr m e ytr hs eu产 RP 坦色谱柱
( 4
.
6
un
x 2 5 o n u n
,
5卜 m ) ; 甲醇刁 . 4 %磷酸 ( 6 5 :5 5 )为
流动相 ;检测波长为 3 65 lun ;流速为 l肠刊口而 ;n 柱温为
3 0℃ 。
.5 2 对照品溶液的制备
精密称取山奈酚对照品 3 . 1m0 g , 溶于 25 mL 容量瓶中 ,加甲醇定容 ,充分溶解 ;精密吸取 .3 o m L 于 l o m L
容量瓶中 , 加甲醇定容 , 配置浓度为 37 .2 卜岁山L 的对
照品溶液 ,备用 。
.5 3 供试品溶液的制备
取落地梅和狭叶落地梅的细粉各约 2 . 09 , 精密称
定 ,分别编号 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 2 5功工 ,
密塞 ,称定重量 ,加热回流 hl ,放冷 ,再称定重最 ,用甲
醉补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 。 精密量取续滤液
10 m L
,精密加入 20 %的盐酸 Zm L , 置 80 ℃水浴中加热
水解 h1 ,取出 ,迅速冷却 ,转移至 25 而容量瓶中 ,用甲
醇定容至刻度 ,摇匀 , 即得 ,备用供测定 。
.5 4 线性关系的考察
分别精密吸取山奈酚对照品溶液 (浓度为 37 忍
卜幼吐)2 卜 L 、 4 卜 L 、 6 卜 L 、 8 卜 L 、 10 卜L 、 12 林 L 、 14 林 L ,
依次进样 ;以山奈酚的进样量 x 为横坐标 , 以峰面积 y
为纵坐标 , 进行回归分析 , 回归方程 : =y 3 983 2 x1 -
峨习38 5 , r = o典为 9 8 (。 7 ) 。
.5 5 精密度试验
精密吸取山奈酚对照品溶液每次 10 林 L , 连续 5
次进样 ,测定峰面积 ,计算其 RsD =l . 67 % ( n = 5 ) 。
.5 6 盆复性试验
平行制备狭叶落地梅供试品 5份 , 分别精密吸取
10 卜 L ,连续进样 5次 ,测定样品中山奈酚的峰面积 ,计
算得 R SD = 1 . 0% ( n = 5 ) 。
.5 7 稳定性试验
精密吸取狭叶落地梅供试品溶液各 10 卜L , 分别
于 h0 、 h4 、 h8 、 1h6 、 2 h4 进样 ,测定样品中山奈酚的峰面
积 ,计算得 R S D =1 . 25 % ( n = 5 )。
.5 8 加样回收率试验
采用加样回收法 , 取已知含量的狭叶落地梅药材
6 份各约 1 . 09 ,精密称定 ,每份分别加入一定量的对照
品溶液 ,按供试品溶液的制备项下的操作制备 ,测定含
量 , 计算平均回收率为 101 . 4% , R SD = 2 .6 9% ( n = 6) 。
结果如表 1。
衰 1
样品重t
狭叶落地梅加样回收结果 《m g , % 】
加入山奈酚盆 测出质t 回收率
4.3…3l.97103以254213701 . (洲为.0 989 41 .佣 1 4
0
.
9 7 5 9
0
.
9 5 5 9
1
.峨X)1 2
0
.
7 7 7
0
.
7 6 2
0
.
7 7 1
0
.
7 5 1
0
.
7 3 6
0
.
7 7 1
.0 756
.0 756
.0 756
.0 756
.0 756
.0 756
.5 9 样品的含 t 侧定
按上述色谱条件 , 精密吸取各供试品溶液各
10 林 L ,依次进样 ,测得样品中山奈酚的含盆为狭叶落
地梅 .0 0 7 7% ,落地梅 .0 06 2% 。 其色谱图 ,如图 2 。
201550
1 0 15 20 2 5
山奈酚对照品圈谱
3 0 3 5
1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 3 5
落地梅样品图谧
5 10 1 5 2 0 2 5
狭叶落地梅样品图谱
圈 2
3 0 3 5
(下转第 7 8 页 )
特 产 Zlx阳年第 4期
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(上接第 6 5 页 )
6 讨论
6
.
1 落地梅与狭叶落地梅能从叶片的多少和叶片的形
状来鉴别 ,但如果药材破碎或是饮片 ,通过形状与显微
鉴别也难以将两者区别。
.6 2 落地梅与狭叶落地梅的薄层色谱鉴别图谱表明 ,
两者都含有山奈酚 ,但两者的山奈酚含量有差异。 而在
图谱中可见与撇皮素基本相同的 fR 值的位置上 ,落地
梅与狭叶落地梅样品都有斑点 , 但是 一与搬皮素对照品
的荧光颜色完全不同 , 曾有报道落地梅和狭叶落地梅
中都含有懈皮素问 ,因而落地梅和狭叶落地梅中是否
含有栩皮素有待进一步研究 。
.6 3 高效液相色谱法证实了薄层色谱鉴别中狭叶落地
梅的山奈酚含童高于落地梅 , 结合薄层色谱斑点数分
析 ,两者是否同用有待进一步研究。
参 考 文 献
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