全 文 ：２０１２－２０１８
１０／２０１６
草　业　科　学
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ
第３３卷第１０期
Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．１０
ｈｔｔｐ：??ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｍ
ＤＯＩ：１０．１１８２９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－０６２９．２０１６－０１８６
林志魁，罗宗志，梅兰，刘宏伟，吴金寿，林占熺．芦竹属新材料绿洲３号的愈伤组织诱导．草业科学，２０１６，３３（１０）：２０１２－２０１８．
Ｌｉｎ　Ｚ　Ｋ，Ｌｕｏ　Ｚ　Ｚ，Ｍｅｉ　Ｌ，Ｌｉｕ　Ｈ　Ｗ，Ｗｕ　Ｊ　Ｓ，Ｌｉｎ　Ｚ　Ｘ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３———ａ　ｎｅｗ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｏｆ　Ａｒｕｎｄｏ．Ｐｒａｔ－
ａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１６，３３（１０）：２０１２－２０１８．
芦竹属新材料绿洲３号的愈伤组织诱导
林志魁１，２，罗宗志２，３，梅 兰１，２，刘宏伟１，２，吴金寿２，林占熺２
（１．国家菌草工程技术研究中心，福建 福州３５０００２；２．福建农林大学生命科学学院，福建 福州３５０００２；
３．福建农林大学动物科学学院，福建 福州３５０００２）
摘要：为了诱导愈伤组织，本研究以绿洲３号（Ａｒｕｎｄｏ）为试验材料，分别以 ＮａＣｌＯ（商品名为安替福民）和 ＨｇＣｌ２（升
汞）对其茎段进行消毒，然后取无菌茎段及从无菌茎段长出来的幼芽和幼叶为外植体，利用不同浓度的激素及１．０
ｇ·Ｌ－１聚乙烯吡咯烷酮对外植体进行愈伤组织诱导。结果表明，以０．１％ ＨｇＣｌ２ 溶液消毒１８ｍｉｎ的消毒效果最佳，污
染率为１３％；而 ＮａＣｌＯ不能有效地消毒，且对茎段有一定的毒害作用。以 ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋１．０ｇ·Ｌ－１
ＰＶＰ＋３．０ｍｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ培养基配方的诱导效果最佳，且３种外植体中愈伤组织最难诱导的为幼叶，其次是茎段，最
易诱导的为幼芽。其中，１．０ｇ·Ｌ－１　ＰＶＰ能显著促进芽诱导率，使得出愈率达到１００％。
关键词：绿洲３号；茎段；愈伤组织；安替福民；ＰＶＰ
中图分类号：Ｓ５６７．２３＋９　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００１－０６２９（２０１６）１０－２０１２－０７＊
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３———ａ　ｎｅｗ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｏｆ　Ａｒｕｎｄｏ
Ｌｉｎ　Ｚｈｉ－ｋｕｉ　１，２，Ｌｕｏ　Ｚｏｎｇ－ｚｈｉ　２，３，Ｍｅｉ　Ｌａｎ１，２，Ｌｉｕ　Ｈｏｎｇ－ｗｅｉ　１，２，Ｗｕ　Ｊｉｎ－ｓｈｏｕ２，Ｌｉｎ　Ｚｈａｎ－ｘｉ　２
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　ｌｉｆｅ　ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｊｉａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００２，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｈｉｎａ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　ＪＵＮＣＡＯ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００２，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｆｕｊｉａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｃａｌｕｓ，ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＮａＣｌＯ（ｏｒ
Ａｎｔｉｆｏｒｍｉｎ）ａｎｄ　ＨｇＣｌ２ｏｎ　ｓｔｅｍｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｗｅ　ｔｏｏｋ　ｔｈｅ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｓｔｅｍｓ，
ｇｅｒｍｓ　ａｎｄ　ｙｏｕｎｇ　ｌｅａｖｅｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｓｔｅｍｓ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ａｎｄ
１．０ｇ·Ｌ－１　ＰＶＰ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉｓ　ｔｏ　ｕｓｅ
０．１％ ＨｇＣｌ２ｔｏ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｅ　ｆｏｒ　１８ｍｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１３％．Ｗｈｉｌｅ　ＮａＣｌＯ　ｃａｎｎｏｔ　ｂｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ－
ｌｙ，ａｎｄ　ｉｔ　ａｌｓｏ　ｈａｓ　ｔｏｘｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｓｔｅｍ　ｓｅｇｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍｓ　ｗｉｔｈ　ｂｅｓｔ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｗｅｒｅ　ＭＳ＋０．
５ｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ，１．０ｇ·Ｌ－１　ＰＶＰ　ａｎｄ　３．０ｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ．Ｉｎ　ｔｈｒｅｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ　ｏｒｄｅｒ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
ｗａｓ　ｇｅｒｍｓ＞ｓｔｅｍｓ＞ｙｏｕｎｇ　ｌｅａｖｅｓ．１．０ｇ·Ｌ－１　ＰＶＰ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｂｕｄｓ　ｓｉｇｎｉｆｉ－
ｃａｎｔｌｙ，ｍａｋｉｎｇ　１００％ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３；ｓｔｅｍ；ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｓ；ＮａＣｌＯ；ＰＶＰ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：Ｌｉｎ　Ｚｈａｎ－ｘｉ　Ｅ－ｍａｉｌ：３７１０９３９４１＠ｑｑ．ｃｏｍ
＊ 收稿日期：２０１６－０４－１２　　接受日期：２０１６－０８－３０
基金项目：国家林业局公益性行业专项“浑善达克沙地疏林型植被建设技术研究”（２０１５０４４１２）；国家林业局引进国外技术、管理人才项目（示
范项目）“莱索托绿洲一号引种及繁育栽培技术推广示范”（Ｋ４３ＮＡ９０１Ａ）
第一作者：林志魁（１９９０－），男，福建东山人，在读硕士生，主要从事植物遗传转化研究。Ｅ－ｍａｉｌ：３７１０９３９４１＠ｑｑ．ｃｏｍ
通信作者：林占熺（１９４３－），男，福建连城人，研究员，博导，博士，主要从事菌草技术的研究、推广和教学工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｚｘｊｕｎｃａｏ＠１６３．ｃｏｍ
第１０期 林志魁　等：芦竹属新材料绿洲３号的愈伤组织诱导
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　绿洲３号（Ａｒｕｎｄｏ）原取于福建省福州市永泰
县，是一种单子叶禾本科芦竹属植物，未确定其种，
植株高大直立，根系发达，为多年生丛生草本植物。
由国家菌草工程技术研究中心引进该草，可作为栽
培灵芝、猴头菇和杏鲍菇等多种食用菌的优质培养
料，而目前较多应用在园林绿化以及制备生物质材
料和植物纤维板材料，且是防风治沙的优良草种。
２０１３年５月１７日将其与巨菌草相结合用于内蒙古
阿拉善防沙固沙，成效显著。其茎杆直立、挺拔、中
空，株高通常为７ｍ，茎粗约３ｃｍ，叶长６８．０～７３．５
ｃｍ，叶宽６．６～８．０ｃｍ，可分枝，每个节均能长芽。
芦竹被称为低洼盐碱地的“先锋植物”，因其耐寒、耐
旱、耐盐碱，且在贫瘠的土壤里具有一定的忍耐
力［１－２］，可以在盐沼、沙地、后备土地及废弃矿场进行
种植，从而一定程度上缓解我国耕地面积紧张的状
况。芦竹主要分布于我国的１２个省（区），北起辽
宁、安徽，南至福建、台湾、广西等，已经形成了一定
规模的生产地区，主要分布于江苏省及沿海等地区。
芦竹用途广泛，根茎是很好的中药材，具有止呕生
津、清热泻火的功效［３］；枝叶细嫩多汁，是牲畜的良
好青贮饲料［４］；茎秆是优质造纸原料［５］和良好的管
乐簧片材料，并可编织用具和制造人造丝［４］。此外，
芦竹对Ｎｉ、Ｃｄ、Ｈｇ和Ｐｂ等重金属有良好的吸附作
用，可用于改善和修复土壤的重金属污染［６－７］。国内
关于芦竹的研究较多的集中在湿地中的生理和生态
特征及对重金属的富集和耐性等方面［７－１０］。除已见
报道的关于芦竹腋芽萌发、增殖及生根培养基的筛
选和优化［１１］外，近年来，对于芦竹快繁体系建立的报
道并不多见。在２０１５年，中国保护黄河基金会已批
准设立“菌草工程技术保护黄河流域专项基金”。由
于绿洲３号在抗寒性、防止水土流失和荒漠化上成
效显著，所以未来５年将在黄河沿岸大面积种植绿
洲３号，在这之前急需解决绿洲３号的快繁体系和
相关技术问题。本研究对绿洲３号的愈伤组织诱导
进行初步探索，以期为绿洲３号组织培养体系和遗
传转化体系的建立奠定基础，同时为绿洲３号的推
广应用提供技术支持。
１　材料与方法
１．１　材料
绿洲３号是芦竹属植物，未确定其种，由国家菌草
工程技术研究中心提供，是试验中的新材料，取其分枝
的枝条为外植体。
１．２　方法
１．２．１　获得无菌外植体
无菌茎段的制备：以单节绿洲３号的茎段为外植
体，将茎段去掉叶片剪成２～３ｃｍ长的小段，每个茎段
保留一个节。剪取新鲜植物材料后，放入洗衣粉中漂
洗３０ｍｉｎ，用流水冲洗１ｈ，在超净工作台上用无菌水
冲洗３次，用７５％的乙醇浸泡３０ｓ，以不同浓度的
ＨｇＣｌ２（升汞）和ＮａＣｌＯ（商品名安替福民）分别浸泡不
同的时间，再用无菌水冲洗３遍。其中，ＨｇＣｌ２ 浓度分
别为０．１％、０．５％和１．０％，浸泡时间为６、１２、１８ｍｉｎ；
ＮａＣｌＯ浓度分别为１０％、３０％和６０％，浸泡时间为
１０、２０、３０ｍｉｎ。放入无菌滤纸上吸干表面的水分［１２］。
将经过消毒剪切的茎段放入 ＭＳ培养基上，各设９个
处理，每个处理８瓶，每瓶接种４个，３次重复。２５℃
光照条件下培养，７ｄ后统计污染率和发芽率，比较消
毒效果。
无菌芽制备：以绿洲３号无菌茎段长出的芽为外
植体，将无菌芽切成０．５～０．８ｃｍ，放入诱导培养基
上，设８个处理，每个处理８瓶，每瓶接种４个，３次重
复。在２５℃条件下暗培养，３０ｄ后观察统计愈伤组
织的诱导率。
无菌幼叶制备：以绿洲３号无菌茎段长出的幼叶
为外植体，取无菌苗的幼叶切成大小０．５～１．０ｃｍ放
入诱导培养基上，设８个处理，每个处理８瓶，每瓶接
种４个，３次重复。在２５℃条件下暗培养，３０ｄ后观
察统计愈伤组织的诱导率。
１．２．２　愈伤组织的诱导　将外植体接种到 ＭＳ基本
培养基上，并附加不同浓度的６－ＢＡ 和２，４－Ｄ组合。
将外植体材料接种含２，４－Ｄ 浓度分别为０．５、２、３
ｍｇ·Ｌ－１的 ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋１．０ｇ·Ｌ－１
ＰＶＰ培养基中，在２５℃黑暗条件下培养。每个处理
接种３２瓶，３次重复，接种３０ｄ后统计愈伤组织诱导
率。
１．３　数据分析
污染率 ＝（污染外植体数／接种外植体数）×
１００％；
发芽率 ＝（发芽外植体数／接种外植体数）×
１００％；
愈伤组织诱导率＝产生愈伤组织的外植体／接种
的外植体总数×１００％。
取以上各处理３次重复的平均值为结果数据，运
用统计分析软件ＳＰＳＳ　２０．０进行数据的显著性检验和
分析。
３１０２
草　业　科　学 第３３卷
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
２　结果与分析
２．１　茎段消毒
２．１．１　ＨｇＣｌ２ 对绿洲３号茎段的消毒效果　利用不
同浓度的 ＨｇＣｌ２ 对外植体进行不同时间的消毒试验，
结果表明（表１），Ａ１ 处理的污染率最高，达到了１９％，
Ａ２ 和Ａ３ 差异不显著（Ｐ＞０．０５），而从Ａ５ 到Ａ９ 均未
发现污染，但是发芽率都低于４０％，特别是 Ａ８ 和 Ａ９
的发芽率仅约为６％。发芽率除 Ａ２、Ａ３ 之间，Ａ９、Ａ８
之间差异不显著外，其它各处理间差异显著（Ｐ＜
０．０５）。随着 ＨｇＣｌ２ 处理浓度的升高与消毒时间的延
长，污染率下降，除Ａ１、Ａ２ 和Ａ３ 外发芽率也呈下降趋
势。但是，使用０．１％ ＨｇＣｌ２ 为消毒剂时，随时间的延
长，污染率下降，而发芽率却逐渐上升，与其它处理浓
度所表现出的结果相反，具体影响机制有待进一步的
研究。本试验结果表明，利用升汞对绿洲３号茎段进
行消毒的最佳条件为０．１％升汞消毒１８ｍｉｎ。
２．１．２　ＮａＣｌＯ对绿洲３号茎段的消毒效果　ＮａＣｌＯ
消毒外植体的发芽率在０～２３％，且消毒１０、２０ｍｉｎ
外植体的污染率在８４％～９９％，消毒３０ｍｉｎ外植体
污染率在４５％～６０％（表２）。Ｂ６、Ｂ７、Ｂ８ 和Ｂ９ 处理的
发芽率为０。从Ｂ１ 到Ｂ５ 处理中Ｂ３ 处理的污染率显
著低于另外４个处理（Ｐ＜０．０５），因此，１０％ＮａＣｌＯ消
毒３０ｍｉｎ的处理效果最佳。
表１　不同浓度的ＨｇＣｌ２ 对绿洲３号茎段的消毒效果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＨｇＣｌ２ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３
处理编号
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｃｏｄｅ
ＨｇＣｌ２ 浓度
ＨｇＣｌ２ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／％
处理时间
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
Ａ１ ０．１　 ６　 １８．５８３±０．３００ａ ４６．８１０±０．１３５ｃ
Ａ２ ０．１　 １２　 １２．５００±０．２８９ｂ ６２．５００±０．２８９ａ
Ａ３ ０．１　 １８　 １２．１３３±０．５７８ｂ ６５．５７７±０．２６１ａ
Ａ４ ０．５　 ６　 ６．２５０±０．２５０ｃ ５２．６３３±３．１４７ｂ
Ａ５ ０．５　 １２　 ０ｄ ３７．７３３±０．１４５ｄ
Ａ６ ０．５　 １８　 ０ｄ ２１．９６０±０．０４０ｆ
Ａ７ １．０　 ６　 ０ｄ ３４．４６０±０．２９１ｅ
Ａ８ １．０　 １２　 ０ｄ ６．０８３±０．０８３ｇ
Ａ９ １．０　 １８　 ０ｄ ５．９１６±０．２２０ｇ
注：同列不同小写字母表示不同处理间差异显著（Ｐ＜０．０５）。下同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒ　ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　０．０５ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
表２　不同浓度的ＮａＣｌＯ对绿洲３号茎段的消毒效果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＮａＣｌＯ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３
处理编号
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｃｏｄｅ
ＮａＣｌＯ浓度
ＮａＣｌＯ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／％
处理时间
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
Ｂ１ １０　 １０　 ９８．９５８±０．０５５ａ ７．２９２±０．０１０ｃ
Ｂ２ １０　 ２０　 ９７．９１７±０．０２１ａ ２２．９１７±０．０３８ａ
Ｂ３ １０　 ３０　 ５９．３７５±０．０１８０ｄ ８．３３３±０．０１０ｃ
Ｂ４ ３０　 １０　 ９７．９１７±０．０２１ａ １６．６６７±０．０１０ｂ
Ｂ５ ３０　 ２０　 ９４．７９２±０．０２８ａｂ　 ５．２０８±０．０１０ｃ
Ｂ６ ３０　 ３０　 ５５．２０８±０．０２８ｄ ０ｄ
Ｂ７ ６０　 １０　 ８６．４５８±０．０２８ｂｃ　 ０ｄ
Ｂ８ ６０　 ２０　 ８４．３７５±０．０１８ｃ ０ｄ
Ｂ９ ６０　 ３０　 ４５．８３３±０．０３９ｅ ０ｄ
４１０２
第１０期 林志魁　等：芦竹属新材料绿洲３号的愈伤组织诱导
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
２．２　愈伤组织诱导
２．２．１　６－ＢＡ和２，４－Ｄ对绿洲３号幼叶愈伤组织诱导
的影响　分别以 ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ和 ＭＳ＋２．０
ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ作为基本培养基，添加不同浓度的２，４－Ｄ，
共８个处理，在以绿洲３号幼叶为外植体中，随着２，４－Ｄ
浓度的增加，经１个月培养均未产生愈伤组织。加入不
同浓度２，４－Ｄ后，绿洲３号幼叶出愈率仍为０。
２．２．２　２，４－Ｄ对绿洲３号茎段愈伤组织诱导的影响
　试验两周后在部分茎段上长出芽（图１），部分长出
愈伤组织（图２）。以 ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１６－ＢＡ为基本
培养基时，２，４－Ｄ从０．５～３．０ｍｇ·Ｌ－１，４个浓度梯度
间发芽率没有显著差异（Ｐ＞０．０５），为４９．６６０％～
５４．４４０％（表３）。出愈率随着２，４－Ｄ浓度的增高呈先上
升后下降再上升的趋势。而以 ＭＳ＋２．０ ｍｇ·Ｌ－１６－
ＢＡ为基本培养基时，发芽率随着２，４－Ｄ浓度的增高呈
下降趋势，处理 Ｄ５ 和 Ｄ６ 的发芽率较高，分别为
７７．３００％和７６．９１０％，显著高于其它处理（Ｐ＜０．０５）。
出愈率随着２，４－Ｄ浓度的增高呈先升后降
表３　不同浓度的６－ＢＡ和２，４－Ｄ组合对绿洲３号茎段愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂｌｅ　３　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　６－ＢＡ　ａｎｄ　２，４－Ｄ　ｏｎ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３．ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
处理编号
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｎｕｍｂｅｒ
基本培养基
Ｍｉｎｉｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ
６－ＢＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
２，４－Ｄ／
ｍｇ·Ｌ－１
出愈率
Ｃａｌｕｓ　ｒａｔｅ／％
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
Ｄ１ ＭＳ　 ０．５　 ０．５　 １１．１１１±０．０２５ｃ ５４．４４０±０．０１０ｂ
Ｄ２ ＭＳ　 ０．５　 １．０　 １５．５５５±０．０１９ｂｃ　 ５０．０００±０．０３３ｂ
Ｄ３ ＭＳ　 ０．５　 ２．０　 １１．６６６±０．０６０ｂｃ　 ４９．６６０±０．０３９ｂ
Ｄ４ ＭＳ　 ０．５　 ３．０　 ３８．８８９±０．０９６ａ ５０．０００±０．０１７ｂ
Ｄ５ ＭＳ　 ２．０　 ０．５　 １１．６６７±０．０３３ｂｃ　 ７７．３００±０．０２５ａ
Ｄ６ ＭＳ　 ２．０　 １．０　 １６．６６７±０．０１７ｂ ７６．９１０±０．１２９ａ
Ｄ７ ＭＳ　 ２．０　 ２．０　 ５．５５６±０．０１０ｄ ２５．０００±０．０５０ｃ
Ｄ８ ＭＳ　 ２．０　 ３．０　 １３．８８９±０．０１０ｂｃ　 １７．５００±０．０２５ｃ
图１　绿洲３号芽图
Ｆｉｇ．１　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３ｂｕｄｓ
图２　绿洲３号茎段愈伤组织
Ｆｉｇ．２　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３ｓｔｅｍｓ　ｃａｌｕｓ
再上升的趋势。综合比较，出愈率在以 ＭＳ＋０．５ｍｇ
·Ｌ－１６－ＢＡ＋３．０ｍｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ时达到最高水平，
此时出愈率为３８．８９９％，显著高于其它浓度（Ｐ＜０．
０５）。
２．２．３　２，４－Ｄ对绿洲３号芽愈伤组织诱导的影响　
以芽为外植体进行诱导时愈伤组织见图３，出愈率都随
着２，４－Ｄ浓度的升高呈现出先减少后增大的趋势，６－ＢＡ
浓度为０．５和２．０ｍｇ·Ｌ－１时，出愈率均在２，４－Ｄ浓度
为２．０ ｍｇ·Ｌ－１时达到最低水平，为０，显著低于
图３　绿洲３号芽愈伤组织
Ｆｉｇ．３　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３ｂｕｄｓ　ｃａｌｕｓ
５１０２
草　业　科　学 第３３卷
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
其它处理（Ｐ＜０．０５）。出愈率在 ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ＋３．０ｍｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ时达到最高水平，此时出
愈率为８６．１１１％（表４）。
２．２．４　ＰＶＰ对绿洲３号芽愈伤组织诱导的影响　从
出愈率来看，以 ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋１．０ｇ·
Ｌ－１　ＰＶＰ作为基本培养基，不同浓度处理中的２，４－Ｄ
对绿洲３号幼叶、茎段和芽的愈伤组织诱导出愈率各
不相同（表５）。不同浓度２，４－Ｄ对幼叶的诱导，出愈
率均为０，对茎段的诱导出愈率分别为１２．２２２％、
１２．７７８％和３５．０００％，而对芽的诱导出愈率差异均达
极显著（Ｐ＜０．０１），为７５．０００％～１００％。综合出愈
率，以ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋１．０ｇ·Ｌ－１　ＰＶＰ其
中，诱导出愈率表现为芽＞茎段＞幼叶。
表４　不同浓度的６－ＢＡ和２，４－Ｄ组合对绿洲３号
芽愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂｌｅ　４　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ
６－ＢＡ　ａｎｄ　２，４－Ｄ　ｏｎ　ｂｕｄ　ｏｆ　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３．ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
处理编号
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｎｕｍｂｅｒ
基本培养基
Ｍｉｎｉｍａｌ
ｍｅｄｉｕｍ
６－ＢＡ
ｍｇ·Ｌ－１
２，４－Ｄ
ｍｇ·Ｌ－１
出愈率
Ｃａｌｕｓ　ｒａｔｅ／
％
Ｅ１ ＭＳ　 ０．５　 ０．５　 ４７．２２２±０．０９６ｂ
Ｅ２ ＭＳ　 ０．５　 １．０　 ３８．３３３±０．０１７ｃ
Ｅ３ ＭＳ　 ０．５　 ２．０　 ０ｇ
Ｅ４ ＭＳ　 ０．５　 ３．０　 ８６．１１１±０．０２６ａ
Ｅ５ ＭＳ　 ２．０　 ０．５　 ３４．４４４±０．０３５ｄ
Ｅ６ ＭＳ　 ２．０　 １．０　 ９．４４４±０．０９６ｆ
Ｅ７ ＭＳ　 ２．０　 ２．０　 ０ｇ
Ｅ８ ＭＳ　 ２．０　 ３．０　 ２５．０００ｅ
表５　ＰＶＰ和不同浓度的生长素对绿洲３号愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂｌｅ　５　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｕｘｉｎ　ａｎｄ　ＰＶＰ　ｏｎ　Ｌｖｚｈｏｕ　Ｎｏ．３ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
处理编号
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｎｕｍｂｅｒ
ＰＶＰ／
ｇ·Ｌ－１
生长素浓度ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｕｘｉｎ／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ　 ２，４－Ｄ
出愈率Ｃａｌｕｓ　ｒａｔｅ／％
幼叶Ｙｏｕｎｇ　ｌｅａｖｅ 茎段Ｓｔｅｍ 芽Ｂｕｄ
Ｆ１ １．０　 ０．５　 ０．５　 ０　 １２．２２２±０．０２５Ｂｂ　７５．０００±０．０３３Ｃｃ
Ｆ２ １．０　 ０．５　 ２．０　 ０　 １２．７７８±０．０１０Ｂｂ　８５．５５６±０．０２５Ｂｂ
Ｆ３ １．０　 ０．５　 ３．０　 ０　 ３５．０００±０．０１７Ａａ　 １００Ａａ
注：同列不同大写字母表示不同处理间差异极显著（Ｐ＜０．０１）。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃａｐｉｔａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　０．０１ｌｅｖｅｌ．
３　讨论与结论
植物愈伤组织培养中，外植体污染是阻碍其成功
的最常见问题之一［１３］。用自来水较长时间冲洗外植
体，是获得有效消毒的重要环节之一［１４－１５］，由于酒精溶
液穿透力很强，消毒时间不宜过长［１６］，所以研究中
７５％酒精消毒时间为３０ｓ。当消毒剂超过一定浓度或
消毒时间超过一定范围时会对植物的各种组织造成损
伤甚至致死，且导致外植体污染率下降和死亡率上
升［１７］。本研究中 ＨｇＣｌ２ 的消毒效果优于 ＮａＣｌＯ。用
不同浓度的ＮａＣｌＯ溶液对绿洲３号茎段进行不同时
间消毒，其发芽率最优的仅为２５％，且研究中细菌和
霉菌污染严重。而对于同一种外植体茎段，用 ＨｇＣｌ２
进行消毒发芽率最佳可达到６６％左右。可见，ＮａＣｌＯ
对绿洲３号外植体的消毒不够彻底，消毒效果不理想。
绿洲３号外植体消毒宜选用０．１％ ＨｇＣｌ２ 溶液。这与
其它植物的外植体消毒溶液的选择基本一致，分别使
用多种消毒剂进行消毒时发现，ＨｇＣｌ２ 溶液消毒效果
较好［１８－２０］。
愈伤组织诱导中细胞分裂素和生长素是必不可少
的［２１］，且低浓度的细胞分裂素与中、低浓度的生长素
能更好地诱导愈伤组织［２２－２３］。这与本研究结果基本一
致，细胞分裂素６－ＢＡ浓度为０．５ｍｇ·Ｌ－１的诱导率
明显高于２．０ｍｇ·Ｌ－１的诱导率。在众多禾本科植物
组织培养试验中，２，４－Ｄ被公认为诱导愈伤组织效果
最好［２４－２８］。２，４－Ｄ浓度在０．５～３．０ｍｇ·Ｌ－１的范围
内茎段和幼芽都可以诱导出愈伤组织，但出愈率差异
明显，并且幼叶无愈伤组织。本研究表明，３．０ｍｇ·
Ｌ－１是最佳浓度，这与前人对禾本科的组织培养研究
的最佳浓度基本一致［２９－３１］。
愈伤组织诱导时１．０ｇ·Ｌ－１　ＰＶＰ能有效促进绿洲
３号芽愈伤组织的诱导，而对茎段和幼叶的作用不显
著。在使用某一浓度范围内的ＰＶＰ对愈伤组织诱导率
有一定的促进作用，这与肖莉杰等［３２］证实１．０ｇ·Ｌ－１
ＰＶＰ能促进玉米（Ｚｅａ　ｍａｙｓ）成熟胚愈伤组织的诱导基
本一致。
综上，绿洲３号茎段消毒中，ＮａＣｌＯ对绿洲３号
茎段有一定的毒害作用，消毒后使茎段发黄和软化而
致死。为尽量降低污染率，又保持较高发芽率，用
０．１％ ＨｇＣｌ２ 溶液消毒１８ｍｉｎ效果最佳。绿洲３号
６１０２
第１０期 林志魁　等：芦竹属新材料绿洲３号的愈伤组织诱导
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
愈伤组织诱导中，以芽、幼叶和茎段为外植体，最佳诱
导愈伤组织培养基为 ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋１．０
ｇ·Ｌ－１　ＰＶＰ＋３．０ｍｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ，其中以芽的出愈
率最高为１００％。在绿洲３号芽诱导中加入１．０
ｇ·Ｌ－１　ＰＶＰ能显著促进诱导率。
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（责任编辑　武艳培）
８１０２