免费文献传递   相关文献

宝铎草的止咳、祛痰作用研究



全 文 :[收稿日期] 20120308(007)
[第一作者] 马莹,硕士,从事药品与保健品质量控制及安全监测研究,Tel:0851-6808862,E-mail:maying26@ 163. com
[通讯作者] * 沈祥春,博士,教授,从事中药民族药药理及心血管药理研究,Tel:0851-6909274,E-mail:shenxiangchun@ 126. com
宝铎草的止咳、祛痰作用研究
马莹1,2,沈祥春2* ,茅向军1
(1. 贵州省食品药品检验所,贵阳 550004;2. 贵阳医学院药理研究室,贵阳 550004)
[摘要] 目的:研究宝铎草提取物的止咳、祛痰作用。方法:将小鼠随机分为空白、阳性药、乙酸乙酯层提取物高、低剂量
(2. 5,1. 25 g·kg - 1)和水层提取液高、低剂量(2. 5,1. 25 g·kg - 1)组,ig 给药 5 d。采用小鼠氨水引咳实验观察其镇咳作用,小鼠
气管段酚红排泌实验观察其祛痰作用。取兔离体气管条,随机分为阳性药组、宝铎草乙酸乙酯层高、中、低剂量(100,10,1. 0
g·L - 1)和水层高、中、低剂量(100,10,1. 0 g·L - 1)组,采用纤毛运动实验观察其促进纤毛运动作用。结果:宝铎草乙酸乙酯层
提取液止咳作用显著(P < 0. 01) ;乙酸乙酯层及水层提取物均可影响酚红分泌(P < 0. 05) ;乙酸乙酯层及水层提取物高剂量
组可明显加快兔离体气管纤毛运动速率(P < 0. 01)。结论:宝铎草乙酸乙酯层及水层提取物具有止咳、祛痰作用;其止咳作用
有效成分主要分布于乙酸乙酯层。
[关键词] 宝铎草;引咳;酚红分泌;纤毛运动;有效成分
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)19-0261-03
Study on the Anti-cough and Anti-sputum Effects of Disporum sessile
MA Ying1,2,SHEN Xiang-chun2* ,MAO Xiang-jun1
(1. Guizhou Institute For Food and Drug Control,Guiyang 550004;
2. Pharmacological Research Section of Guiyang Medical University,Guiyang 550004,China)
[Abstract] Objective:To study Disporum sessiles effects of anti-cough and anti-sputum. Method:Mice
were randomly divided into 6 groups:blank,positive medicine,ethyl acetate layer high,low doses (2. 5,1. 25
g·kg - 1)and water layer high,low doses (2. 5,1. 25 g·kg - 1). Drugs were ig administrated for 5 days. Cough
caused by strong ammonia in mice was used to evaluate anti-cough effect. Phenol red applied to trachea in mice was
used to observe the efficacy of anti-sputum. Trachea clips isolated from rabbit were randomly divided into groups:
positive medicine,ethyl acetate layer low,medium,high doses (100,10,1. 0 g·L - 1)and water layer high,
medium,low doses (100,10,1. 0 g·L - 1). The model of cilia movement was applied to observe the efficacy of
promotion of cilia movement. Result:The ethyl acetate layer showed significant anti-cough effect (P < 0. 01).
The phenol red concentration of the water layer was higher than that of the ethyl acetate layerwith no significant
difference. High concentration of the ethyl acetate layer and the water layer could obviously quicken the speed of
the rabbits cilia movement. Conclusion:The acetate layer and the water layer extract of Disporum sessile has the
effects of anti-cough and anti-sputum. The herbs active ingredients of anti-cough effect mainly exists in ethyl
acetate layer.
[Key words] Disporum sessile;aqua ammonia;cough inducing;phenol red secretion;cilia movement;
effective component
宝铎草为百合科植物宝铎草的干燥根及根茎,
为贵州苗族常用特色地产药物。宝铎草在我省多个
地区应用广泛,亦为我省苗族传统草药,具润肺止
咳、健脾消积之功效,用于虚损咳喘,痰中带血,肠风
·162·
第 18 卷第 19 期
2012 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 19
Oct.,2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.19.074
下血,食积胀满[1]。《贵州省中药材、民族药材质量
标准(2003 年版)》中“百尾参”项下收录了宝铎草,
所附两项化学鉴别试验指明其中含有生物碱和黄酮
类物质[2]。虽然宝铎草在民间使用广泛,但其有关
研究资料极少,其化学成分及药理作用鲜见报道,有
效部位及作用机制尚不明确。本课题针对其在民间
的适应症及相关典籍对其药效的简单描述,针对其
止咳、化痰药理作用进行研究,为其进一步的开发利
用提供试验数据和一定的理论依据。
1 材料
1. 1 药品和试剂 宝铎草采于贵州安顺,经贵阳中
医学院陈德媛研究员鉴定为百合科植物宝铎草
Disporum sessile(Thunb.)D. Don.。宝铎草提取物
(自制) :取宝铎草干燥药材 18 kg,剪碎,打成粗粉,
用 95%乙醇加热回流提取 3 次,回收乙醇得提取液
1. 8 L。将总提取液用乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层浓
缩得浸膏 120. 6 g,水层部分浓缩至 2. 0 L。复方甘
草口服溶液,太极集团重庆涪陵制药厂有限公司,批
号 10100098;复方桔梗止咳片,吉林益民堂制药有
限公司,批号 20110201;所用试剂试药均为分析纯。
1. 2 仪器 TU-1901 型紫外-可见分光光度计(北
京普析通用仪器有限责任公司) ;20 倍解剖显微镜
(美国 BAUSCH&LOMB)。
1. 3 动物 昆明种小鼠,新西兰大白兔,由贵阳医
学院实验动物中心提供,动物合格证号 SCXK(黔)
2002-0001。
2 方法[3]
2. 1 止咳作用 取体重为(20 ± 2)g 的健康小鼠,
雌雄各半,按体重随机分为 4 组,即空白对照组、复
方甘草口服溶液组(3. 33 mL·kg - 1)、宝铎草提取物
高、低剂量组(2. 5,1. 25 g·kg - 1)。灌胃给药 3 次 /
d,连续给药 5 d,末次给药 30 min 后,进行引咳试
验:将浸有浓氨水的脱脂棉球(取质量为 0. 2 g 的脱
脂棉球,吸取浓氨水 1 mL,注射于棉球上,即得)放
入倒扣的玻璃钟罩内,1 min 后,将小鼠置于玻璃钟
罩中,同时开始计时。记录小鼠引咳潜伏期(从放
入钟罩至开始咳嗽的时间)及 2 min 内小鼠的咳嗽
次数。
2. 2 祛痰作用
2. 2. 1 对小鼠气管酚红分泌量的影响 取体重为
(20 ± 2)g 的健康小鼠,雌雄各半,按体重随机分为
4 组,即空白对照组、复方桔梗止咳片组(0. 19 g·
kg - 1)、宝铎草提取物高、低剂量组(2. 5,1. 25 g·
kg - 1)。灌胃给药 3 次 / d,连续给药 5 d,末次给药
30 min 后,进行酚红分泌试验:小鼠腹腔注射 5%酚
红生理盐水溶液 0. 01 mL·g - 1体重。30 min 后,脱
颈处死小鼠,分离出气管。用 0. 5% 碳酸氢钠溶液
0. 6 mL 冲洗气管 3 次,重复 3 次,合并冲洗液。将
冲洗液离心 15 min (3 000 r·min - 1) ,取上清液,用
紫外-可见分光光度计在 546 nm 波长处测量吸光度
(A) ,根据酚红标准溶液浓度回归方程,计算冲洗液
中的酚红浓度。
2. 2. 2 对兔离体气管段纤毛运动速率的影响 取
兔用木棒敲击后脑致死,分离出气管,剪取喉头至气
管分叉处的气管段,置通氧气的台氏液中保存备用。
实验时剪取气管段约 1 cm,正中剪开,纵向分成 2
片。取单片,喉头端朝上,斜放于 37 ℃台氏液湿润
的棉花上。将一小滴印度墨汁滴于气管段下端,用
低倍解剖显微镜观察,记录墨汁颗粒运行 2 mm 所
需要的时间,然后将气管片放入 37 ℃氧饱和的台氏
液中将墨汁洗净,重复上述实验 2 次,计算每次墨汁
的运行速率和 3 次的平均值。再将气管片放入宝铎
草提取液高、中、低浓度(100,10,1. 0 g·L - 1)及复方
桔梗止咳片溶液(0. 14 g·mL - 1)中,浸泡 5 min,取
出,再重复上述实验 3 次。计算每次墨汁的运行速
率和 3 次的平均值。
3 结果
3. 1 止咳作用 乙酸乙酯层提取物的止咳试验结
果显示,低剂量及高剂量组小鼠的咳嗽次数明显减
少(P < 0. 01) ;低浓度的引咳潜伏期与空白组相比
显著差异(P < 0. 05) ,高剂量的引咳潜伏期与空白
组相比有极显著差异(P < 0. 01)。水层提取物的止
咳试验结果显示,其低剂量组的咳嗽次数与空白组
相比无显著性差异,高剂量组的咳嗽次数与空白组
相比差异显著;而低剂量组和高剂量组的引咳潜伏
期与空白组相比均无显著性差异。结果显示宝铎草
乙酸乙酯层提取物能明显延长引咳时间及减少咳嗽
次数,而水层无明显止咳效果,只有高剂量的提取物
能一定程度地减少咳嗽次数。见表 1。
3. 2 对小鼠气管酚红分泌量的影响 乙酸乙酯
高剂量组、水层高剂量组酚红分泌量与空白组相
比均具显著性差异(P < 0. 01) ,水层低剂量组与
空白组相比有显著差异(P < 0. 05) ,乙酸乙酯低
剂量组与空白组间无显著性差异。水层部分酚
红浓度均值略高于乙酸乙酯部分,但无明显差
异。结果显示,宝铎草化痰作用的有效部位在乙
酸乙酯层及水层均有分布,高剂量组的化痰效果
较为明显。见表 2。
·262·
第 18 卷第 19 期
2012 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 19
Oct.,2012
表 1 宝铎草提取物对氨水诱发小鼠实验性
咳嗽模型的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量
/ g·kg - 1
引咳潜伏期
/ s
咳嗽次数
/次
空白 - 8. 36 ± 2. 06 88. 2 ± 5. 47
乙酸乙酯层提取物 1. 25 10. 60 ± 3. 771) 78. 3 ± 8. 002)
2. 5 11. 0 ± 2. 072) 59. 9 ± 6. 802)
水层提取物 1. 25 8. 23 ± 1. 62 82. 2 ± 7. 14
2. 5 7. 07 ± 2. 02 80. 2 ± 8. 731)
复方甘草口服溶液 3. 33 10. 69 ± 2. 171) 78. 8 ± 7. 671)
注:与空白组相比1)P < 0. 05,2)P < 0. 01(表 2 ~ 3 同)。
表 2 宝铎草提取物对小鼠气管段酚红
分泌模型的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量
/ g·kg - 1
酚红浓度
/mg·L - 1
空白 - 1. 037 ± 0. 122
乙酸乙酯层提取物 1. 25 78. 3 ± 8. 00
2. 5 59. 9 ± 6. 802)
水层提取物 1. 25 82. 2 ± 7. 141)
2. 5 80. 2 ± 8. 732)
复方桔梗止咳片 3. 33 2. 165 ± 0. 215
3. 3 对兔离体气管段纤毛运动速率的影响 乙酸
乙酯低剂量、中剂量组浸泡后的气管段纤毛运动速
度与空白组相比均无显著性差异,高浓度组及阳性
组的运动速度与空白组相比均有显著性差异。水层
低剂量、中剂量组浸泡后的气管段纤毛运动速度与
空白剂量相比均无显著性差异,高剂量组及阳性药
组的运动速度与空白组相比均有显著性差异(P <
0. 05)。结果显示宝铎草乙酸乙酯层及水层低剂
量、中剂量(相当于原药材 1,10 g·L - 1)提取物溶液
对兔离体气管段的纤毛运动速度无明显影响;高浓
度(相当于原药材 100 g·L - 1)提取物溶液能显著提
高兔离体气管段的纤毛运动速度。见表 3。
表 3 宝铎草提取物对兔离体气管段
纤毛运动速度的影响(珋x ± s,n = 6)
组别
剂量
/ g·L - 1
空白组速率
(浸泡前)
/mm·min - 1
实验组速率
(浸泡后)
/mm·min - 1
复方桔梗止咳片 140 0. 572 ± 0. 040 0. 661 ± 0. 0561)
乙酸乙酯层提取物 1. 0 0. 624 ± 0. 076 0. 649 ± 0. 091
10 0. 619 ± 0. 106 0. 647 ± 0. 091
100 0. 607 ± 0. 094 0. 736 ± 0. 0801)
复方桔梗止咳片 140 0. 554 ± 0. 042 0. 670 ± 0. 0451)
水层提取物 1. 0 0. 545 ± 0. 067 0. 508 ± 0. 034
10 0. 521 ± 0. 034 0. 548 ± 0. 023
100 0. 525 ± 0. 012 0. 631 ± 0. 0281)
4 讨论
本实验所采用小鼠咳嗽模型为验证止咳作用的
经典模型,旨在针对宝铎草对咳嗽症状的疗效进行
研究。陈燕等[4]用该模型验证了止咳祛痰糖浆的
止咳作用。中医理论中的化痰是指通过润肺生津,
增加呼吸道中液体的分泌,改善呼吸道的干燥状态,
改变痰的黏稠状态。小鼠气管段酚红排泌法以酚红
的排泌量为指标观察药物的化痰作用。汪永忠
等[5]用该模型验证了咳喘平颗粒的祛痰作用。人
呼吸道存在由呼吸道黏膜纤毛柱状上皮细胞上的纤
毛和杯状细胞与黏膜下腺体分泌的黏液组成的黏液
纤毛转运系统[6]。加快呼吸道纤毛运动速率是化
痰的重要机制,本实验用兔的离体气管段纤毛运动
实验观察经宝铎草药液浸泡前后纤毛运动速率的差
别,以研究宝铎草对呼吸道纤毛运动的影响,探索其
化痰机制。
宝铎草具有较明显的止咳、祛痰作用,其止咳、
化痰作用的有效部位不尽相同,各部分提取液高、低
剂量的药效也有所差异。其止咳作用有效部位主要
集中在乙酸乙酯层;祛痰作用有效部位分散于乙酸
乙酯层及水层;高剂量组祛痰效果更明显。乙酸乙
酯层及水层高剂量组(相当于原药材 100 g·L - 1)可
显著加快兔离体气管纤毛运动速率,可推断促进呼
吸道纤毛运动、加速痰液的排出是其祛痰机制之一。
据报道通过配伍能提高中药止咳祛痰的药理作用,
宝铎草与其他民族药的配伍作用还需进一步研究。
[参考文献]
[1] 贵州省药品监督管理局 . 贵州省中药材、民族药材质
量标准[S]. 贵州:贵州科技出版社,2003:162.
[2] 梁光义 . 中药化学[M]. 北京:人民卫生出版社,
1998:171.
[3] 徐叔云,卞如濂,陈修 . 药理实验学方法[M]. 3 版 .
北京:人民卫生出版社,2001:1359.
[4] 陈燕,滕宝霞,刘玉玲 . 止咳祛痰糖浆镇咳、祛痰及平
喘的药效学研究[J]. 中国实验方剂学杂志,2007,13
(2) :20.
[5] 汪永忠,夏伦祝 . 咳喘平颗粒镇咳、祛痰、平喘药效学
研究[J]. 中国实验方剂学杂志,2006,12(6) :46.
[6] 肖永营 . 呼吸道黏膜纤毛清除率与慢性支气管炎的关
系[J]. 医学研究生学报,2001,14(6) :530.
[责任编辑 李玉洁]
·362·
马莹,等:宝铎草的止咳、祛痰作用研究