全 文 ：［收稿日期］ 20120406(009)
［基金项目］ 贵州省中药现代化与产业化资助项目(黔科合社
字［2009］5003)
［第一作者］ 江滟，博士，副教授，从事病原微生物及其防治研
究，Tel:0851-6908585，E-mail:jiangyan3313 @
sina． com
［通讯作者］ * 沈祥春，博士，教授，从事心血管系统药物药理
及中药民族药活性研究，Tel:0851-6908108，E-
mail:shenxiangchun@ 126． com
宝铎草提取物体外抗菌活性的研究
江滟1，马莹2，茅向军2，沈祥春1*
( 1. 贵阳医学院，贵阳 550004; 2. 贵州省食品药品药检所，贵阳 550004)
［摘要］ 目的:研究宝铎草提取物的体外抗菌作用。方法:运用平板打孔法分析宝铎草提取物对常见病原性细菌和单细
胞真菌的敏感性。采用微量液体稀释法检测宝铎草各提取物对常见病原性细菌和单细胞真菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小
杀菌浓度(MBC)。结果:宝铎草提取物，除水层外，对不同病原性细菌具有不同的抑制作用，其中水洗脱部分对金黄色葡萄球
菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌均有抑菌作用，95%乙醇总提物(1∶ 40)和 95%乙醇洗脱部分(1∶ 40)对金黄色
葡萄球菌具有杀菌作用。而宝铎草水层提取物对细菌和单细胞真菌均未见明显抑制或杀灭作用，所有提取物对单细胞真菌
亦均未见显著性作用。结论:宝铎草的部分提取物对所试细菌株有抑菌作用，而对单细胞真菌均未见明显的抑菌或杀灭
作用。
［关键词］ 宝铎草;抑菌;杀菌;最小抑菌浓度;最小杀菌浓度
［中图分类号］ R285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)04-0203-03
Effects of Radix et Rhizoma Dispori Extracts on Bacteria and Fungi in vitro
JIANG Yan1，MA Ying2，MAO Xiang-jun2，SHEN Xiang-chun1*
(1. Guiyang Medical College，Guiyang 550004，China;
2. Guizhou Institute for Food and Drug Control，Guiyang 550004，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the in vitro effects of Radix et Rhizoma Dispori extracts on bacteria
and fungi． Method:The effects on bacteria and fungi of Radix et Rhizoma Dispori extracts were measured by
inhibition zone diameters． The minimal inhibitory concentrations (MIC) and the minimum bactericidal
concentration (MBC) of Radix et Rhizoma Dispori extract was determined by micro-liquid dilution method．
Result:Radix et Rhizoma Dispori extracts，except for the water layer，have apparent inhibitory effect to
Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumonia． The 95% alcohol
extract (1∶ 40)and the 95% alcohol elution part (1∶ 40)could kill S． aureus． All extracts of Radix et Rhizoma
Dispori showed no inhibitory effect to Candida albicans and Cryptococcus neoformans． Conclusion:Some extracts
of Radix et Rhizoma Dispori have bacteriostatic activities，but no inhibitory effect to single-celled fungi in vitro．
［Key words］ Radix et Rhizoma Dispori;bacteriostatic effect;bactericidal activity;minimal inhibitory
concentration;minimum bactericidal concentration
呼吸道感染是导致慢性咳嗽的主要原因之一， 常引起痰液增多，导致呼吸急促、呼吸不畅甚至呼吸
道堵塞，严重者可能因痰液排出机制的缺陷引起窒
息或肺部病菌沉积，引发二次感染。抑制呼吸系统
细菌感染是防治呼吸系统疾患的重要治疗措施［1-2］。
《贵州省中药材、民族药材质量标准(2003 年
版)》中“百尾参”项下收录宝铎草，为百合科植物宝
铎草的干燥根及根茎，具润肺止咳、健脾消积之功
效，用于虚损咳喘，痰中带血，肠风下血，食积胀
满［3］。宝铎草现代药理研究未见相关报道，根据临
床及传统文献提示，该药主要用于呼吸系统感染，因
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 4
Feb．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.04.068
此，本研究采用系统分离分析指标宝铎草不同提取
部分，采用平板打孔法分析提取物对常见病原性细
菌和单细胞真菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌
浓度(MBC) ，为宝铎草临床应用及进一步的研究开
发提供实验基础。
1 材料
1. 1 宝铎草及宝铎草提取物制备 宝铎草药材购
自贵阳三桥药材市场，经贵阳中医学院陈德媛研究
员鉴定为百合科植物宝铎草 Disporum sessile
(Thunb．)D． Don．的干燥根及根茎，存证标本放置
于贵州省药检所中药室。按照系统分离制备方法，
获得下列提取物见表 1。
表 1 宝铎草提取物分离制备方法
编号 提取部位 浸膏质量 /提取物体积
1 95%乙醇总提物 1. 8 L
2 乙酸乙酯层 120. 6 g
3 水层 2. 0 L
4 水洗脱部分 300 mL
5 20%乙醇洗脱部分 200 mL
6 40%乙醇洗脱部分 52 g
7 60%乙醇洗脱部分 25 g
8 95%乙醇洗脱部分 150 mL
注:药材质量均为 18 kg。
1. 2 菌种 金黄色葡萄球菌(ATCC26112-5)、大肠
埃希菌(ATCC25922)、白念珠菌(ATCC10231)均由
中国药品生物制品检定所提供，贵阳医学院微生物
教研室保存;铜绿假单胞菌(临床分离菌株)、肺炎
克雷伯菌(临床分离菌株)、新生隐球菌(临床分离
菌株) ，贵阳医学院微生物教研室鉴定、保存。
1. 3 培养基 水解酪蛋白琼脂培养基(MH琼脂培
养基) ，杭州天和微生物试剂有限公司，批号
20080305。按 3. 8 g·100 mL －1配制，121 ℃ 20 min
灭菌，贮于 4 ℃备用。水解酪蛋白培养基(MH液体
培养基) ，杭州天和微生物试剂有限公司，批号
20080707。按 2. 5 g·100 mL －1配制，121 ℃ 20 min
灭菌，贮于 4 ℃备用。沙保弱琼脂培养基和沙保弱
培养基，按蛋白胨 1%，葡萄糖 2%，(琼脂粉 1. 5%)
配制，115 ℃ 10 min灭菌，贮于 4 ℃备用。
1. 4 试剂及对照用抗菌药物 注射用头孢曲松钠，
中诺药业有限公司，批号 110345015;氟康唑，Sigma
公司，批号 060M47071;二甲亚砜，上海润捷化学试
剂有限公司，批号 200305122。
1. 5 实验设备 303A-4 型数显电热培养箱(武汉
精华科教仪器有限公司) ，202AV-2 型不锈钢立式电
热干燥箱(武汉精华科教仪器有限公司) ，TD10002
型电子天平(余姚市金诺天平仪器有限公司)。
2 方法
2. 1 对不同菌株抑菌圈直径的测定［4-5］ 取 MH琼
脂培养基和沙保弱培养基分别倾注在直径 7. 5 cm
的平皿内(10 mL /平板) ，制备成 MH 琼脂平板和沙
保弱琼脂平板备用。将金黄色葡萄球菌、肺炎克雷
伯菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌的18 h培养物和白
色念珠菌、新生隐球菌的 24 h 培养物分别用灭菌生
理盐水配制成 1 × 108 CFU·mL －1的菌液。取 100 μL
菌液加于相应平板表面，用 L 棒涂布均匀。用打孔
器在各平板上打孔，直径 5 mm /孔。将各提取物 20
μL分别加于各平板的孔内，1，3，4，5，8 号提取物
加入 20 μL 原液，2，6，7 号提取物加入的量为 0. 1
mg，每药做 3 个复孔。并以双蒸水和 0. 1% DMSO
作为阴性对照，以 40 μg 头孢曲松钠和 20 μg 氟康
唑作为阳性对照。各培养基平板置恒温孵育箱内，
37 ℃培养，24 h后观察抗细菌作用结果，48 h 后观
察抗真菌作用结果。测量各孔周围的抑菌圈直径，
结果以 3 个抑菌圈直径的平均值表示，以判断提取
物对该菌种的抑菌作用。
2. 2 最低抑菌浓度(MIC)试验［4-5］ 将提取物分别
用无菌 MH液体培养基和沙保弱液体培养基稀释，
使 2，6，7 号提取物在培养基内的终质量浓度 5，
2. 5，1. 25，0. 625 g·L －1，使 1，3，4，5，8 号提取物
在培养基内的终浓度 1∶ 10，1∶ 20，1∶ 40，1∶ 80。将
不同浓度提取物加入 96 孔板中，90 μL /孔。用无菌
生理盐水稀释各菌种的 24 h 培养物，各加 10 μL于
含不同浓度提取物的肉汤以及不含提取物的培养基
中，菌细胞为 1 × 105 CFU·mL －1。置孔板于恒温孵
育箱内，37 ℃培养，24 h后观察抗细菌作用结果，48
h后观察抗真菌作用结果。观察培养基中细菌或真
菌的生长情况判断提取物对该菌种的抑菌作用，以
完全无菌生长的提取物最高稀释度作为该提取物的
最低抑菌浓度。
2. 3 最低杀菌浓度(MBC)试验［4-5］ 取 MIC 试验
中无菌生长的培养物 10 μL，接种于不含提取物的
相应琼脂培养基上。各培养基平板置恒温孵育箱
内，37 ℃培养，24 h后观察抗细菌作用结果，48 h 后
观察抗真菌作用结果。观察培养基上细菌的生长情
况判断提取物对该菌种的杀菌作用，以完全无菌生
长的提取物最高稀释度作为该提取物的最低杀菌
浓度。
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 4
Feb．，2013
3 结果
3. 1 对不同菌株的抑菌作用(抑菌圈直径的测定)
实验结果显示宝铎草提取物 2，4，8 对不同病原性
细菌具有抑制作用，各提取物对单细胞真菌均无作
用(表 2)。
表 2 宝铎草提取物对常见病原菌的抑制作用(n = 3)
提取物
提取物抑菌圈直径 /mm
金黄色
葡萄
球菌
大肠
埃希菌
肺炎克
雷伯菌
铜绿假
单胞菌
白念
珠菌
新生
隐球菌
1 0 0 0 0 0 0
2 7 0 7. 6 8. 2 0 0
3 0 0 0 0 0 0
4 11 7 10. 5 10. 5 0 6
5 0 0 0 0 0 0
6 0 0 0 0 0 0
7 0 0 0 0 0 0
8 0 0 9. 6 10. 5 0 0
双蒸水 0 0 0 0 0 0
0. 1%DMSO 0 0 0 0 0 0
头孢曲松 27. 7 26. 5 12 21 － －
氟康唑 － － － － 22 20
3. 2 MIC实验结果 实验结果显示，宝铎草提取物
1，2，4，5，6，7 和 8 对不同病原性细菌具有一定
抑菌作用，各提取物对单细胞真菌均无作用(表 3)。
表 3 宝铎草提取物对常见病原菌 MIC的影响
提取物
MIC
金黄色
葡萄球菌
大肠
埃希菌
铜绿
假单胞菌
肺炎
克雷伯菌
白念
珠菌
新生
隐球菌
1 1∶ 40 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
2 2. 5 2. 5 ＞ 5 2. 5 ＞ 5 ＞ 5
3 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
4 1∶ 40 1∶ 40 1∶ 20 1∶ 20 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
5 1∶ 40 1∶ 40 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
6 1. 25 1. 25 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5
7 1. 25 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5
8 1∶ 80 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
3. 3 MBC实验结果 实验结果显示，仅宝铎草提
取物 1 稀释度为 1∶ 40 时可杀灭金黄色葡萄球菌;提
取物 4 对金黄色葡萄球菌的 MBC 为 1 ∶ 40，对铜绿
假单胞菌的 MBC为 1∶ 20(表 4)。
4 讨论
中草药几千年来为人类的健康作出了重大贡
献，在现代预防和控制细菌性感染疾病方面也发挥
了积极作用。由于中药的特殊性，细菌较少对中药
产生耐药性，因此，研究和开发抗菌中药对解决耐药
菌株的产生和抗生素短缺问题具有重要意义［3］。
表 4 宝铎草提取物对常见病原菌的MBC的影响
提取物
MBC
金黄色
葡萄球菌
大肠
埃希菌
铜绿
假单胞菌
肺炎
克雷伯菌
白念
珠菌
新生
隐球菌
1 1∶ 40 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
2 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5
3 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
4 1∶ 40 ＞ 1∶ 10 1∶ 20 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
5 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
6 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5
7 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＞ 5
8 1∶ 40 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10 ＞ 1∶ 10
民族药宝铎草临床广泛应用于呼吸、消化等系
统疾患，具有润肺止咳、健脾消积功效。本研究证
实，宝铎草提取物，除水层外，均对金黄色葡萄球菌
具有一定的抑菌作用，其中 95%乙醇总提物和 95%
乙醇洗脱部分对金黄色葡萄球菌具有杀菌作用;这
些提取物对不同病原性细菌具有不同的抑制作用，
其中水洗脱部分对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜
绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌均有一定的抑制作用。
宝铎草的某些提取物对革兰阳性菌和革兰阴性菌均
具有抑菌作用，中药直接杀菌作用弱于西药抗生素，
而中药复方具有配伍协同，整体调节的作用特点，
抗细菌耐药性方面具有自身的优势，为开发其广泛
用途奠定了实验基础。
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［责任编辑 李玉洁］
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