全 文 ：2016年第 29卷第 3期
中国科技 核心期刊
方 药·药理研究
松潘乌头(Aconitum sungpanenseHand.-Mazz.)
为毛茛科乌头属植物，以根入药，主要产于甘肃、
陕西、宁夏、山西、青海、四川。本品味辛、苦，性温，
有大毒，具有祛风止痛、散瘀消肿之功效。民间用
于跌打损伤、风湿性和类风湿性关节炎等疾病。研
究发现松潘乌头中主要化学成分为生物碱，其中
二萜类生物碱是其主要有效成分，也是其有毒成
分［1-2］。目前，松潘乌头研究主要集中在化学成分、
药理等作用方面。但其口服给药的安全性文献报
道极少，现就松潘乌头总碱的急性毒性进行研究，
以期为新药研发与临床安全、合理用药等提供依
据。
1 材料与方法
1.1 实验动物KM小鼠，SPF级，雌雄各半，体质
量 18～22 g，实验动物质量合格证号 SCXK(甘)
2011-0001，由甘肃中医药大学实验动物中心提
供。温度20～24℃，湿度40%～50%。小鼠每笼10只，
雌雄分笼饲养，自由饮水，食固体饲料为SPF级，
购自北京科奥协力饲料有限公司。
1.2 药物与试剂松潘乌头采自甘肃天水，由甘
肃林业职业技术学院任继文教授鉴定为毛茛科乌
头属植物；氯仿、乙醚、乙醇、吐温 -80 均为分析
纯。
1.3 仪器KH-500DE 型数控超声波清洗器(昆
山禾创超声仪器有限公司)；RE-2000型旋转蒸发
仪(上海亚荣生化仪器厂)；JA2603B电子天平(上
海精科天美科学仪器有限公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 松潘乌头总碱的制备取松潘乌头药材，
粉碎后过60目筛，用10%碳酸钠溶液浸润，加入5
松潘乌头总碱半数致死量的实验研究 *
张 政 1，邓月婷 1，王小芳 1，任 远 2，张喜民 1△
1 甘肃陇神戎发药业股份有限公司，甘肃 兰州 730101；2 甘肃中医药大学
［摘 要］目的:研究松潘乌头总碱对小鼠的半数致死量(LD50)，为药理实验和临床安全合理用药提供依
据。方法:将松潘乌头粉碎后，用碳酸钠溶液浸润，经乙醇超声提取，硫酸溶解，氨水调pH，用乙醚：氯仿(3：1)
混合溶液萃取，得松潘乌头总碱。根据预实验结果将60只小鼠分为6组，按照200、160、128、102.4、81.9、
65.5mg/kg的剂量一次性灌服小鼠后观察24小时内情况。记录小鼠中毒症状及死亡情况，观察松潘乌头总碱
的急性毒性。结果:松潘乌头总碱经口服给药小鼠的LD50为119.78mg/kg，其95%可信区间为103.86～139.28
mg/kg。结论:松潘乌头总碱有中等毒性，其半数致死量为119.78mg/kg。
［关键词］松潘乌头总碱；小鼠；半数致死量
［中图分类号］R285.5［文献标识码］A ［文章编号］1004-6852(2016)03-0019-03
Experimental Study on Lethal Median Dose of Total Alkaloids of SongPan WuTou
ZHANG Zheng1, DENG Yueting1, WANG Xiaofang1, REN Yuan2, ZHANG Ximin1△
1 Gansu Longshen Rongfa Pharmaceutical Company, Ltd., Lanzhou 730101, China;
2 Gansu University of Traditional Chinese Medicine
Abstract Objective: To provide the reference for pharmacological experiment and rational medication in
clinic by study lethal median dose of total alkaloids of SongPan WuTou (Aconitum sungpanense Hand.-Mazz.).
Methods: Total alkaloids of SongPan WuTou were obtained by smashing SongPan WuTou, soaking it in sodium
carbonate solution, processing by ethanol ultrasonic extraction, dissolving in sulphuric acid, adjusting the pH of the
solution, extracting by the mixture of aether and chloroform. According to the results of preliminary experiment,
sixty mice were randomized into six groups, the conditions within 24 hours were observed after the mice received
gavage of total alkaloids of SongPan WuTou according to the doses: 200, 160, 128, 102.4, 81.9 and 65.5 mg/kg.
Poisoning symptoms and the death of the mice were recorded to observe acute toxicity of total alkaloids of SongPan
WuTou. Results: LD50 of total alkaloids of SongPan WuTou was 119.78mg/kg, its 95% credibility intervals were from
103.86to139.28mg/kg.Conclusion:Totalalkaloidsof SongPanWuToushowmoderatetoxicity,anditsLD50is119.78mg/kg.
Keywords total alkaloids of SongPan WuTou; mice; lethal median dose
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Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2016 Vol.29 No.3
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倍量75%乙醇于超声中提取30分钟，重复提取3
次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加入10倍量
2%硫酸溶液溶解并过滤，过滤后滤液中加入氨水
调pH至9～10，用乙醚∶氯仿(3∶1)混合溶液按1∶
萃取3次，合并萃取液，减压回收至少量，转移至
蒸发皿中蒸干，刮取浸膏至称量瓶中，放置于硅胶
真空干燥器中至恒重，备用。用酸性染料比色法测
定其生物碱含量为74.35%。
1.4.2 松潘乌头总碱急性毒性实验研究
1.4.2.1 松潘乌头总碱的配制 精密称取
1.000g松潘乌头总碱干燥品，加入新制的5%吐
温-8050mL。超声至完全溶解，放冷称重，补足重
量，用封口膜密封，于4℃冰箱保存，为20 mg/mL
母液。实验时采用“低比稀释法”配药，用5%吐温
-80配制系列浓度药液。
1.4.2.2 急性毒性预实验 目的在于先确定引
起0%(Dn)和100%(Dm)死亡率剂量的所在范围。取
小鼠20只，分为5组，每组4只，禁食12小时，自
由饮水。按400、283、200、141、 00mg/kg的给药
剂量1次灌胃给药，记录和观察给药后24小时内
的死亡情况和中毒反应，结果发现200mg/kg时
小鼠全部死亡。第2次预实验，取小鼠20只，分为
5组，每组4只，按200、140、98、68.6、48mg/kg的
给药剂量一次灌胃给药，观察并记录给药后24小
时内的死亡情况和中毒反应，结果剂量为
68.6mg/kg时，4只小鼠全部存活，确定了 Dn 为
68.6mg/kg，Dm为200mg/kg。
1.4.2.3 急性毒性实验 预实验测得 Dn 为
68.6mg/kg，Dm为200mg/kg，二者相差倍数为3，
按表1选择分组及剂量比值，查表以K=0.8，N=6
为宜。因此 6 个剂量组的剂量分别为 200、160、
128、102.4、81.9、65.5mg/kg。将60只小鼠随机
分为6组，每组10只，雌雄各半，用苦味酸标记。
实验前禁食不禁水12小时，一次性灌胃给药，给
药容积为0.03mL/g，给药后7天内密切观察各组
动物反应，见表1。
2 结果
2.1 小鼠灌胃后一般活动情况及死亡情况小
鼠中毒症状首先是自发活动减少，接着出现腹式
呼吸、呼吸急促、运动失调等，部分小鼠全身被毛
湿润，最终出现抽搐、角弓反张后死亡。中毒症状
出现的时间集中在给药后15分钟内，死亡时间集
中在给药后4小时内。观察过程中发现症状较轻
的小鼠会在出现毒性症状后逐渐恢复。死后立即
解剖，肉眼可见小鼠胃充盈，肠管胀气，余未见异
常。不同剂量的松潘乌头总碱致死小鼠数量统计，
见表2。
表2 各组小鼠死亡情况
组别 只数 剂量/(mg·kg-1) 死亡数/只 死亡率/%
1 10 200 10 100.00
2 10 160 7 70.00
3 10 128 5 50.00
4 10 102.4 4 40.00
5 10 81.9 2 20.00
6 10 65.6 0 0.00
2.2 半数致死量按Bliss法统计各组死亡鼠
数和死亡率，结果用SPSS软件计算［3］松潘乌头总
生物碱的 LD50为 119.78 mg/kg，95%可信区间为
103.86～139.28mg/kg。
3 讨论
松潘乌头在中医古籍中已有记载，《神农本草
经》曰：“主中风，恶风，洗洗出汗，除寒湿痹，咳逆
上气，破积聚寒热”；《药类法象》曰：“治风痹血痹，
半身不遂，行经药也。”现代药理证明，松潘乌头总
碱有镇痛、解热、抗炎作用［4］，其镇痛作用持续时
间长且无耐受性和身体依赖性［5］。因其毒性，松
潘乌头的应用受到了限制，但其显著的疗效又吸
引着药学工作者的关注，因此为进一步开发利用，
有必要对其有效成分进行分析并提取纯化，达到降
低毒性，提高疗效的目的。相关研究对其半数致死
量进行分析［3］，小鼠口服LD50为(8.66±0.58)mg/kg
(P=0.95)，为剧毒物，起药效作用的剂量为0.5～
3.0mg/kg，该文献中采用的松潘乌头总碱(含量
1.14%)用药安全性较低，不利于进一步开发。本研
究对松潘乌头进行提取纯化，得生物碱含量为
表1 选择分组及剂量比值
剂量比值(1/K) K值 0.6 0.65 0.7 0.75 0.80 0.85 0.88 0.90
2倍左右 - - - 3～4组 4组 5～6组 6～7组 7～8组
3倍左右 - 3～4组 4组 4～5组 5组 6～8组 9组 -
最高、最低致死量 4倍左右 3～4组 4～5组 5组 5～6组 7～8组 9组 - -
相差的倍数(Dm/Dn) 6倍左右 4～5组 5～6组 6组 7～8组 9组 10组 - -
11倍左右 5～6组 6～7组 8组 9～10组 10组 - - -
14倍左右 6～7组 7组 8～9组 10组 - - - -
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74.35%的松潘乌头总碱，通过实验测得松潘乌头
总碱对小鼠的LD50为 119.78 mg/kg，按急性毒性
分级标准分为中等毒性。同期进行的热板实验与
醋酸扭体实验结果表明给药剂量为LD50的1/40，
即3mg/kg时能显著提高小鼠痛阈、抑制小鼠扭
体反应，12mg/kg时镇痛作用与吗啡相当，该工艺
制备的松潘乌头总碱安全窗大，为该药物制剂的
后续开发及应用提供了安全保证。
参考文献
［1］ 李洪刚，李广义.松潘乌头二萜生物碱的研究［J］.药学学
报，1988，23(6):460-461.
［2］ 王锐，倪京满，胡兆勇，等.松潘乌头中的二萜生物碱研究［J］.
兰州医学院学报，1991，17(4):201-204.
［3］ 周一平.用SPSS软件计算新药的LD50［J］.药学进展，2003，
27(5):314-316.
［4］ 杨军英，党月兰.松潘乌头总碱的抗炎解热作用［J］.中国临
床药理学与治疗学，2003，8(4)：441-443.
［5］ 党月兰，胡兆勇，吴福祥.松潘乌头总碱的镇痛作用和身体
依赖性的实验研究［J］.中国药物依赖性通报，2005，2(4):
242-246.
收稿日期：2014-12-28
*基金项目：兰州市科技局项目兰州市2011年创新人才团队
培育计划(编号2011-1-140)。
作者简介：张政(1985—)，女，硕士学位，工程师。研究方向：
新药研究与开发。
△通讯作者：张喜民(1956—)，男，正高级工程师。研究方向：
新药研究与开发。
安坤种子丸对胚泡着床障碍
小鼠子宫内膜HOXa-10表达的影响*
王 磊，田 莉，杜 敏
甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050
［摘 要］目的：观察安坤种子丸对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HOXa-10表达的影响，探讨其对胚泡着
床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响及其机制。方法：将有规律动情周期的雌性小鼠随机分为正常组、模型组和
中药组，每组25只。先期用安坤种子丸对中药组小鼠进行灌胃，雌、雄合笼后观察雌鼠阴栓率，妊娠第4天对
中药组和模型组小鼠颈背部皮下注射米非司酮进行干预，制成胚泡着床障碍模型；于妊娠第5、6天处死小鼠,
留取子宫标本。采用Q-PCR技术和免疫组化方法检测小鼠子宫内膜HOXa-10基因及蛋白的表达；同时制备HE
切片以观察各组小鼠子宫内膜形态结构的变化，统计分析各组间妊娠率、平均着床胚泡数及着床率等指标的变化。
结果：安坤种子丸可以提高胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HOXa-10基因及蛋白的表达，妊娠率、平均着床胚泡数
及着床率等指标虽低于正常组，但高于模型组。结论：安坤种子丸可能通过提高雌鼠子宫内膜上HOXa-10基因
及蛋白的表达，一定程度上改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性，促进胚泡着床。
［关键词］子宫内膜容受性；胚泡着床；HOXa-10基因；HOXa-10蛋白；安坤种子丸
［中图分类号］R714［文献标识码］A ［文章编号］1004-6852(2016)03-0021-05
Influence of AnKun ZhongZi Pills on the Expressions of Endometrium HOXa-10
in the Mice with Embryo Implantation Dysfunction
WANG Lei, TIAN Li, DU Min
Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730050, China
Abstract Objective: To explpre the influence of AnKun ZhongZi pills on the expressions of endometrium
HOXa-10 of the mice with embryo implantation dysfunction, its influence and the mechanism of endometrial recep-
tivity of the mice. Methods: Female mice who present regular oestrous cycles were randomly allocated to the normal
group, the model group and herb group, 25 mice each group. The mice in the herb group accepted intragastric ad-
ministrationof AnKun ZhongZi pills in advance, vaginal plug rates of female mice were observed after the female
and male mice were kept in one cage, the mice were intervened by subcutaneous injection of mifepristone at the
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